本發明專利技術公開了一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒機器使用方法，所述試劑盒包括：①磁分離試劑；②抗試劑；③酶標抗原試劑；④清洗液；⑤校準品、質控品；⑥底物溶液；⑦終止液；其中磁分離試劑為結合有抗異硫氰酸熒光素FITC-DON抗體的磁微粒混懸液；抗試劑為FITC標記的抗DON抗體溶液；酶標抗原試劑為偶聯有生物酶的DON溶液；本發明專利技術的具有顯著優點：本發明專利技術的嘔吐毒素定量檢測試劑盒操作簡單、快速、靈敏準確；能夠適用于日常大規模的食品或飼料中嘔吐毒素的樣品檢測。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒機器使用方法，所述試劑盒包括：①磁分離試劑；②抗試劑；③酶標抗原試劑；④清洗液；⑤校準品、質控品；⑥底物溶液；⑦終止液；其中磁分離試劑為結合有抗異硫氰酸熒光素FITC-DON抗體的磁微粒混懸液；抗試劑為FITC標記的抗DON抗體溶液；酶標抗原試劑為偶聯有生物酶的DON溶液；本專利技術的具有顯著優點：本專利技術的嘔吐毒素定量檢測試劑盒操作簡單、快速、靈敏準確；能夠適用于日常大規模的食品或飼料中嘔吐毒素的樣品檢測。【專利說明】
本專利技術涉及生物監測領域，屬于生物
，特別是。
技術介紹
嘔吐毒素(Vomitoxin),又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol, DON),化學名稱為3 α，7 α，I，5 —三羥基草鐮孢菌一 9 一烯一 8 —酮，屬單端孢霉烯族化合物。，DON具有很高的細胞毒性及免疫抑制性，因此，對人類及動物的健康構成了威脅。在20世紀90年代開始推廣的磁微粒分離酶聯免疫檢測技術是一種結合免疫磁微粒分離技術與酶聯免疫檢測技術建立的新型酶聯免疫檢測方法。磁微粒酶聯免疫反應在近似液相下進行反應，免疫反應的表面積較ELISA法有更大的提高；另外磁微粒具有超順磁性，在磁場下具有磁場響應性，更易于固液分離。該方法克服了普通酶聯免疫分析(ELISA)分析精密度差、靈敏度差的缺點，反應快速、徹底，具有靈敏度高，特異性高，操作簡便，檢測用時少和不易受外界因素干擾的優點。現在，還缺少能夠快速、高效、高靈敏度檢測嘔吐毒素的試劑盒，因此想要迅速、高效的檢測嘔吐毒素依然很困難。【專利技術內容】為解決現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒及其制備、操作方法，采用該試劑盒進行嘔吐毒素檢測具有較高的靈敏度、特異性、操作簡便和更短檢測時間的優點。為了實現上述目標，本專利技術采用如下的技術方案:一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒，其特征在于，包括:①磁分離試劑；②抗試劑；③酶標抗原試劑；④清洗液；⑤校準品、質控品；⑥底物溶液；⑦終止液；其中磁分離試劑為結合有抗異硫氰酸熒光素FITC-DON抗體的磁微粒混懸液；抗試劑為FITC標記的抗DON抗體溶液；酶標抗原試劑為偶聯有生物酶的DON溶液。一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:磁分離試劑的制備:選用IOOmg具有順磁性、表面帶有羧基活性基團的磁分離微粒用0.lmol/L、pH4.5的2-(N-嗎啉代)乙磺酸MES溶液IOmL洗滌3次后，磁分離微粒用該溶液ImL重懸；之后加入50-250 μ I濃度為10mg/ml碳二亞胺EDC活化，25°C混勻2小時，加入2mg抗FITC抗體，37°C混合均勻2小時；之后加入ImL濃度為0.0lmol/L PBS緩沖液于37°密閉靜置I小時，所述PBS緩沖液為pH7.4的5%牛血清白蛋白BSA ;最后用IOmL0.5%BSA溶液的0.0lmol/L磷酸緩沖溶液PBS緩沖液洗滌磁珠3次，并用該溶液制成磁分離試劑溶液；②抗試劑的制備:將DON單克隆抗體溶液與FITC共價連接；③酶標抗原試劑的制備:所述酶標抗原試劑的制備包括以下成分:D0N-BSA偶聯物以及酶標抗原試劑；(I) DON-BSA偶聯物的制備:取20mgD0N、lmol馬來酸酐以及0.05—0.1mol的4_ 二甲氨基吡啶DMAP，溶于2ml甲苯，80°C攪拌12小時，蒸干溶劑，酸化，萃取，重結晶后得到DON半抗原；將60mg DON 半抗原溶于 9.5mL0.01mol/L、pH5.0 的 PBS 溶液中，加入 12.5mg EDC,再加入Iml溶解了 IOmgDON半抗原的二甲基甲酰胺DMF溶液，25°C攪拌反應2小時，再加入6mgEDC,置于陰暗處攪拌反應12小時，用0.01mol/L PBS透析72小時，每8小時更換I次透析液，即得到DON-BSA偶聯物；⑵酶標抗原試劑制備:a.