【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫用材料，尤其涉及一種近紅外ii區有機小分子及其納米探針和其在骨肉瘤手術切緣陽性檢測中的應用，具體涉及近紅外化學發光探針在骨肉瘤影像診斷領域中的應用。
技術介紹
1、骨肉瘤是骨惡性腫瘤中最多見的一種，是從間質細胞系發展而來，腫瘤迅速生長是由于腫瘤經軟骨階段直接或間接形成腫瘤骨樣組織和骨組織。典型的骨肉瘤源于骨內，另一與此完全不同類型的是與骨皮質并列的骨肉瘤，源于骨外膜和附近的結締組織。目前骨肉瘤的治療方法以手術為主，其在骨肉瘤切除后，判斷切緣是否陽性依靠術中冰凍切片，但該方法只能選擇性地送檢部分組織，無法檢測整個切緣，且需要等待20-30分鐘，不具有實時性。
2、目前開發了各種基于苯并噻二唑結構的近紅外ii區(nir-ii，1000-1700nm)有機小分子(例如btd540、bbtd700、ir-bgp6、bbtd-tp等)，其可應用于在生物成像和治療中。上述近紅外ii區有機小分子通常用于構建近紅外ii區光致發光的納米材料用于成像引導下的腫瘤切除，利用納米材料在腫瘤中的富集效應，在外界光源激發下，依據腫瘤和正常組織間不同的信噪比來區分腫瘤和正常組織，以判斷腫瘤組織是否被清除，但上述光致發光的熒光導航需要外界激發光源，而機體在外部激發光下存在自發熒光，難以對腫瘤組織和正常組織進行精細的區分。
3、為了使發射波長要達到nir-ii，有機小分子化合物的結構設計及其合成至關重要；為了避免熒光納米材料存在的問題，如何實現有機小分子化合物與化學發光相結合也是必須要解決的問題；為了可實時對手術切緣進
技術實現思路
1、為了克服現有技術中存在的至少一個問題，本專利技術開發設計了一種擁有近紅外ii區發射波長的有機分子，且其激發態和常規狀態的能級差與化學發光中間產物相近，有利于后續化學發光納米材料的構建；利用化學發光原理，將上述有機分子與化學發光底物構建成近紅外ii區化學發光納米探針，避免使用外部激發光成像的光致發光；且可在化學發光納米探針修飾pd-l1抗體以增強腫瘤靶向性，可在腫瘤切除后在整個切緣局部使用，實時檢測切緣是否有腫瘤殘留。
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、本專利技術的第一個方面是提供一種近紅外ii區有機小分子，所述近紅外ii區有機小分子為bbtd14，其化學結構如下所示：
4、
5、本專利技術的第二個方面是提供一種近紅外ii區有機小分子的合成方法，所述近紅外ii區有機小分子為bbtd14，其合成路線為：
6、
7、步驟s1、將化合物1、n,n-二苯基-4-(三丁基錫基)苯胺、四(三苯基膦)鈀按預定比例溶解在甲苯中常溫反應18～30小時(優選20～28小時，更優選24小時)，獲得化合物2；
8、步驟s2、將化合物2分散于thf溶液中，加入-85～-70℃(優選-80～-75℃，更優選-78℃)的正丁基鋰溶液，在-85～-70℃(優選-80～-75℃，更優選-78℃)下反應0.5～2小時(優選0.8～1.5小時，更優選1小時)后，加入三丁基氯化錫(優選攪拌20～40分鐘，更優選攪拌30分鐘)，室溫反應1～4小時(優選1.5～3小時，更優選2小時)，獲得化合物3；
9、步驟s3、將化合物3、化合物4、三(二芐基丙酮)二鈀、三(鄰甲基苯基)磷膦溶于甲苯混合，脫氣15～60分鐘(優選20～40分鐘，更優選30分鐘)；在氮氣氣氛中于100～150℃下反應36～60小時(優選120～140℃攪拌反應42～54小時，更優選130℃攪拌反應48小時)，得到有機小分子bbtd14。
