本發明專利技術公開了一種病癥結合的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的構建方法，包括以下步驟：取清潔級成年雄性SD大鼠，將大鼠置于凈化籠中，溫度為19-23℃，相對濕度40％-50％，自然采光，以大鼠標準飼料進行飼喂，自由飲水；適應性飼喂1周后，以每日所給飼料重量的0.2％的阿霉素進行灌胃，并以3.5mg/kg進行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周1次，連續6周即得。本發明專利技術的有益效果是：能夠很好地模擬慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證，即符合西醫慢性心力衰竭的病理特性(如LVEF、LVFS顯著降低，BNP增高)，又能夠表現出中醫心氣虛兼血瘀水腫證候表現，復制方法穩定性、重復性好，簡單客觀。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種動物模型的構建方法，尤其涉及一種病證結合的。
技術介紹
慢性心力衰竭是一種臨床表現錯綜復雜的綜合征，可以穩定、失代償或惡化。中醫理論認為:心衰病位主要在心，但與其他四臟相關聯，其病機始動因素在于年老體虛、膏粱厚味、憂愁思慮、勞倦內傷等所致的脾失健運或脾氣虧虛。然脾土生于心火，子病可及母，故脾失健運可誘發和加重心力衰竭的發生。慢性心力衰竭中醫證候規律演變初期，首先表現為心氣虛證或心氣虧虛，癥見心悸氣短，胸悶自汗，動則加重，倦怠懶言，舌淡或有齒痕，苔薄白，脈弱或結代；其次演變發展為心氣虛兼陰虛證，癥見心悸氣短，五心煩熱，盜汗少寐，伴或不伴眩暈耳鳴，口干欲飲，舌紅少苔或有裂痕，脈沉細。慢性心力衰竭后期，中醫證候規律演變為心氣虧虛兼血瘀證，癥見唇口紫紺，脅下積聚，頸脈怒張，或見胸部刺痛，伴有或不伴有胸悶氣短，乏力自汗，倦怠懶言。舌質紫暗，或有瘀斑，舌下絡脈青紫，脈沉澀或結代；進而惡化形成心氣虧虛兼血瘀水腫證，癥見心悸氣短，全身浮腫，尿少肢腫，頸脈顯露，脅下積聚，甚則喘息不得臥，甚或汗出濕冷，四肢厥逆，舌質暗淡或絳紫，苔白滑，脈沉細，甚則脈微欲絕。動物實驗是連接醫學基礎與臨床的橋梁與紐帶，而證候是中醫的核心和靈魂，所以研發病證結合的動物模型是中醫基礎實驗研究的必要手段。目前還未見有慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的研究。雖然有采用阿霉素給大鼠隔日腹腔注射制作慢性心衰模型，但是不能完全模擬慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證，如胸痛、胸悶憋氣、脅下痞塊、浮腫尿少、形寒肢冷等。為了進一步深入探討慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證本質及探尋其有效治療中藥，很有必要進行慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的，建立和評價研究，為研究中醫藥在防治慢性心力衰竭中的療效及作用機制提供必要的實驗基礎。
技術實現思路
針對現有技術的不足，本專利技術提供了一種病證結合的，能夠很好地模擬慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證的SD大鼠模型，即符合西醫慢性心力衰竭的病理特征(LVEF、LVFS顯著降低，BNP增高)，又能夠表現出心悸氣短、胸悶憋氣、脅下痞塊、浮腫尿少、形寒肢冷的中醫心氣虛兼血瘀水腫證候表現。復制方法穩定性、重復性好，簡單客觀。為研究中醫藥在防治慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證中的療效及作用機制提供必要的實驗基礎。為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供了一種，所述構建方法包括以下步驟:(I)取清潔級成年雄性SD大鼠，將大鼠置于凈化籠中，溫度為19_23°C，相對濕度40% -50%,自然采光，以大鼠標準飼料進行飼喂，自由飲水；(2)適應性飼喂I周后，以每日所給飼料重量的0.1% -0.3%的阿霉素進行灌胃；并以2-5mg/kg進行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周I次；連續6周即得。所述阿霉素優選地以每日所給飼料重量的0.2%進行灌胃；丙基硫氧嘧啶優選地以3.5mg/kg進行腹腔注射，每周I次。