本發明專利技術主要公開一種從牡丹花中提取牡丹花總黃酮的方法，包括采用乙醇溶液提取、牡丹花總黃酮粗品樹脂富集、牡丹花總黃酮精制品沉淀富集和牡丹花總黃酮進一步純化四大步驟，本發明專利技術通過先加醋酸鉛沉淀，再加H2S脫鉛的方式，有效提高了產品純度，達到96%以上，產率達到1.0%以上，所得到的黃酮組成明確，適合于工業化制備等優點，得到的黃酮類化合物活性測試顯示出較好的活血化瘀作用。本方法可以用于從牡丹花中較大規模的提取牡丹花總黃酮類化合物，為牡丹花及其中所含黃酮類化合物在今后的研究開發奠定了基礎。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于天然產物中有效成分提取及分離
，具體涉及。
技術介紹
牡丹原產于中國西部秦嶺和大巴山一帶山區，為多年生落葉小灌木，是我國特有的木本名貴花卉，有數千年的自然生長和兩千多年的人工栽培歷史。牡丹全身是寶，其根、莖、葉、花、種子等均居有重要的價值。目前，在牡丹培育和研究方法做了很多工作，在牡丹花研究方面，吳龍奇等[吳龍奇，朱文學，易軍鵬，等.牡丹花紅色素類型判定及提取工藝試驗[J].農業機械學報，2005,36(10): 77-80]研究確定了牡丹花色素為花青素類色素，提取牡丹花紅色素適宜的條件為:浸取劑為鹽酸體積分數為I %的酸性無水乙醇，浸取溫度50°C，浸取時間3h。樊金玲等[樊金玲，朱文學，馬海樂，等.高效液相色譜-電噴霧質譜法分析牡丹花 中花色苷類化合物[J].食品科學，2007,28(8): 367-371]利用高效液相質譜一電噴霧質譜法分離檢測了 5種花色苷，分別鑒定為矢車菊_3，5-0-二葡萄糖苷、矢車菊-3-0-葡萄糖苷、芍藥_3，5-0- 二葡萄糖苷、芍藥-3-0-葡萄糖苷和天竺葵-3，5-0- 二葡萄糖苷。但是，在牡丹花黃酮類化合物制備分離，物質基礎確認及活性研究方面，目前研究還相對較少。
技術實現思路
本專利技術的目的為針對現有技術中牡丹花黃酮類化合物提取技術不足的問題，提供了一種從牡丹花中提取高純度牡丹花總黃酮的方法。本專利技術實現上述目的采用的技術方案是:，包括以下步驟: 1)采用乙醇溶液提取 采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進行粉碎，然后加入到質量濃度為70-90%的乙醇溶液中浸泡6-48h，浸泡結束后進行超聲提取20-40min，提取結束后進行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質量濃度為70-90%的乙醇溶液，重復上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用； 2)牡丹花總黃酮粗品樹脂富集 將步驟I)得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用； 3)牡丹花總黃酮精制品沉淀富集將步驟2)得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20-30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2-3次，棄去濾液和洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40-50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%的乙醇溶液洗滌2-3次，合并濾液和洗液，調節PH為6.5-7.0，減壓濃縮回收乙醇，即得到牡丹花總黃酮精制品，備用； 4)牡丹花總黃酮進一步純化 將步驟3)得到的牡丹花總黃酮精制品用其重量30-50倍的甲醇溶解，甲醇的溫度為50-60°C，然后趁熱用牡丹花總黃酮精制品重量10-20倍的活性炭過濾，收集濾液，減壓回收甲醇，即得到經過進一步純化的牡丹花總黃酮。所述的步驟I)中浸泡牡丹花瓣時采用的質量濃度為70-90%的乙醇溶液的添加量為干燥牡丹花瓣重量的10-20倍，超聲提取濾渣時乙醇溶液的添加量為濾渣重量的10-20倍。所述的步驟2)中溶解提取浸膏時蒸餾水的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中的樹脂為DlOl或AB-8型大孔吸附樹脂，或者聚酰胺樹脂。所述的步驟2)中樹脂的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中不同濃度的乙醇水溶液的洗脫體積均為柱體積的3-5倍。本專利技術的有益效果 本專利技術提供的提取方法與現有技術相比，方法簡便、快捷，通過先加醋酸鉛沉淀，再加H2S脫鉛的方式，有效提高了產品純度，達到96%以上，產率達到1.0%以上，所得到的黃酮組成明確，適合于工業化制備等優點，得到的黃酮類化合物活性測試顯示出較好的活血化瘀作用。本方法可以用于從牡丹花中較大規模的提取牡丹花總黃酮類化合物，為牡丹花及其中所含黃酮類化合物在今后的研究開發奠定了基礎。【附圖說明】圖1為蘆丁的紫外吸收光譜圖； 圖2為蘆丁的吸光度標準曲線； 圖3為化合物I的核磁共振氫譜圖； 圖4為化合物I的核磁共振碳譜圖； 圖5為化合物II的核磁共振氫譜圖； 圖6為化合物II的核磁共振碳譜圖； 圖7為化合物III的核磁共振氫譜圖； 圖8為化合物III的核磁共振碳譜圖； 圖9為化合物IV的核磁共振氫譜圖； 圖10為化合物IV的核磁共振碳譜圖； 圖11為化合物V的核磁共振氫譜圖。