本發(fā)明專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及組合物及其用途、胎盤保存制劑及其制備方法。本發(fā)明專利技術(shù)首次采用了臍血漿作為胎盤間充質(zhì)干細胞保存液的營養(yǎng)成分，不僅為種子細胞提供多元的營養(yǎng)物質(zhì)，維持細胞活力，還能很好的胎盤間充質(zhì)干細胞原有細胞形態(tài)及生物特性。添加了N-乙酰半胱氨酸、維生素C等還原劑和抗氧化劑，大大的提高了胎盤間充質(zhì)干細胞的抵抗能力。在24h內(nèi)仍能很好的維持胎盤間充質(zhì)干細胞的活力。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別涉及。
技術(shù)介紹
間充質(zhì)干細胞是干細胞的一個研宄分支，干細胞是一類具有自我復(fù)制和多向分化 能力的細胞，它們可以不斷地自我更新，并在特定條件下轉(zhuǎn)變成為一種或多種構(gòu)成人體組 織或器官的細胞。隨著間充質(zhì)干細胞及其相關(guān)技術(shù)的日益成熟，臨床研宄已經(jīng)在許多國家 開展。其作為種子細胞，臨床上主要用于治療機體無法自然修復(fù)的組織細胞和器官損傷的 多種難治性疾病；作為免疫調(diào)節(jié)細胞，治療免疫排斥和自身免疫性疾病。研宄發(fā)現(xiàn)，間充質(zhì) 干細胞主要來源于骨髓、臍帶血和臍帶組織、胎盤組織、脂肪組織等。相較于其他干細胞，胎 盤是目前證實干細胞的最佳來源。 但是，胎盤在離體情況下活力在短時間內(nèi)迅速下降，這直接影響了分離后的細胞 質(zhì)量。種子細胞的活力如何維持離體胎盤間充質(zhì)干細胞的活性成為了首要解決的問題。在 此之前，人們在DMEM/F12等基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加青霉素、鏈霉素、人血白蛋白等物質(zhì) 用于保存離體胎盤。但是由于營養(yǎng)成分單一、抗生素種類過多且濃度大等原因，導(dǎo)致種子細 胞在長期保存或運輸中出現(xiàn)活力低下、甚至死亡等現(xiàn)象。 隨后，人們進一步改善保存液的組成體系，以無機離子構(gòu)成的緩沖液的基礎(chǔ)上添 加數(shù)種氨基酸和抗生素以維持離體胎盤細胞活性、降低染菌率。這些措施雖然在較長時間 內(nèi)很好的維持了種子細胞的活性。但保存液的成分復(fù)雜，配制過程繁瑣，不能便捷的應(yīng)用。 為了進一步的適應(yīng)臨床應(yīng)用需要，開發(fā)一種營養(yǎng)成分多元且方便配制的胎盤保存液成為了 當(dāng)務(wù)之急。 現(xiàn)有保存液中添加多種抗生素，雖然能降低染菌幾率，但對胎盤干細胞存在一定 的毒性。且往往添加一定量的氨基酸、人血白蛋白為離體胎盤提供營養(yǎng)，但是營養(yǎng)成分單一 且成本較高。同時，現(xiàn)有保存液在配制時需要經(jīng)過稱量成分，滅菌等步驟，操作繁瑣。
技術(shù)實現(xiàn)思路
有鑒于此，本專利技術(shù)提供一種。本專利技術(shù) 提供的胎盤保存液顯著（P < 0. 05)提高了胎盤間充質(zhì)干細胞的抵抗能力。在24h內(nèi)仍能 很好的維持胎盤間充質(zhì)干細胞的活力。 為了實現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)提供以下技術(shù)方案： 本專利技術(shù)提供了一種組合物，包括緩沖液、抗血凝劑、血漿、雙抗、氨基酸和維生素。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，組合物包括PBS、枸櫞酸鈉、血漿、雙抗、N-乙酰 半胱氨酸和維生素 C。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，所述PBS中含有Ix~2x枸櫞酸鈉緩沖液、 5%~10% (v/v)的臍血漿、Ix~2x雙抗、終濃度為0. 01~0. lmg/mL的罌粟堿、終濃度為 1~5mmol/L的N-乙酰半胱氨酸溶液、終濃度為0. 5~5mg/mL的維生素 C溶液。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，組合物中所述枸櫞酸鈉緩沖液的制備方法為： 取枸橡酸鈉26. 3質(zhì)量份、枸橡酸粉末3. 27質(zhì)量份、葡萄糖12. 7質(zhì)量份、磷酸二氫鈉4. 44 質(zhì)量份、腺嘌呤〇. 55質(zhì)量份，溶于400質(zhì)量份的水中，混合，獲得5倍枸櫞酸鹽緩沖溶液。 枸櫞酸鹽主要用于止血學(xué)檢驗及血沉的測定。因其毒性小，也用于輸血保養(yǎng)液 中。其抗凝機制是枸櫞酸鈉根離子與血中鈣離子生成難解離的可溶性絡(luò)合物枸櫞酸鈣，此 絡(luò)合物易溶于水但不易解離，凝血過程受到抑制，從而阻止血液凝固，用于體外抗凝血。其 反應(yīng)式為Na 3C6H507+Ca2+- CaC 6H5+3Na+。其鹽類主要是鈉鹽。枸緣酸鈉有Na3C6H 5O7 · 2H20 和 Na3C6H5O7 · 5· 5H20 種晶體，通常用前者配制 0· 129mol/L(3. 8% )或 0· 109mol/L(3. 