本發(fā)明專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，公開了一種用于免疫復(fù)合物緩沖解離劑的CIC抗體緩沖液解離中和劑，每1L的CIC抗體緩沖液解離中和劑包括以下組分：6.8g-10.0g的氨基丁三醇、6.5g-9.6g的氯化鈉、100μl-500μl的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。本發(fā)明專利技術(shù)利用該種免疫復(fù)合物緩沖解離劑檢測(cè)CIC的方法，建立了特異性檢測(cè)CIC中抗體的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，這是目前現(xiàn)有CIC檢測(cè)方法都無法解決的問題。本發(fā)明專利技術(shù)同時(shí)具備特異、靈敏、批量高效、重復(fù)性好、不受干擾、可定量或定性檢測(cè)的技術(shù)特征。該種免疫復(fù)合物緩沖解離劑應(yīng)用于患有感染性疾病、內(nèi)分泌代謝性疾病、自身免疫性疾病、部分腫瘤疾病患者體液標(biāo)本中CIC的檢測(cè)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，公開了一種用于免疫復(fù)合物緩沖解離劑的CIC抗體緩沖液解離中和劑，每1L的CIC抗體緩沖液解離中和劑包括以下組分：6.8g-10.0g的氨基丁三醇、6.5g-9.6g的氯化鈉、100μl-500μl的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。本專利技術(shù)利用該種免疫復(fù)合物緩沖解離劑檢測(cè)CIC的方法，建立了特異性檢測(cè)CIC中抗體的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，這是目前現(xiàn)有CIC檢測(cè)方法都無法解決的問題。本專利技術(shù)同時(shí)具備特異、靈敏、批量高效、重復(fù)性好、不受干擾、可定量或定性檢測(cè)的技術(shù)特征。該種免疫復(fù)合物緩沖解離劑應(yīng)用于患有感染性疾病、內(nèi)分泌代謝性疾病、自身免疫性疾病、部分腫瘤疾病患者體液標(biāo)本中CIC的檢測(cè)。【專利說明】一種用于免疫復(fù)合物緩沖解離劑的Cic抗體緩沖液解離中和劑
本專利技術(shù)涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于免疫復(fù)合物緩沖解離劑的CIC抗體緩沖液解離中和劑。
技術(shù)介紹
細(xì)菌、病毒等病原體侵入機(jī)體后或致敏物質(zhì)(抗原，含自身抗原)刺激機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，進(jìn)而產(chǎn)生特異性免疫效應(yīng)細(xì)胞或抗體，并與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，所得到的復(fù)合物稱為免疫復(fù)合物(又稱抗原抗體復(fù)合物，immune complex, IC),主要有IgG, IgM, IgA, IgE型免疫復(fù)合物，其中以IgG和IgM最常見。由于抗原與抗體比例不同，所形成的IC分子大小各異，通常有三種形式:一是抗原抗體比例適當(dāng)時(shí)，形成大分子的不溶性IC(大于19S)，易被吞噬細(xì)胞捕獲、吞噬和清除。二是抗原量過剩時(shí)，形成小分子的可溶性IC (小于6.6S)，易透過腎小球?yàn)V過隨尿排出體外。三是抗原量稍過剩時(shí)，形成中等大小的可溶性IC(8.8-19S)，它既不被吞噬細(xì)胞清除，又不能通過腎小球?yàn)V過排出，可較長(zhǎng)時(shí)間游離于血液和其他體液中，又稱循環(huán)免疫復(fù)合物(circulating immuno complex, CIC)。正常情況下，機(jī)體內(nèi)的游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成1C，可被機(jī)體的防御系統(tǒng)清除，作為清除異物抗原的一種方式，對(duì)機(jī)體有利。但在某些病理情況下，體內(nèi)形成的IC不能被及時(shí)清除，可在局部沉積，通過激活補(bǔ)體，并在血小板、中性粒細(xì)胞等參與下，引起一系列連鎖反應(yīng)而導(dǎo)致組織損傷，出現(xiàn)臨床癥狀，稱為免疫復(fù)合物病(immuno complex disease,I⑶)。檢查組織內(nèi)或循環(huán)體液中IC的存在有助于某些疾病的診斷、發(fā)病機(jī)制的研究、預(yù)后評(píng)估、病情活動(dòng)觀察和療效判斷等。因此，準(zhǔn)確、特異、靈敏檢測(cè)免疫復(fù)合物對(duì)疾病的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估具有重要的臨床意義，CIC的檢測(cè)日益受到重視。世界衛(wèi)生組織(WHO)曾組織進(jìn)行CIC檢測(cè)方法學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)尚無任何一種技術(shù)同時(shí)具備特異、靈敏、批量高效、重復(fù)性好的所有特點(diǎn)。由于方法的復(fù)雜性、敏感性和所檢測(cè)CIC類型的局限性，目前的常用CIC檢測(cè)技術(shù)均受到免疫復(fù)合物內(nèi)免疫球蛋白種類及亞類、復(fù)合物大小、抗原與抗體比例、固定補(bǔ)體的能力等因素影響，在臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用受到很大限制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)針對(duì)現(xiàn)有CIC檢測(cè)技術(shù)及檢測(cè)過程中，不能同時(shí)具備特異、靈敏、批量高效、重復(fù)性好、不受到干擾的技術(shù)問題，公開了一種解決了以上技術(shù)問題的用于免疫復(fù)合物緩沖解離劑的CIC抗體緩沖液解離中和劑。