所述動物模型建模完成后，采用以下評價指標對動物模型進行評價:左室射血分數、左室內徑縮短率、心率；心肌病理切片、心重指數；呼吸頻率、肺重指數、肺臟病理切片；尿量；肝重指數、肝臟病理切片；力竭性游泳試驗；耳溫、血清BNP、T3、T4、TSH ;上述評價指標均采用盲法檢測；[0011 ] 所述評價的具體方法如下:(I)在建模前、后分別測量大鼠左室射血分數、左室內徑縮短率、心率、呼吸頻率、尿量、耳溫和力竭性游泳實驗；(2)建模結束后，腹主動脈取血后，分離血清，并在_80°C的條件下保持，剖取心臟、肺臟、肝臟，洗去殘血，濾紙吸干，稱量后計算出心重指數、肺重指數、肝重指數；(3)取少量左室肌、肺臟、肝臟標本，福爾馬林固定，HE染色后，采用盲法在顯微鏡下觀察并鑷片，通過ELISA法檢測血清BNP、T3、T4、TSH ；若與建模前相比，建模后大鼠左室射血分數減少率大于等于50%，左室內徑縮短率減少率大于等于50%，心率增加量大于等于50次/分，呼吸頻率增加量大于等于20次/分，尿量減少量大于等于4ml/24h，耳溫降低量大于等于0.5°C，力竭性游泳試驗的時間減少量大于等于55min ；若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L, T3含量小于等于43.5ng/ml, T4含量小于等于60ng/ml, TSH含量大于等于25ng/ml ；若建模后，心重指數至少為5.5g/kg、肺重指數至少為5.5g/kg、肝重指數至少為30g/kg ；同時滿足上述條件，則慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證的動物模型建模成功。所述左室射血分數(LVEF)、左室內徑縮短率(LVFS)均采用Teichholz法測量；心率采用無創套尾法監測；呼吸頻率的測量方法為上午8-10點熟睡時，記錄20s呼吸次數，最終結果乘以3 ;尿量的檢測方法為:統一灌胃5ml水后，收集24小時代謝籠尿液；力竭性游泳的方法為:大鼠連續反復下沉，沉入水下三次，每次超過5s時間，至力竭為止，統計游泳的總時間。本專利技術還提供了一種慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的評價方法，所述評價方法采用以下評價指標對動物模型進行評價:LVEF、LVFS、心率；心肌病理切片、心重指數；呼吸頻率、肺重指數、肺臟病理切片；尿量；肝重指數、肝臟病理切片；力竭性游泳試驗；耳溫、血清BNP、T3、T4、TSH ;上述評價指標均采用盲法檢測；所述評價的具體方法如下:(I)在建模前、后分別測量大鼠LVEF、LVFS、心率、呼吸頻率、尿量、耳溫和力竭性游泳實驗；(2)建模結束后，腹主動脈取血后，分離血清，并在_80°C的條件下保持，剖取心臟、肺臟、肝臟，洗去殘血，濾紙吸干，稱量后計算出心重指數、肺重指數、肝重指數；(3)取少量左室肌、肺臟、肝臟標本，福爾馬林固定，HE染色后，采用盲法在顯微鏡下觀察并鑷片，通過ELISA法檢測血清BNP、T3、T4、TSH ；若與建模前相比，建模后大鼠左室射血分數減少率大于等于50 %，左室內徑縮短率減少率大于等于50%，心率增加量大于等于50次/分，呼吸頻率增加量大于等于20次/分，尿量減少量大于等于4ml/24h，耳溫降低量大于等于0.5°C，力竭性游泳試驗的時間減少量大于等于55min ；若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L, T3含量小于等于43.5ng/ml, T4含量小于等于60ng/ml, TSH含量大于等于25ng/ml ；若建模后，心重指數至少為5.5g/kg、肺重指數至少為5.5g/kg、肝重指數至少為30g/kg ；同時滿足上述條件，則慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證的動物模型建模成功。所述LVEF、LVFS均采用Teichholz法測量；心率采用無創套尾法監測；呼吸頻率的測量方法為上午8-10點熟睡時，記錄20s呼吸次數，最終結果乘以3 ;尿量的檢測方法為:統一灌胃5ml水后，收集24小時代謝籠尿液；力竭性游泳的方法為:大鼠連續反復下沉，沉入水下三次，每次超過5s時間，至力竭為止，統計游泳的總時間。本專利技術的有益效果是:與傳統慢性心力衰竭的動物模型相比，本專利技術采用雙重因子攻擊法構建的動物模型，能夠很好地模擬慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證，即符合西醫慢性心力衰竭的病理特征(LVEF、LVFS顯著降低，BNP增高)，又能夠表現出心悸氣短、胸悶憋氣、脅下痞塊、浮腫本文檔來自技高網...