10、進一步地，所述步驟s1中，化合物1、n,n-二苯基-4-(三丁基錫基)苯胺、四(三苯基膦)鈀的摩爾比為10～15：8～12：0.05～0.4；優選摩爾比為11.5～13.5：9～11：0.1～0.3；更優選摩爾比為12.6：10.2：0.17。
11、進一步地，所述步驟s1中，溶劑甲苯的用量以能完全溶解及混勻各反應物為宜，其用量可為20～80ml，優選30～60ml，更優選40ml。
12、進一步地，所述步驟s2中，化合物2、正丁基鋰、三丁基氯化錫的摩爾比為4～6：6～10：6～10；優選摩爾比為4.5～5.5：7～9：7～9；更優選摩爾比為5.2：8.0：8.0。上述正丁基鋰溶液為將正丁基鋰分散在己烷中，其濃度可調，優選為1.59m。
13、進一步地，所述步驟s2中，溶劑thf溶液的用量以能完全溶解及混勻各反應物為宜，其用量可為4～20ml，優選8～15ml，更優選10ml。
14、進一步地，所述步驟s3中，化合物3、化合物4、三(二芐基丙酮)二鈀、三(鄰甲基苯基)磷膦的摩爾比為0.5～2：0.1～0.4：0.01～0.04：0.1～0.4；優選摩爾比為0.8～1.5：0.2～0.3：0.02～0.03：0.15～0.3；更優選摩爾比為1：0.25：0.025：0.2。
15、進一步地，所述步驟s3中，溶劑甲苯的用量以能完全溶解及混勻各反應物為宜，其用量可為0.5～4ml，優選0.8～2ml，更優選1.5ml。
16、本專利技術的第三個方面是提供一種由第一個方面中任一所述的近紅外ii區有機小分子、或第二個方面中任一所述的合成方法制得的近紅外ii區有機小分子制備的納米探針。
17、進一步地，所述納米探針為近紅外ii區化學發光納米探針。可理解的是，上述近紅外ii區有機小分子也可制備成近紅外ii區熒光納米探針。
18、進一步地，所述近紅外ii區化學發光納米探針的制備方法包括：在四氫呋喃溶液中溶解羧基化f127、有機小分子bbtd14和雙草酸酯，充分混合并蒸發有機溶劑，加入pbs緩沖液，使其自組裝成納米膠束，獲得所述化學發光納米探針。
19、進一步地，羧基化f127、有機小分子bbtd14和雙草酸酯的質量比為80～120：0.1～0.8：20～60；優選質量比為90～115：0.1～0.5：30～50；更優選質量比為100：0.3：40。
20、進一步地，溶劑四氫呋喃溶液的用量以能完全溶解及混勻各反應物為宜，其用量可為2～20ml，優選2～10ml，更優選5ml。
21、進一步地，pbs緩沖液的用量以能成功制得納米膠束為宜，其用量可為1～10ml，優選1～5ml，更優選2.5ml。
22、進一步地，上述制備獲得的納米膠束需在4℃避光保存，且可進一步采用pbs緩沖液進行稀釋，例如稀釋后濃度為20、30、40、50、60μm等。
23、進一步地，所述近紅外ii區化學發光納米探針的制備方法還包括步驟：在所述化學發光納米探針(納米膠束)上進行pd-1抗體的修飾；其中，修飾pd-1抗體的化學發光納米探針命名為clnp。上述修飾通過抗體蛋白上的氨本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種近紅外II區有機小分子，其特征在于，所述近紅外II區有機小分子為BBTD14，所述BBTD14的化學結構如下所示：
2.一種近紅外II區有機小分子的合成方法，其特征在于，所述近紅外II區有機小分子為BBTD14，所述BBTD14的合成路線為：
3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述步驟S1中，化合物1、N,N-二苯基-4-(三丁基錫基)苯胺、四(三苯基膦)鈀的摩爾比為10～15：8～12：0.05～0.4；和/或，所述步驟S2中，化合物2、正丁基鋰、三丁基氯化錫的摩爾比為4～6：6～10：6～10；和/或，所述步驟S3中，化合物3、化合物4、三(二芐基丙酮)二鈀、三(鄰甲基苯基)磷膦的摩爾比為0.5～2：0.1～0.4：0.01～0.04：0.1～0.4。
