用于檢測(cè)前列腺癌的miRNAs制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種用于前列腺癌診斷的miRNAs及試劑盒，屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。其中的miRNAs包括致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，致癌性miRNAs在real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量升高，抑癌性miRNAs在real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量降低。根據(jù)前列腺癌的程度不同，采用不同的致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，分別針對(duì)性進(jìn)行診斷。采用本發(fā)明專利技術(shù)所提供技術(shù)方案，可以快速、簡(jiǎn)單、高效、穩(wěn)定的獲得前列腺癌的診斷和預(yù)后評(píng)判結(jié)果。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于分子生物學(xué)
，具體涉及用miRNAs進(jìn)行前列腺癌的診斷。通過(guò)檢測(cè)前列腺癌組織和作為對(duì)照的良性前列腺增生組織中miRNAs的表達(dá)，對(duì)高低惡性程度不同的前列腺癌進(jìn)行診斷。?
技術(shù)介紹
在現(xiàn)有的研究中，臨床上多采用蛋白質(zhì)或某基因的mRNA水平進(jìn)行腫瘤診斷、預(yù)后分析和腫瘤的治療，但測(cè)試過(guò)程中需要分析成千上萬(wàn)的蛋白質(zhì)或mRNA，測(cè)試過(guò)程較為繁瑣；且測(cè)試過(guò)程中所選用的mRNA易降解，測(cè)試過(guò)程不穩(wěn)定。?miRNA最早發(fā)現(xiàn)于1991年線蟲體內(nèi)，是一種內(nèi)源性的非編碼RNA，長(zhǎng)度為18-25nt，在進(jìn)化上比較保守，是基因調(diào)控因子，能夠在誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RISC）內(nèi)通過(guò)與其靶mRNA全部或部分互補(bǔ)來(lái)識(shí)別信使RNA，并因此負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的表達(dá)。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)總共30%的蛋白質(zhì)表達(dá)被miRNAs調(diào)控。miRNAs來(lái)源于基因組編碼的前體miRNAs，多數(shù)是通過(guò)RNA聚合酶II從單個(gè)基因轉(zhuǎn)錄的，或者來(lái)自同時(shí)轉(zhuǎn)錄的多順?lè)醋樱诩?xì)胞核中被核酸酶III（Drosha）加工，通過(guò)核輸出蛋白Exportina-5依賴性的機(jī)制和Ran-GTP依賴性的機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，并且被另一種核酸酶III（Dicer）進(jìn)一步加工成為其成熟的形式。?迄今為止，miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)已鑒定公布了人類2582條miRNAs。然而，miRNAs的功能和靶基因還沒(méi)有得到完整的解釋和證實(shí)。不同組織細(xì)胞的生理異常中，某些miRNAs具有明顯的異常表達(dá)，比如：腫瘤發(fā)生與某些miRNAs的表達(dá)和功能異常有密切的關(guān)系，相當(dāng)一部分得到注釋的miRNAs在基因組上被定位于腫瘤相關(guān)的脆性位點(diǎn)，因此，對(duì)不同類型腫瘤組織中具體miRNA的表達(dá)和功能異常的研究越來(lái)越受到人們的關(guān)注。?miRNAs用于前列腺癌的診斷：有些miRNAs的降低導(dǎo)致了其致瘤靶基因的調(diào)控紊亂，進(jìn)而加速了腫瘤的轉(zhuǎn)化。在前列腺癌中，miR-15a、miR-16-1的表達(dá)下調(diào)，由于Bcl-2mRNA的3’-UTR區(qū)有miR-15a、miR-16-1的結(jié)合位點(diǎn)，故miR-15a、miR-16-1的表達(dá)缺失導(dǎo)致抗凋亡基因Bcl-2蛋白的高表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡進(jìn)程，所以miR-15a、miR-16-1被認(rèn)為是誘導(dǎo)原癌基因Bcl-2mRNA失活的腫瘤?抑制劑。研究者早發(fā)現(xiàn)前列腺特異抗原（PSA）在前列腺癌診斷中是有局限性的。因此，整合血液PSA水平和某些生物標(biāo)志物miRNA表達(dá)水平，如：miR-21和miR-141，可以將陽(yáng)性前列腺癌預(yù)測(cè)從40%提高到87.5%，可以提高預(yù)測(cè)前列腺癌的精度，也有預(yù)后預(yù)測(cè)能力（惡性能力，轉(zhuǎn)移行為和總生存期等）。近十年來(lái)，隨著miRNAs發(fā)現(xiàn)和研究的快速進(jìn)展，miRNAs表達(dá)譜對(duì)闡明疾病發(fā)生機(jī)制、診斷、預(yù)后評(píng)估和提供新的治療策略發(fā)揮重要作用。而且，miRNAs的突變或異常表達(dá)以及它們所控制的通路可能成為有用的治療靶點(diǎn)。因此，miRNAs是腫瘤分類，早期檢測(cè)、疾病預(yù)后、制定治療方案和治療靶點(diǎn)等方面的重要工具，然而測(cè)試過(guò)程中，與前列腺癌發(fā)病相關(guān)聯(lián)的miRNAs始終無(wú)法確認(rèn)，這就給前列腺癌的診斷、分類、治療靶點(diǎn)和治療方案的制定、疾病預(yù)后等造成了嚴(yán)重干擾，不利于治療。?申請(qǐng)人采用深度測(cè)序的方法對(duì)高低惡性程度不同的前列腺癌組織和良性前列腺增生組織中miRNAs的表達(dá)進(jìn)行比較，并進(jìn)一步研究高惡性前列腺癌組織、低惡性前列腺癌組織的miRNAs表達(dá)譜，最終確定了一個(gè)精確的前列腺癌診斷和分類系統(tǒng)，也為發(fā)現(xiàn)新型治療靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。本申請(qǐng)案由此產(chǎn)生。?
