本發明專利技術公開了一種提高香港牡蠣天然采苗效率的預報方法。本發明專利技術通過幼蟲樣品采集、表型分類、分子識別、綜合評估和適時采苗等環節，在天然海區能夠成功獲取大量香港牡蠣稚貝。不但提高了天然采苗數量，保證了苗種質量，而且解決了以往盲目性采苗存在的數量不穩、種類混雜、多次復采等問題，這為香港牡蠣資源恢復及其養殖產業發展提供了充足的苗種來源。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了。本專利技術通過幼蟲樣品采集、表型分類、分子識別、綜合評估和適時采苗等環節，在天然海區能夠成功獲取大量香港牡蠣稚貝。不但提高了天然采苗數量，保證了苗種質量，而且解決了以往盲目性采苗存在的數量不穩、種類混雜、多次復采等問題，這為香港牡蠣資源恢復及其養殖產業發展提供了充足的苗種來源。【專利說明】
:本專利技術屬于海洋農業中貝類苗種繁育領域，具體涉及。
技術介紹
:香港牡販Crassostreahongkongensis是我國華南沿海養殖的主要養殖經濟種，喜歡生活在近河口或附近有淡水注入的地方，主要分布在廣東、廣西等地，年產量在130多萬噸，產值在80-100億元(中國漁業年鑒，2013)。香港牡蠣在我國已有近千年的養殖歷史，傳統上蠔民們是以天然采作為苗種的唯一來源。學者們很早就開始研究牡蠣的天然采苗，包括對近江牡蠣(胡家財等，1994;陳振漢&李友，1997 ;莫新，2004,鐘方杰等，2012)、葡萄牙牡蠣(宋傳福，2013)、長牡蠣等采苗技術研究。但由于采苗預報精確度不足，往往會導致采苗失敗，存在穩定性差，苗種相對混雜等缺陷。尤其是與香港牡蠣生活在一起近江牡蠣，俗稱紅肉，是一種經濟價值低劣的廢品蠔，在香港牡蠣采苗時，很有可能會有不同比例近江牡蠣苗種混淆，如果混淆比例過高，大大影響了香港牡蠣苗種的經濟價值。為此，采苗預報非常重要，傳統的牡蠣采苗主要是靠定期觀測，在牡蠣繁殖季節到來之前，早早投放附著基，擔心采不到牡蠣幼蟲。這種做法實際上存在著一些問題，牡蠣幼蟲是否可以采得到，需要有天時地利人和，更要有科學的采苗預報技術。
技術實現思路
:本專利技術的目的是為了打破香港牡蠣苗種長期匱乏局面；提高香港牡蠣天然采苗效率；保證采苗數量、質量；回避多次復采所帶來的勞動力及其資源浪費；來提高采苗效率的一種預報方法。`本專利技術提高香港牡蠣天然采苗效率的預報方法，其特征在于，包括以下步驟:a、幼蟲采集:在天然海區，當香港牡蠣進入繁殖季節時，定期采集牡蠣樣品，觀測是否產卵排精，當發現牡蠣受刺激后消瘦，經過10~15天后，受精卵發育至眼點前期幼蟲，采集海區表層0.5~Im處的貝類幼蟲作為樣本；b、表型分類:對采集的樣品，首先通過顯微鏡觀察分類，將牡蠣幼蟲、其他雙殼貝類幼蟲和藤壺幼蟲進行區分，確定牡蠣幼蟲的占比、牡蠣眼點前期幼蟲的占比以及藤壺幼蟲的占比；C、分子識別:隨機提取若干個單個牡蠣眼點前期幼蟲的DNA，用4種巨蠣屬牡蠣的復合COI引物進行復合PCR擴增(Wang&Guo，2008)，再經過特異性識別，即可得知牡蠣眼點前期幼蟲的種類，確定香港牡蠣眼點前期幼蟲/牡蠣幼蟲的比例，以及其密度；所述的4種巨蠣屬牡蠣的復合COI引物具體為:COI 引物 1:AAAAAAGATTATAACTAATGCATGTCG (T) GCOI 引物 2:AGTTACCAAACCCCCCAATTATCAG (C) GCOI 引物 3:GGAGTAAGTGGATAAGGGTGGATAGCOI 引物 4:AAGTAACCTTAATAGATCAGGGAAC (A) CLC01490:GGTCAACAAATCATAAAGATATTGGHC02198:TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCALC01490和HC02198是巨蠣屬牡蠣的通用引物，只要是巨蠣屬牡蠣，用COI基因組D NA作為模板的話，都能擴增出一條都有的條帶；d、綜合評估:當香港牡蠣眼點前期幼蟲/牡蠣幼蟲的比例> 70%，香港牡蠣眼點前期幼蟲的密度> 50個/m3，敵害生物藤壺幼蟲/牡蠣幼蟲的比例≤10%時，即達到采苗要求；e、適時采苗:當香港牡蠣眼點前期幼蟲發育至眼點后期階段時，發送采苗預報，投放附著基至海區，即可采收到大量天然香港牡蠣苗種。