為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)通過下述技術(shù)方案得以解決。—種免疫復(fù)合物緩沖解離劑，以如下體積比例配比計(jì)，各組分及含量為，135-165 u I 的 CIC 分離劑、290-315 U I 的 CIC 洗滌劑、5-16 U I 的 CIC 復(fù)溶劑、65-76 U I 的CIC抗體緩沖液解離劑和65-76 ill的CIC抗體緩沖液解離中和劑。以制備的HBsAg-抗-HBs免疫復(fù)合物為例，本專利技術(shù)的試劑配方可以使CIC中的抗體解離率達(dá)到37.5%-51.0%(抗體解離率:指CIC解離后檢測(cè)到的抗體量與實(shí)際CIC中抗體量的百分比)。而現(xiàn)有的CIC檢測(cè)技術(shù)因?yàn)榭贵w被破壞或一些干擾因素的存在，無法檢測(cè)CIC中的抗體。其中，每IL的CIC分離劑包括以下組分:5.2g-7.7g的硼砂、4.lg-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化鈉、100 μ 1-500 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。CIC分離劑的作用如下:當(dāng)每IL的CIC分離劑中包括5.2g-7.7g的硼砂、4.lg-6.1g的硼酸、70g-90g的聚乙二醇、6.2g-9.2g的氯化鈉、100 μ 1-500 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水時(shí)，被分離的CIC達(dá)到最大量，同時(shí)改用氯化鈉也可避免了傳統(tǒng)沉淀方法中氟化鈉殘留對(duì)后續(xù)檢測(cè)抗體的干擾。本專利技術(shù)采用的聚乙二醇，作為優(yōu)選選用聚乙二醇6000 ;本專利技術(shù)中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。每IL的CIC洗滌劑包括以下組分:5.2g-7.7g的硼砂、4.lg-6.1g的硼酸、35g_45g的聚乙二醇、8.0g-11.7g的氯化鈉、100 μ 1-500 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。以上配方的CIC洗滌劑主要針對(duì)CIC分離劑的配方進(jìn)行設(shè)計(jì)，其作用是洗去體液標(biāo)本中多余的雜蛋白。本專利技術(shù)中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。每IL的CIC復(fù)溶劑包括以下組分:8.0g-9.5g的氯化鈉、(λ Olg-0.03g的氫氧化鈉、50 μ 1-500 μ I的聚乙二醇辛基苯基醚、100 μ 1-500 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。CIC復(fù)溶劑針對(duì)解離時(shí)的緩沖量大小而設(shè)計(jì)，以上配方的CIC復(fù)溶劑對(duì)分離CIC的損傷程度最小；采用等滲的聚乙二醇辛基苯基醚，低濃度的聚乙二醇辛基苯基醚協(xié)助溶解CIC。本專利技術(shù)所采用的聚乙二醇辛基苯基醚又叫Triton X-100，本專利技術(shù)中提到的液體生物防腐劑為 Proclin-300。每IL的CIC抗體緩沖液解離劑包括以下組分:3.5-5.5g的甘氨酸、4.0ml-6.0ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35%-37%的濃鹽酸、4.4g-6.6g的氯化鈉、100 μ 1-500 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。CIC抗體緩沖液解離劑使CIC中抗體達(dá)到最大程度的解離。如以制備的HBsAg-抗-HBs免疫復(fù)合物為參照，抗體解離率達(dá)到37.5%_51.0%。本專利技術(shù)中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。作為優(yōu)選，每IL的CIC抗體緩沖液解離中和劑包括以下組分:6.8g-10.0g的氨基丁三醇、6.5g-9.6g的氯化鈉、100 μ 1-500 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。CIC抗體緩沖液解離中和劑主要是對(duì)CIC解離的抗體緩沖液進(jìn)行中和，該組分的CIC抗體緩沖液解離中和劑使?jié)B透壓、PH達(dá)到抗體的較為理想的環(huán)境，以利于對(duì)抗體的檢測(cè)。本專利技術(shù)中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。作為優(yōu)選，每IL的CIC抗體緩沖液解離中和劑包括以下組分:7.8g-9.5g的氨基丁三醇、6.8g-9.0g的氯化鈉、120 μ 1-490 μ I的液體生物防腐劑、余量為蒸餾水。該組分的CIC抗體緩沖液解離中和劑使?jié)B透壓、pH達(dá)到抗體的較為理想的環(huán)境，以利于對(duì)抗體的檢測(cè)。本專利技術(shù)中提到的液體生物防腐劑為Proclin-300。作為優(yōu)選，每IL的CIC抗體緩沖液解離中和劑包括以下組分:8.4g-9.5g的氨基丁三醇、8.0本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：成軍，江曉肖，張益明，馬炬明，陳達(dá)偉，孫長(zhǎng)貴，戴玉柱，王國(guó)政，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)人民解放軍第一一七醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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