高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置制造方法及圖紙

一種高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置，其特征在于是由混均收樣池、芯片反應盒以及LFD反應盒組成，芯片反應盒前端設有與混均收樣池的分配口相連接的接口，內設有反應擴增池，反應擴增池內設有與待檢目標物對應的探針，并通過后端LFD密封蓋密封；LFD反應盒包括二個腔體和雙管道針頭，第一腔體內置有LFD核酸試紙條，第二腔體內設有緩沖液和單向閥，雙管道針頭的第二針管與單向閥相連，第一針管與LFD核酸試紙條相連，當雙管道針頭刺破LFD密封蓋后，打開單向閥，緩沖液沿流入反應擴增池，并被第一針管吸入到LFD核酸試紙條上實現LAMP-LFD快速可視化反應。本實用新型專利技術具有結構簡單合理、全密閉、高通量、多重性、多靶點、分體式、操作靈活方便快捷的特點。（*該技術在2024年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】一種高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置，其特征在于是由混均收樣池、芯片反應盒以及LFD反應盒組成，芯片反應盒前端設有與混均收樣池的分配口相連接的接口，內設有反應擴增池，反應擴增池內設有與待檢目標物對應的探針，并通過后端LFD密封蓋密封；LFD反應盒包括二個腔體和雙管道針頭，第一腔體內置有LFD核酸試紙條，第二腔體內設有緩沖液和單向閥，雙管道針頭的第二針管與單向閥相連，第一針管與LFD核酸試紙條相連，當雙管道針頭刺破LFD密封蓋后，打開單向閥，緩沖液沿流入反應擴增池，并被第一針管吸入到LFD核酸試紙條上實現LAMP-LFD快速可視化反應。本技術具有結構簡單合理、全密閉、高通量、多重性、多靶點、分體式、操作靈活方便快捷的特點。【專利說明】高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置
本技術涉及生物檢測
，屬于核酸等溫擴增技術和橫向側析技術的多項技術集成生物芯片
，具體是一種高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置。。
技術介紹
近年來隨著社會發展，政府、社會、民眾對自身和環境安全的要求越來越高。，每年進行的各種生物檢測的樣本的數量都在以驚人的速度增加。同時，對于現場快檢的需求也越來越迫切。LAMP技術最早由日本科學家Notomi等(2000)建立，通過針對靶基因的6個區域而設計4種特異性引物，利用具有鏈置換活性的BstDNA聚合酶，在恒溫條件下(60-65°C )高效(0.5-lh)擴增目標DNA。與目前廣泛流行的PCR核酸擴增技術相比，該技術具有不依賴溫度循環儀(PCR)等昂貴儀器，且靈敏度高，特異性好，反應速度快等優點。因此，已作為一種新興技術用于臨床疾病診斷、流行性細菌或病毒的現場快速檢測、動物胚胎性別鑒定及基因芯片開發等領域。在病毒檢測領域，目前已依托LAMP技術開發出用于快速診斷檢測包括乙肝肝炎病毒、流感病毒、SARS冠狀病毒、單純皰疹病毒在內的多種流行病毒的方法。在細菌檢測領域，該技術也廣泛應用于結核分支桿菌、大腸桿菌、肺炎鏈球菌、痢疾志賀菌的快速檢測。基于Y染色體上特異序列的差異，Hirayama等利用LAMP技術開展了對牛早期胚胎性別的快速檢測，將LAMP技術應用到了一個全新的領域。近年來一些科學工作者嘗試將其與核酸橫向流動試紙條(lateral flow dipstick, LFD)檢測技術相結合(LAMP-LFD)以實現LAMP現場檢測可視化。使得整個檢測過程中操作者不依賴任務專門的儀器設備，只需將LAMP的擴增產物和試紙條浸入緩沖液即可實現目標產物的檢測，整個操作過程簡便、安全。LAMP-LFD技術一經問世，便得到眾多科學工作者的親睞。尤其在水產養殖病害檢測領域，目前已經被成功用于桃拉病毒(Tarurasyndrome virus, TSV)、對奸白斑病毒(White spotsyndrome virus, WSSV)、傳染性肌肉壞死病毒(Infectious myonercrosis virus, IMNV)等病毒病原的檢測。隨著該技術的日益發展，兩個阻礙其在基層的應用推廣的瓶頸問題也逐漸凸顯出來。首先是LAMP的靈敏性帶來的氣溶膠污染問題。由于LAMP方法對于靶序列的擴展靈敏且擴增量大，同時在進行LFD檢測過程中常要涉及到開蓋取樣等過程，因此在實際應用過程中極易造成氣溶膠污染，進而造成檢測結果假陽性的產物。為應對這一問題，對于LAMP技術目前在實際應用過程中一般要求“要嚴格分區，規范操作”。即，根據LAMP操作流程將實驗區分為“樣品處理區，溶液配制區，模板添加區，檢測區”，而且在操作過程中要嚴格按照模板最后加入，先陰性、后陽性，從低到高的濃度進行操作。對于這樣嚴格苛刻的要求，在實際基層使用過程中很難做到，從而使得該技術在基層現場檢測中難于推廣。其次是高通量，多靶點問題。目前的技術方法只能對樣本進行逐個的，單靶點的檢測。而在實際使用過程中，用戶常常要面對是幾十甚至上百個樣本的不同靶點的同時檢測。現有的LAMP技術就顯得無能為力了。因此，如何合理的避免實際檢測過程中的氣溶膠污染，同時又能解決LAMP技術的高通量，多靶點的問題，成為能否推動LAMP技術在檢測領域的快速發展并最終真正服務于基層檢測單位的一個繞不開，也躲不過的問題。