將 5mg DON-BSA 抗原溶于 0.01mol/L ρΗ7.4 的 PBS 溶液中，加入 0.1mol/mL 活化劑2-1minothiolane.HCl溶液20 μ L，20°C放置30分鐘后加入甘氨酸終止反應；20°C靜置3-5分鐘；過柱子除去活化劑，收集蛋白峰；b.將堿性磷酸酶ALP溶于pH8.0的2mmol/L EDTA、20mmol/L三羥甲基氨基甲烷Tris-HCL溶液中，溶度5mg/mL，加入0.10mg/mL巰基活化試劑，室溫放置40分鐘，過柱子除去活化劑，收集蛋白峰；將a和b溶液按照抗體與堿性磷酸酶分子摩爾比1:1混合，室溫放置3小時，然后用凝膠層析柱分離純化，收集第一峰和第二峰，除去未連接的游離抗體和堿性磷酸酶，將產物保存在4°C，將上述連接物用酶反應物稀釋液稀釋到5ug/mL，使用0.2 μ m過濾器過濾后4°C保存；其中，酶反應物稀釋液配置方法:Trisl2.5g，氯化鈉8.5g，疊氮鈉lg，加純化水至600mL,調整pH值至7.5 ;加吐溫_201mL，BSAlOg,加純化水定容至IL ;用0.2 μ m過濾器過濾，于4°C保存；④清洗液的制備:取Trisl2.54g、NaC1325.6g 與吐溫 _205g 先溶于 900ml 水中，再取 0.2ml 液體生物防腐劑Proclin-300溶于溶液中，最后將pH調整至7.4并定容至1000ml，完全溶解后用0.2um濾器過濾既得清洗液濃縮液，使用時稀釋20倍既得清洗液；⑤校準品與質控品的制備:將DON抗原稱重后用標準品緩沖液溶解分裝，校準品濃度分別為lng/mL、10ng/mL、40ng/mL、200ng/mL 與 1000ng/mL,質控品溶度為 Ing/mL 與 100ng/mL, 4°C保存；其中，標準品緩沖液的配制:取Tris2.42g、NaC12g, BSA2.5g, Proclin_3001ml 溶解于1000ml純化水，pH調整至7.4，用0.2 μ m過濾器過濾，4°C保存；⑥底物溶液的制備:取乙醇胺100g，NaC12g，單磷酸酚酞4g，用純化水配成1000ml，用37%鹽酸調pH至8.4,用0.2μηι過濾器過濾,于4°C保存；⑦終止液的制備取NaCll-2g，Na2C0310-15g，EDTA10-15g，用純化水配制成 1000ml，用 0.2 μ m 過濾器過濾，常溫保存。一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述選取的100mg具有順磁性、表面帶有羧基活性基團的磁分離微粒的直徑為0.1-0.2um。一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述FITC抗體為羊抗、鼠抗或兔抗。一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述DON單克隆抗體為羊抗、鼠抗或兔抗。一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述MES溶液的制備方法為:稱取MES19.52g，Trisl.56g, NaC14.24g于IL燒杯中，量取950mL純化水溶解，調節pH至4.5 ;加純化水定容到1L，采用孔徑0.2 μ m濾膜過濾除菌，4°C保存。一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，所述DON單克隆抗體溶液與FITC共價連接的連接方法為Marsshall法。一種嘔本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種嘔吐毒素定量檢測試劑盒，其特征在于，包括：①磁分離試劑；②抗試劑；③酶標抗原試劑；④清洗液；⑤校準品、質控品；⑥底物溶液；?⑦終止液；其中磁分離試劑為結合有抗異硫氰酸熒光素?嘔吐毒素FITC?DON抗體的磁微粒混懸液；抗試劑為FITC標記的抗DON抗體溶液；酶標抗原試劑為偶聯有生物酶的DON溶液。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王毅謙，邵景東，吳福平，郭旸，申進玲，
申請(專利權)人：中華人民共和國張家港出入境檢驗檢疫局，
類型：發明
國別省市：
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