步驟a所述的刺激為臺風或者暴雨等刺激。所述的采集海區表層0.5~Im處的貝類幼蟲作為樣本，采用300目篩絹網進行優選取樣。本專利技術的4種巨蠣屬牡蠣的復合COI引物及其鑒定4種巨蠣屬牡蠣的方法公開于Wang, H.，GuojX.，2008a.1dentificationofCrassostreaariakensisandrelatedoystersbymultiple species-specificPCR.JournalofShellfishResearch27，481 - 487。本專利技術通過幼蟲樣品采集、表型分類、分子識別、綜合評估和適時采苗等環節，在天然海區能夠成功獲取大量香港牡蠣稚貝。不但提高了天然采苗數量，保證了苗種質量，而且解決了以往盲目性采苗存在的數量不穩、種類混雜、多次復采等問題，這為香港牡蠣資源恢復及其養殖產業發展提供充足的苗種來源。【專利附圖】【附圖說明】:圖1實線部分是本專利技術的技術路線圖，虛線部分為傳統采苗工藝。圖2是不同發育時期牡蠣幼蟲示意圖。A:面盤初期幼蟲；B:面盤中期幼蟲；C:面盤后期幼蟲(眼點前期幼蟲)；D:眼點后期幼蟲。圖3是參照Wang&Guo方法利用復合COI識別牡蠣幼蟲種類，A =PCR產物瓊脂糖電泳圖；B:示意圖。注:M是2000bpDNAmarker ;粗線條表示每種牡販的特異性片段；Ar近江牡蠣幼蟲產生183bp特異片段；An葡萄牙牡蠣幼蟲產生222bp特異片段；Hk香港牡蠣幼蟲產生387bp特異片段；Si熊本牡蠣幼蟲產生546bp特異片段。【具體實施方式】以香港牡蠣天然采苗為實施例進一步說明本專利技術，但不構成對本專利技術的限制。實施例1本實施例提高香港牡蠣天然采苗效率的預報方法，其技術方案如圖1所示，具體步驟為:(a)、幼蟲采集:于2013年6-7月，香港牡蠣繁殖季節時，在湛江官渡定期采集牡蠣樣品，觀測是否產卵排精。于6月20日，臺風過后，發現牡蠣消瘦，海區中就存在牡蠣幼蟲，經過15d，幼蟲即發育至眼點前期幼蟲，利用300目篩絹網在海區表層0.5-1.0m處收集貝類幼蟲，經過濃縮，放置于采樣瓶中作為樣本。(b)、表型分類:對于采集到的樣品，首先通過顯微鏡觀察進行分類。根據牡蠣幼蟲在殼頂中后期左右殼不等大，而絕大部分其他雙殼貝類幼蟲左右殼大小相等這一特點進行區分。結果發現，該海區中，大部分牡蠣幼蟲已經進入眼點前期幼蟲階段，還有部分處于殼頂初期及中期階段(圖2);樣品里面有少部分雙殼類幼蟲及其藤壺幼蟲。應用視野法進行計數發現，牡蠣幼蟲所占比例為90%，牡蠣眼點前期幼蟲所占比例為75%左右，藤壺幼蟲的占比約為8%。(C)、分子識別:對這些大個體的牡蠣眼點前期幼蟲，參考包振民等的專利方法(專利號:ZL03112331.7，專利技術名稱:貝類遺傳圖譜的快速構建方法)提取單個牡蠣眼點前期幼蟲的DNA，之后按照Wang&Guo方法(Wang, H.，Guo, X.，2008a.1dentificationofCrassostrea ariakensisandrelatedoystersbymultipIexspecies-specif icPCR.JournalofShellf ishResearch27, 481 - 487),應用 4 種巨販屬牡販的復合 COI 引物進行復合PCR擴增，再經過特異性片段大小差異，即可得知牡蠣幼蟲的種類，估算香港本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：肖述，張躍環，張揚，喻子牛，
申請(專利權)人：中國科學院南海海洋研究所，
類型：發明
國別省市：
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