2% ) 的血溶液，與血液按1:9使用。對于用于監(jiān)測口服華法令等抗凝劑治療的患者，測定PT、 APTT所用的枸緣酸鈉濃度（3. 2%或3. 8% )不應(yīng)隨意改變，因為可能影響到國際標(biāo)準(zhǔn)化比 值（INR)。一般用濃度0· 129mol/L的枸緣酸鈉比用0· 109mol/L濃度時INP值要高些，另外 對不同來源的凝血活酶試劑，對同一正常人或患者血漿的凝固時間可以相差很大。因此每 個實驗室所使用的凝血活酶試劑的來源應(yīng)盡可能恒定，配制操作方法應(yīng)規(guī)范化，否則會使 凝固時間延長或縮短，或使正常值無規(guī)律性。有條件的實驗室可采用緩沖抗凝劑，這種試劑 對標(biāo)本經(jīng)冷凍保存后再進行分析更為適宜。緩沖劑的作用是維持血漿恒定pH值，防止易變 因子失活。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，組合物中所述臍血漿的制備方法為：取臍血，于 2500rpm離心15min，吸取上層淡黃色血漿，4°C保存?zhèn)溆谩?在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，組合物中所述N-乙酰半胱氨酸溶液的制備方 法為：取N-乙酰半胱氨酸，溶于水中，形成5mmol/L的維生素 C溶液。 PBS是磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline)-般作為溶劑，起溶解保護試 劑的作用。它是生物化學(xué)研宄中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HP04、KH2P04、 NaCl和KC1，由于Na2HP04和KH2P04它們有二級解離，緩沖的pH值范圍很廣；而NaCl和 KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補加 lmmol/L CaC12和0. 5mmol/L MgC12,以提供雙價陽離子。 PBS 緩沖液（ρΗ7· 2 ~7. 4) :NaCl 137mmol/L，KCl 2. 7mmol/L，Na2HP0410mmol/L， KH2P042mmol/L PBS IL 配方： 氯化鈉（NaCl)，8g 氯化鉀（KCl)，0· 2g 磷酸氫二鈉（Na2HP04)，I. 42 ~I. 44g 磷酸二氫鉀（KH2P04)，0· 24 ~0· 27g 調(diào) pH 7. 2 ~7. 4,定容 IL 然后高壓蒸汽滅菌，室溫保存。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，組合物中所述維生素 C溶液的制備方法為：取 維生素 C，溶于水中，獲得0. 5mg/mL的維生素 C溶液。 本專利技術(shù)還提供了所述組合物在制備胎盤保存制劑中的應(yīng)用。 本專利技術(shù)還提供了一種胎盤保存制劑，包括所述組合物。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，胎盤保存制劑為保存液。 本專利技術(shù)還提供了一種所述的胎盤保存制劑的制備方法，取所述抗血凝劑、所述血 漿、所述雙抗、所述氨基酸和所述維生素溶于所述緩沖液。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，所述的胎盤保存制劑的制備方法為取枸櫞酸 鈉、血漿、雙抗、N-乙酰半胱氨酸和維生素 C溶于PBS中。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，所述的胎盤保存制劑的制備方法為：PBS中含 有Ix~2x枸櫞酸鈉緩沖液、5%~10% (v/v)的臍血漿、Ix~2x雙抗、終濃度為0. 01~ 0. lmg/mL的罌粟堿、終濃度為1~5mmol/L的N-乙酰半胱氨酸溶液、終濃度為0. 5~5mg/ mL的維生素 C溶液。 本專利技術(shù)還提供了一種胎盤的保存方法，采用所述的胎盤保存制劑保存所述胎盤。 在本專利技術(shù)的一些具體實施方案中，胎盤的保存方法具體為取胎盤與所述胎盤保存 制劑混合，4°C保存。 本專利技術(shù)通過研宄發(fā)現(xiàn)：該保存液用于維持胎盤間充質(zhì)干細胞活率的關(guān)鍵是提供合 適的保存環(huán)境及營養(yǎng)供給，保證離體胎盤在保存液中長時間的維持活率。因此保存液中的 成分和運輸過程中各條件成為提高種子細胞活率至關(guān)重要的因素。本專利技術(shù)改進了保存液本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種組合物，其特征在于，包括緩沖液、抗血凝劑、血漿、雙抗、氨基酸和維生素。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王一飛，陳海佳，葛嘯虎，盧瑞珊，王小燕，李平，馬巖巖，
申請(專利權(quán))人：廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44
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