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    一種鷹嘴桃過敏原蛋白Q2及其應用制造技術

    技術編號:44251758 閱讀:10 留言:0更新日期:2025-02-11 13:48
    本發明專利技術屬于水果過敏原檢測技術領域,具體涉及一種鷹嘴桃過敏原蛋白Q2及其應用。本發明專利技術利用蛋白質譜方法從鷹嘴桃中篩選得到鷹嘴桃過敏原蛋白Q2,利用蛋白外源表達技術制備鷹嘴桃過敏原蛋白Q2,并建立了鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的免疫檢測方法。該檢測方法中鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的檢測限為1.8μg/mL,半抑制濃度36.3μg/mL,線性范圍為5.9~224.4μg/mL。該方法具有簡便快速、特異性強和靈敏度較高的優點,可用于鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的快速檢測,為鷹嘴桃過敏原檢測提供了一種簡便、可靠的有效方法。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術屬于水果過敏原檢測,具體涉及一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2及其應用。


    技術介紹

    1、鷹嘴桃作為嶺南地區的特色桃品種,它肉色鮮美,蜜甜可口,并且富含蛋白質、鐵、鈣、磷、維生素c等營養成分,同時還具有活血化痰、平喘止咳的功效,被評為“嶺南十大佳果”之一。桃是主要引發人體過敏的水果之一,隨著物流的發展將貨架期較短的地域性桃品種發售全國各地,由桃過敏原引發的過敏反應也日益增多。水果過敏通常呈現輕微癥狀,例如口腔過敏綜合征,但也有嚴重的癥狀,例如全身系統性過敏反應、蕁麻疹、胃腸道癥狀等過敏反應,對過敏患者的生活質量有明顯影響。因此,對水果過敏原的研究越來越重要。

    2、專利文獻cn109837282a公開了一種柑橘過敏原cits1.01抗原表達純化、多克隆抗體制備及應用。該方法通過優化cits1.01基因原核表達序列,基因合成,構建過敏原cits1.01的原核表達體系,利用已表達純化的cits1.01蛋白制備兔多克隆抗體anti-cits1.01,對諸如柑橘果皮、果肉中過敏原cits1.01含量進行檢測,并可以利用光密度值衡量western?blot印跡強弱的方法評價諸如柑橘果實可食用部分過敏原cits1.01潛在的致敏性。

    3、專利文獻cn113504089a公開了一種用于提取西紅柿中過敏原的提取液及提取方法。該提取液包括:ph值為7.0~8.0的pbs緩沖液、0.5~1.5mm的edta、3~8mm的l-半胱氨酸、1x蛋白酶抑制劑、占所述的提取液的總質量的0.05%~0.2%的果膠酶。該提取液能夠從西紅柿中提取出更多不同分子量的致敏原蛋白,尤其是小分子量的致敏原蛋白,獲得的西紅柿過敏原提取液透明度高、過敏原以外的雜質含量低,能夠直接用于體外檢測試劑盒,具有較高的生物學活性及陽性檢出率,本底干凈。

    4、專利文獻cn118546211a公開了一種特征肽段組合及其制備方法和在桃過敏原蛋白檢測中的應用。該特征肽段組合能夠正確判定出待測樣本中是否含有桃過敏原蛋白,以桃子含量計算,濃縮飲料中最低檢出濃度為2.4g/100ml,果醬中最低檢出濃度為5.1g/100g,具有質譜響應強度高、穩定性強的特點。

    5、然而,目前鮮少有針對鷹嘴桃過敏原的研究。鷹嘴桃過敏原蛋白的制備研究對于深入探究其致敏機制、免疫檢測分析具有重要意義。因此,非常有必要提供一種鷹嘴桃過敏原蛋白的制備方法及應用。


    技術實現思路

    1、為了解決現有技術的缺陷,本專利技術的目的在于提供了一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2及其應用。本專利技術利用制備的鷹嘴桃過敏原蛋白q2建立了鷹嘴桃過敏原蛋白q2的免疫檢測方法,為鷹嘴桃過敏原的檢測提供了一種快速、可靠、操作簡便的檢測方法。

    2、為實現上述目的,本專利技術所采用的技術方案為:

    3、本專利技術提供了一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的氨基酸序列如seq?id?no:1所示。

    4、進一步地,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的氨基酸序列為(seq?id?no:1):mgvftyeseftseippprlfkafvldadnlvpkiapqaikhseilegdggpgtikkitfgegs?qygyvkhkidsidkenhsysytliegdalgdnlekisyetklvaspsggsiikstshyhtk?gdveikeehvkagkekasnlfklietylkghpdayn。

    5、進一步地,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的抗原表位為13~15(eip)、62~64(gsq)、77~79(ken)、95~96(nl)、124~125(kg)、128~130(eik)、155~157(hpd)。

    6、進一步地,本專利技術提供了一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因,所述編碼基因編碼上述鷹嘴桃過敏原蛋白q2,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因的核苷酸序列如seq?idno:2所示。

    7、進一步地,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因的核苷酸序列為(seq?id?no:2):