4.一種由權利要求1所述的近紅外II區有機小分子、或權利要求2～3中任一所述的合成方法制得的近紅外II區有機小分子制備的納米探針。
5.根據權利要求4所述的納米探針，其特征在于，所述納米探針為近紅外II區化學發光納米探針，所述近紅外II區化學發光納米探針的制備
6.根據權利要求5所述的納米探針，其特征在于，羧基化F127、有機小分子BBTD14和雙草酸酯的質量比為80～120：0.1～0.8：20～60。
7.根據權利要求5所述的納米探針，其特征在于，所述近紅外II區化學發光納米探針的制備方法還包括步驟：在所述化學發光納米探針上進行PD-1抗體的修飾；其中，修飾PD-1抗體的化學發光納米探針命名為CLNP。
8.根據權利要求7所述的納米探針，其特征在于，所述CLNP的制備具體包括步驟：在化學發光納米探針溶液中分別加入EDC溶液和NHS溶液，4℃暗處孵育20～60分鐘；將溶液進行超濾處理，濾液離心，去除上清后，復溶，加入PD-L1抗體，4℃避光反應12～36小時，獲得所述CLNP。
9.根據權利要求8所述的納米探針，其特征在于，所述化學發光納米探針溶液的濃度為20～100μM，體積為400～600μL；
10.一種如權利要求1所述的近紅外II區有機小分子、或由權利要求2～3中任一所述的合成方法制得的近紅外II區有機小分子、或如權利要求4～9中任一所述的納米探針的應用，其特征在于，所述應用為在生物成像中的應用；和/或，所述應用為在制備生物治療劑中的應用。
11.根據權利要求10所述的應用，其特征在于，所述應用為采用化學發光納米探針CLNP作為生物成像劑在骨肉瘤手術切緣陽性檢測中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種近紅外ii區有機小分子，其特征在于，所述近紅外ii區有機小分子為bbtd14，所述bbtd14的化學結構如下所示：
2.一種近紅外ii區有機小分子的合成方法，其特征在于，所述近紅外ii區有機小分子為bbtd14，所述bbtd14的合成路線為：
3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述步驟s1中，化合物1、n,n-二苯基-4-(三丁基錫基)苯胺、四(三苯基膦)鈀的摩爾比為10～15：8～12：0.05～0.4；和/或，所述步驟s2中，化合物2、正丁基鋰、三丁基氯化錫的摩爾比為4～6：6～10：6～10；和/或，所述步驟s3中，化合物3、化合物4、三(二芐基丙酮)二鈀、三(鄰甲基苯基)磷膦的摩爾比為0.5～2：0.1～0.4：0.01～0.04：0.1～0.4。
4.一種由權利要求1所述的近紅外ii區有機小分子、或權利要求2～3中任一所述的合成方法制得的近紅外ii區有機小分子制備的納米探針。
5.根據權利要求4所述的納米探針，其特征在于，所述納米探針為近紅外ii區化學發光納米探針，所述近紅外ii區化學發光納米探針的制備方法包括：在四氫呋喃溶液中溶解羧基化f127、有機小分子bbtd14和雙草酸酯，充分混合并蒸發有機溶劑，加入pbs緩沖液，使其自組裝成納米膠束，獲得所述化學發光納米探針。
6.根據權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫偉，朱幸俊，劉凱緣，李若童，汪紅勝，沈嘉康，左冬青，昝鵬飛，
申請(專利權)人：上海市第一人民醫院，
類型：發明
國別省市：
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