【技術實現步驟摘要】
在某些方面，本專利技術涉及工程化抑制性轉運rna(trna)分子，這些分子通過在解碼uga/tga終止密碼子時將精氨酸(arg)插入多肽中，從而恢復含有提前uga/tga終止密碼子的編碼核酸的翻譯。此外，本專利技術還涉及包含編碼工程化抑制性trna的核酸的表達盒和載體，包含這些表達盒、載體和/或工程化抑制性trna的組合物(例如藥物組合物)，以及涉及工程化抑制性trna分子對蛋白翻譯的恢復和/或疾病治療方法。
技術介紹
1、罕見病(rare?disease)，又稱為孤兒病(orphan?disease)，是根據其發病率來定義的。在美國，一種疾病在1500人中影響不到一人時被認為是“罕見的”；在歐洲，2000人中影響不到一人時被認為是“罕見的”。至今，已有6172種獨特的罕見病被定義。其中，71.9％由基因突變引起，其余則由病毒或細菌感染、過敏反應或環境因素造成(nguengang?wakap,s.,等人(2020)estimating?cumulative?point?prevalence?of?rare?diseases:analysis?of?the?orphanet?database.eur?j?hum?genet.2月；28(2):165-173.doi:10.1038/s41431-019-0508-0.epub?2019年9月16日.pmid:31527858；pmcid:pmc6974615)。據估計，全球范圍內，每個時間點都有大約2.63億至4.46億人患有罕見病(nguengang?wakap,s.,等人(20
2、基因相關的罕見疾病可能是由基因中一個或多個核苷酸的插入或缺失(例如移碼突變)以及/或者點突變(如無義突變或錯義突變)所引起的，這些突變會導致基因產物缺失或喪失其功能(benhabiles,h.,等人(2016).pathologies?susceptible?to?be?targetedf?or?nonsense?mutation?therapies.10.1016/b978-0-12-804468-1.00002-6)。無義突變是研究較為深入的點突變類型，它會導致信使rna(mrna)中出現提前終止密碼子(ptc)，進而引發mrna穩定性降低，并產生截短的蛋白質產物(khajavi,m.,等人(2006)nons?ense-mediated?mrna?decay?modulates?clinical?outcome?of?genetic?disease.eur?j?humgenet.10月；14(10):1074-81.doi:10.1038/sj.ejhg.5201649.epub?2006年6月7日.pmid:16757948)。到目前為止，已經發現410,743種基因突變與各種人類遺傳疾病有關，其中約11％(即45,689種)是無義突變(來自人類基因突變數據庫的數據，https://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php，2023年7月4日訪問)。這些無義突變存在于各種基因中，并且根據終止密碼子的種類以不同的頻率發生，具體包括41.8％(19,101種)的tag/ua?g、36.5％(16,680種)的uga/tga以及21.7％(9,908種)的taa/uaa提前終止密碼子(p?tc)。值得注意的是，在這些無義突變中，將編碼精氨酸(arg)的密碼子轉變為uga/tga的轉換是最頻繁的，達到了9302種(來自人類基因突變數據庫的數據，https://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/index.php，2023年7月4日訪問)。
3、由無義突變引發的人類遺傳性疾病，主要與截短的蛋白質產物的生成以及含有提前終止密碼子(ptc)的mrna的快速降解密切相關。這種含有ptc的mrna的降解和消除過程，是由一種在進化上保守的rna監視機制所觸發的，該機制被稱為無義介導的mrna降解(nmd)(chang,y.f.,等人(2007)the?nonsense-mediated?decay?rna?surveillancepathway.annu?rev?biochem.76:51-74.doi:10.1146/annurev.biochem.76.050106.093909.pmid:17352659)。nmd途徑的運行依賴于核糖體對終止密碼子的掃描，以及在外顯子-外顯子連接處上游大約20-24個核苷酸(nt)位置附著的外顯子-連接復合物(ejc)的存在。當核糖體在終止密碼子處暫停，并且ejc位于其下游超過50個核苷酸時，surf復合物會被募集到mrna上。surf復合物由蛋白激酶(smg1)、rna解旋酶(upf1)以及肽釋放因子erf1和erf3共同組成。upf1的磷酸化會進一步導致smg5、smg6和smg7的募集，并與由核酸外切酶和核酸內切酶介導的mrna降解途徑相關聯(nickless,a,等人(2017)control?of?gene?expressionthrough?the?nonsense-mediated?rna?decay?pathway.cell?biosci.5月19日；7:26.doi:10.1186/s13578-017-0153-7.pmid:28533900；pmcid:pmc5437625)。
4、在過去的二十年中，針對ptc治療的臨床研究主要集中于通過插入氨基酸來增強pt?c的通讀(readthrough)，旨在恢復有缺陷的蛋白質的產生和功能(spelier,s.,等人(2023)readthrough?compounds?for?nonsense?mutations:bridging?the?translationalgap.tre?nds?mol?med.4月；29(4):297-314.doi:10.1016/j.molmed.2023.01.004.epub2023年2月22日.pmid:36828712)。該領域的主要策略是基于小分子在多個方面的作用來促進ptc通讀，這些方面包括抑制核糖體校對(例如，使用氨基糖本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于攜帶精氨酸的工程化抑制性轉運RNA(tRNA)，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8或SEQ?ID?NO:154所示。
2.一種核酸，其編碼權利要求1中所述工程化抑制性tRNA。
3.一種載體，其包含權利要求2中所述核酸。
4.根據權利要求3的載體，其中所述載體是病毒載體或質粒。
5.根據權利要求4的載體，其中所述病毒載體是腺相關病毒(AAV)載體或慢病毒載體。
6.根據權利要求5的載體，其中所述腺相關病毒載體是AAV?2/9載體。
7.一種組合物，其包含權利要求1中所述工程化抑制性tRNA、權利要求2中所述核酸或權利要求3-6任一項中所述載體。
8.根據權利要求7的組合物，其中所述組合物是藥物組合物，并且還包含藥學上可接受的載劑。
9.根據權利要求8的組合物，其中所述藥學上可接受的載劑是脂質體或脂質納米顆粒。
10.一
...【技術特征摘要】
1.一種用于攜帶精氨酸的工程化抑制性轉運rna(trna)，其核苷酸序列如seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6、seq?id?no:7、seq?id?no:8或seq?id?no:154所示。
2.一種核酸，其編碼權利要求1中所述工程化抑制性trna。
3.一種載體，其包含權利要求2中所述核酸。
4.根據權利要求3的載體，其中所述載體是病毒載體或質粒。
5.根據權利要求4的載體，其中所述病毒載體是腺相關病毒(aav)載體或慢病毒載體。
6.根據權利要求5的載體，其中所述腺相關病毒載體是aav?2/9載體。
7.一種組合...
【專利技術屬性】
技術研發人員：朱建國，孔令潔，黃榮，丁愚，東健灃，董康耘，
申請(專利權)人：上海科動生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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