技術實現思路
本技術所要解決的技術問題是提供高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置，具有結構簡單合理、高通量、多重性、多靶點、操作靈活方便快捷的特點。本技術解決上述技術問題所采用的技術方案為:一種高通量可視化全密閉分體式LAMP-LFD檢測芯片裝置，其特征在于:該檢測芯片系統裝置是由與離心機相連接實現均勻混料的混均收樣池、分體可拆裝的芯片反應盒以及可視化的LFD反應盒三部分組成，混均收樣池為圓盤形，其上端面設有用于加樣的第一毛細管道，混均收樣池內設有多層混合均勻槽，混均收樣池的外側周向分布有多個用于連接芯片反應盒的分配口 ；芯片反應盒的前端設有與混均收樣池的分配口相連接的接口，芯片反應盒內依次設有與接口相連通的第二毛細管道及反應擴增池，反應擴增池內設有與待檢目標物對應的探針，并通過后端的LFD密封蓋進行密封；LFD反應盒包括一中空的殼體，殼體的前部內置有一用于刺入LFD密封蓋中的雙管道針頭，殼體的后部分成二個上下密閉的腔體，其中第一腔體內配置有用于LAMP反應后的核酸可視化試驗驗證的LFD核酸試紙條，第二腔內密閉存有緩沖液試劑，第二腔體的前部設有單向閥，雙管道針頭的第二針管與與第二腔體的單向閥相連通，第一針管與第一腔體的LFD核酸試紙條相連通，當雙管道針頭的針頭刺破反應擴增池的LFD密封蓋后，打開單向閥，緩沖液試劑沿第二針管流入反應擴增池，并被第一針管利用虹吸原理吸入到LFD核酸試紙條上實現LAMP-LFD快速可視化反應。作為改進，所述混均收樣池是由圓盤形的上蓋和圓盤形的底座對合而成，第一毛細管道設置在上蓋上，第一毛細管道的一端與混合均勻槽相連通，另一端與加樣裝置相連，混合均勻槽設置在底座上，混合均勻槽是由若干層同心的分割圓環組成，在分割圓環上設有供料液從內槽流向外槽的缺口，分配口呈放射狀均勻設置在最外層的分割圓環上。作為改進，所述分割圓環為三層，缺口為3?4個弧形缺口，弧形缺口呈同方向彎曲地均勻間隔設置在分割圓環上，分配口內側的最外層的分割圓環的內壁上設有拋物線形狀的收納槽，收納槽的底部設有細孔，細孔通過分配口與芯片反應盒的接口相連通。作為改進，所述芯片反應盒包括一兩端開口的盒體，盒體的一端可拆卸地密封套設有一內設有第二毛細管道的接管，接口設置在接管的端部，反應擴增池可拆卸地密封套設在盒體的另一端，反應擴增池的前端設有與第二毛細管道相連接的毛細管道接口，在盒體內還設有與反應擴增池相連通的用于多余空氣回流的緩沖卸壓池。再改進，所述反應擴增池包括圓柱形外殼，圓柱形外殼底部向內凹陷成圓柱形空腔，毛細管道接口設置在殼體前端與圓柱形空腔相連通，探針設置在圓柱形空腔內，LFD密封蓋為密閉薄型材料，LFD密封蓋的上端設有可將LFD反應盒的雙管道針頭插入后密封連接的卡槽。進一步改進，所述緩沖卸壓池的下端與反應擴增池的毛細管道接口相連通，緩沖卸壓池的上端設本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種高通量可視化全密閉分體式LAMP?LFD檢測芯片裝置，其特征在于：該檢測芯片系統裝置是由與離心機相連接實現均勻混料的混均收樣池、分體可拆裝的芯片反應盒以及可視化的LFD反應盒三部分組成，混均收樣池為圓盤形，其上端面設有用于加樣的第一毛細管道，混均收樣池內設有多層混合均勻槽，混均收樣池的外側周向分布有多個用于連接芯片反應盒的分配口；芯片反應盒的前端設有與混均收樣池的分配口相連接的接口，芯片反應盒內依次設有與接口相連通的第二毛細管道及反應擴增池，反應擴增池內設有與待檢目標物對應的探針，并通過后端的LFD密封蓋進行密封；LFD反應盒包括一中空的殼體，殼體的前部內置有一用于刺入LFD密封蓋中的雙管道針頭，殼體的后部分成二個上下密閉的腔體，其中第一腔體內配置有用于LAMP反應后的核酸可視化試驗驗證的LFD核酸試紙條，第二腔內密閉存有緩沖液試劑，第二腔體的前部設有單向閥，雙管道針頭的第二針管與第二腔體的單向閥相連通，第一針管與第一腔體的LFD核酸試紙條相連通，當雙管道針頭的針頭刺破反應擴增池的LFD密封蓋后，打開單向閥，緩沖液試劑沿第二針管流入反應擴增池，并被第一針管利用虹吸原理吸入到LFD核酸試紙條上實現LAMP?LFD快速可視化反應。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：朱鵬，嚴小軍，陳炯，陳先鋒，段維軍，張繼紅，王建峰，范建忠，黃海龍，姚香菊，龔朝暉，
申請(專利權)人：寧波大學，寧波博奧生物工程有限公司，寧波檢驗檢疫科學技術研究院，
類型：新型
國別省市：浙江;33