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)臨床上前列腺癌的診斷問(wèn)題，本專利技術(shù)的目的一提供了一種用于檢測(cè)前列腺癌的miRNAs，包括致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，所述的致癌性miRNAs為real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量升高的miRNAs，所述的抑癌性miRNAs為real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量降低的miRNAs。其中，高惡性前列腺癌（Gleason評(píng)分＞7）中，致癌性miRNAs為miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，抑癌性miRNAs為miR-144-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-365a-3p、miR-451a、miR-486-5p、miR-655-3p和miR-887，可用于高惡性前列腺癌的診斷；低惡性前列腺癌（Gleason評(píng)分≤7）中，致癌性miRNAs為miR-125b-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-151b、miR-193a-5p、miR-206、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-6087和miR-95-3p，抑癌性miRNAs為miR-126-5p、miR-144-3p、miR-451a和miR-486-5p，可用于低惡性前列腺癌的診斷。?本專利技術(shù)的目的二在于提供一種用于前列腺癌診斷的試劑盒，包含致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，所述的致癌性miRNAs為real-time?PCR方法檢測(cè)中表?達(dá)量升高的miRNAs，抑癌性miRNAs為real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量降低的miRNAs。其中，高惡性前列腺癌（Gleason評(píng)分＞7）中，致癌性miRNAs為miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，抑癌性miRNAs為miR-144-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-365a-3p、miR-451a、miR-486-5p、miR-655-3p和miR-887，可用于高惡性前列腺癌的診斷；低惡性前列腺癌（Gleason評(píng)分≤7）中，致癌性miRNAs為miR-125b-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-151b、miR-193a-5p、miR-206、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-6087和miR-95-3p，抑癌性miRNAs為miR-126-5p、miR-144-3p、miR-451a和miR-486-5p，可用于低惡性前列腺癌的診斷。?本專利技術(shù)采用深度測(cè)序技術(shù)對(duì)前列腺癌組織和良性前列腺增生組織中miRNAs的表達(dá)情況進(jìn)行了研究，深度測(cè)序技術(shù)可以得到幾乎所有的miRNAs差異表達(dá)信息，包括已知的miRNAs和未知的miRNAs，為我們發(fā)現(xiàn)與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的miRNAs提供了重要的技術(shù)支持和保障。?本專利技術(shù)進(jìn)一步通過(guò)real-time?PCR方法驗(yàn)證差異表達(dá)的miRNAs，并且發(fā)現(xiàn)了高惡性前列腺癌（Gleason評(píng)分＞7）中，高表達(dá)的miRNAs有：miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，是致癌性miRNAs；而低表達(dá)的miRNAs有：miR-144-3p、miR本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
用于檢測(cè)前列腺癌的miRNAs，其特征在于：包括致癌性miRNAs和抑癌性miRNAs，所述的致癌性miRNAs為real?time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量升高的miRNAs，所述的抑癌性miRNAs為real?time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量降低的miRNAs。

【技術(shù)特征摘要】
1.用于檢測(cè)前列腺癌的miRNAs，其特征在于：包括致癌性miRNAs和抑癌性
miRNAs，所述的致癌性miRNAs為real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量升高的
miRNAs，所述的抑癌性miRNAs為real-time?PCR方法檢測(cè)中表達(dá)量降低的
miRNAs。
2.如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)前列腺癌的miRNAs，其特征在于：所述的致癌
性miRNAs為miR-125b-5p、miR-126-5p、miR-139-3p、miR-151a-5p、miR-193a-5p、
miR-206、miR-708-3p和miR-95-3p，抑癌性miRNAs為miR-144-3p、miR-221-3p、
miR-222-3p、miR-365a-3p、miR-451a、miR-486-5p、miR-655-3p和miR-887，
可用于高惡性前列腺癌的診斷；致癌性miRNAs為miR-125b-5p、miR-139-3p、
miR-151a-5p、miR-151b、miR-193a-5p、miR-206、miR-221-3p、miR-222-3p、
miR-6087和miR-95-3p，抑癌性miRNAs為miR-126-5p、miR-144-3p、miR-451a
和miR-486-5p，可用于低惡性前列腺癌的診斷。
3.一種用于前列腺癌診斷的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒中包含致癌性

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋春嬌，陳歡，余建華，徐潮陽(yáng)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：紹興市人民醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：浙江;33