    8、atgggtgtcttcacctacgagagcgaattcacctctgaaattccgccaccacgtctgtttaaagcgttcgttctggacgcggataatctggttccgaaaattgcaccgcaggcgatcaaacatagcgaaattctggaaggcgacggcggtccgggtaccatcaaaaagattaccttcggcgaaggtagccagtacggttacgtcaaacacaaaatcgacagcatcgacaaagagaaccacagctacagctataccctgattgaaggcgacgcactgggcgataacctggaaaaaatcagctatgaaaccaaactggttgcgagcccgtctggcggtagcattatcaaaagcaccagccattaccacaccaaaggcgacgtcgaaatcaaagaagaacatgtcaaagcgggcaaagaaaaagcgagcaacctgttcaaactgatcgaaacctacctgaaaggccatccggacgcatataac。

    9、進一步地,本專利技術提供了一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2重組載體,所述重組載體包含上述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因。

    10、進一步地,本專利技術提供了一種包含上述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因或上述鷹嘴桃過敏原蛋白q2重組載體的表達系統,所述表達系統包括但不限于大腸桿菌表達系統或酵母表達系統。

    11、另外,本專利技術還提供了所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2在制備免疫學診斷試劑、食物過敏原診斷試劑或診斷試劑盒中的應用。

    12、進一步地,本專利技術還提供了一種檢測鷹嘴桃過敏原蛋白q2的試劑盒,所述試劑盒包含上述鷹嘴桃過敏原蛋白q2。

    13、進一步地,所述試劑盒還包含鷹嘴桃過敏原蛋白q2抗體、酶標二抗、底物液、校準品和/或質控品。

    14、進一步地,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2抗體由上述鷹嘴桃過敏原蛋白q2免疫兔子、小鼠或駝科動物制備獲得,也可通過將含有過敏原蛋白q2的鷹嘴桃天然蛋白提取物免疫兔子、小鼠、駝科動物等動物制備獲得,包括但不限于單克隆抗體、多克隆抗體、基因工程抗體。

    15、進一步地,所述酶標二抗為hrp標記羊抗兔或小鼠或駝igg二抗。

    16、進一步地,本專利技術還提供了所述檢測鷹嘴桃過敏原蛋白q2試劑盒的免疫檢測方法:

    17、步驟s1、將鷹嘴桃過敏原蛋白q2包被于微孔板的微孔內,孵育、洗板、封閉、干燥;

    18、步驟s2、將梯度稀釋的鷹嘴桃過敏原蛋白q2或經前處理的待測樣品加入化學發光板微孔內,并將鷹嘴桃過敏原蛋白q2的抗體加入微孔內,孵育、洗板;

    19、步驟s3、將酶標二抗加入微孔內,孵育、洗板;

    20、步驟s4、將底物液加入微孔內,振蕩混勻,在一定波長下測定信號值;

    21、步驟s5本文檔來自技高網...

    【技術保護點】

    1.一種鷹嘴桃過敏原蛋白Q2,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

    2.如權利要求1所述的鷹嘴桃過敏原蛋白Q2,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的抗原表位為13~15(EIP)、62~64(GSQ)、77~79(KEN)、95~96(NL)、124~125(KG)、128~130(EIK)、155~157(HPD)。

    3.一種鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的編碼基因,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

    4.一種鷹嘴桃過敏原蛋白Q2重組載體,其特征在于,所述重組載體包含權利要求3所述的鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的編碼基因。

    5.一種包含權利要求3所述鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的編碼基因或權利要求4所述的鷹嘴桃過敏原蛋白Q2重組載體的表達系統,其特征在于,所述表達系統包括但不限于大腸桿菌表達系統或酵母表達系統。

    6.如權利要求1所述的鷹嘴桃過敏原蛋白Q2在制備免疫學診斷試劑、食物過敏原診斷試劑或診斷試劑盒中的應用。

    7.一種檢測鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包含權利要求1所述的鷹嘴桃過敏原蛋白Q2。

    8.如權利要求7所述的檢測鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包含鷹嘴桃過敏原蛋白Q2抗體、酶標二抗、底物液、校準品和/或質控品。

    9.如權利要求8所述的檢測鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的試劑盒,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白Q2抗體由權利要求1所述的鷹嘴桃過敏原蛋白Q2免疫兔子、小鼠或駝科動物制備獲得。

    10.如權利要求8所述的檢測鷹嘴桃過敏原蛋白Q2的試劑盒,其特征在于,所述酶標二抗為HRP標記羊抗兔或小鼠或駝IgG二抗。

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    【技術特征摘要】

    1.一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的氨基酸序列如seq?id?no:1所示。

    2.如權利要求1所述的鷹嘴桃過敏原蛋白q2,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的抗原表位為13~15(eip)、62~64(gsq)、77~79(ken)、95~96(nl)、124~125(kg)、128~130(eik)、155~157(hpd)。

    3.一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因,其特征在于,所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因的核苷酸序列如seq?id?no:2所示。

    4.一種鷹嘴桃過敏原蛋白q2重組載體,其特征在于,所述重組載體包含權利要求3所述的鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因。

    5.一種包含權利要求3所述鷹嘴桃過敏原蛋白q2的編碼基因或權利要求4所述的鷹嘴桃過敏原蛋白q2重組載體的表達系統,其特征...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:王鋒桂沄坤陳舒情劉東杰馬路凱王琴肖更生
    申請(專利權)人:仲愷農業工程學院
    類型:發明
    國別省市:

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