【技術保護點】
慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括以下步驟：(1)取清潔級成年雄性SD大鼠，將大鼠置于凈化籠中，溫度為19?23℃，相對濕度40％?50％，自然采光，以大鼠標準飼料進行飼喂，自由飲水；(2)適應性飼喂1周后，以每日所給飼料重量的0.1％?0.3％的阿霉素進行灌胃；并以2?5mg/kg進行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周1次；連續6周即得。
【技術特征摘要】
1.慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括以下步驟: (1)取清潔級成年雄性SD大鼠，將大鼠置于凈化籠中，溫度為19-23°c，相對濕度40% -50%,自然采光，以大鼠標準飼料進行飼喂，自由飲水； (2)適應性飼喂I周后，以每日所給飼料重量的0.1% -0.3%的阿霉素進行灌胃；并以2-5mg/kg進行腹腔注射丙基硫氧嘧啶，每周I次；連續6周即得。2.根據權利要求1所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型的構建方法，其特征在于，所述阿霉素以每日所給飼料重量的0.2%進行灌胃；丙基硫氧嘧啶以3.5mg/kg進行腹腔注射，每周I次。3.根據權利要求1或2所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型，其特征在于，所述動物模型建模完成后，采用以下評價指標對動物模型進行評價:左室射血分數、左室內徑縮短率、心率；心肌病理切片、心重指數；呼吸頻率、肺重指數、肺臟病理切片；尿量；肝重指數、肝臟病理切片；力竭性游泳試驗；耳溫、血清8冊333433!1;上述評價指標均采用盲法檢測； 所述評價的具體方法如下: (1)在建模前、后分別測量大鼠左室射血分數、左室內徑縮短率、心率、呼吸頻率、尿量、耳溫和力竭性游泳實驗； (2)建模結束后，腹主動脈取血后，分離血清，并在_80°C的條件下保持，剖取心臟、肺臟、肝臟，洗去殘血 ，濾紙吸干，稱量后計算出心重指數、肺重指數、肝重指數； (3)取少量左室肌、肺臟、肝臟標本，福爾馬林固定，HE染色后，采用盲法在顯微鏡下觀察并鑷片，通過ELISA法檢測血清BNP、T3、T4、TSH ； 若與建模前相比，建模后大鼠左室射血分數減少率大于等于50 %，左室內徑縮短率減少率大于等于50%，心率增加量大于等于50次/分，呼吸頻率增加量大于等于20次/分，尿量減少量大于等于4ml/24h，耳溫降低量大于等于0.5°C，力竭性游泳試驗的時間減少量大于等于55min ； 若建模后，大鼠血清BNP含量大于等于70hg/L，T3含量小于等于43.5ng/ml，T4含量小于等于60ng/ml, TSH含量大于等于25ng/ml ； 若建模后，心重指數至少為5.5g/kg、肺重指數至少為5.5g/kg、肝重指數至少為30g/kg ； 同時滿足上述條件,則慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證的動物模型建模成功。4.根據權利要求1-3任一項所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型，其特征在于，所述左室射血分數、左室內徑縮短率均采用Teichholz法測量；心率采用無創套尾法監測。5.根據權利要求1-4任一項所述的慢性心力衰竭心氣虛兼血瘀水腫證動物模型，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周杰，葛明，王營，
申請(專利權)人：周杰，
類型：發明
國別省市：山東;37
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