【具體實施方式】，包括以下步驟:1)采用乙醇溶液提取 采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進行粉碎，然后加入到質量濃度為70-90%的乙醇溶液中浸泡6-48h，浸泡結束后進行超聲提取20-40min，提取結束后進行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質量濃度為70-90%的乙醇溶液，重復上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用； 2)牡丹花總黃酮粗品樹脂富集 將步驟I)得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用； 3)牡丹花總黃酮精制品沉淀富集 將步驟2)得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20-30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2-3次，棄去濾液和洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40-50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%的乙醇溶液洗滌2-3次，合并濾液和洗液，調節PH為6.5-7.0，減壓濃縮回收乙醇，即得到牡丹花總黃酮精制品，備用； 4)牡丹花總黃酮進一步純化 將步驟3)得到的牡丹花總黃酮精制品用其重量30-50倍的甲醇溶解，甲醇的溫度為50-60°C，然后趁熱用牡丹花總黃酮精制品重量10-20倍的活性炭過濾，收集濾液，減壓回收甲醇，即得到經過進一步純化的牡丹花總黃酮。所述的步驟I)中浸泡牡丹花瓣時采用的質量濃度為70-90%的乙醇溶液的添加量為干燥牡丹花瓣重量的10-20倍，超聲提取濾渣時乙醇溶液的添加量為濾渣重量的10-20倍。所述的步驟2)中溶解提取浸膏時蒸餾水的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中的樹脂為DlOl或AB-8型大孔吸附樹脂，或者聚酰胺樹脂。所述的步驟2)中樹脂的用量為提取浸膏重量的200-400倍。所述的步驟2)中不同濃度的乙醇水溶液的洗脫體積均為柱體積的3-5倍。一、總黃酮含量的計算方法: (I)最大波長掃描 取少量蘆丁，加入70%乙醇溶解，然后移取2 mL溶液至10 mL容量瓶中，繼續加入7本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種從牡丹花中提取牡丹花總黃酮的方法，其特征在于：包括以下步驟：1）采用乙醇溶液提取采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進行粉碎，然后加入到質量濃度為70?90%的乙醇溶液中浸泡6?48h，浸泡結束后進行超聲提取20?40min，提取結束后進行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質量濃度為70?90%的乙醇溶液，重復上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用；2）牡丹花總黃酮粗品樹脂富集將步驟1）得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50?60℃下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用；3）牡丹花總黃酮精制品沉淀富集將步驟2）得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20?30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2?3次，棄去濾液和洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40?50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S?脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%的乙醇溶液洗滌2?3次，合并濾液和洗液，調節pH為6.5?7.0，減壓濃縮回收乙醇，即得到牡丹花總黃酮精制品，備用；4）牡丹花總黃酮進一步純化將步驟3）得到的牡丹花總黃酮精制品用其重量30?50倍的甲醇溶解，甲醇的溫度為50?60℃，然后趁熱用牡丹花總黃酮精制品重量10?20倍的活性炭過濾，收集濾液，減壓回收甲醇，即得到經過進一步純化的牡丹花總黃酮。...
【技術特征摘要】
1.一種從牡丹花中提取牡丹花總黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)采用乙醇溶液提取 采摘牡丹花原料，除去花萼、花托，得到牡丹花瓣，將牡丹花瓣在室溫下干燥后進行粉碎，然后加入到質量濃度為70-90%的乙醇溶液中浸泡6-48h，浸泡結束后進行超聲提取20-40min，提取結束后進行過濾，收集濾液，并向得到的濾渣中加入質量濃度為70-90%的乙醇溶液，重復上述超聲提取和過濾操作2次，合并所有濾液，減壓濃縮至無溶劑，得提取浸膏，備用； 2)牡丹花總黃酮粗品樹脂富集 將步驟I)得到的提取浸膏用蒸餾水溶解，過濾，將得到的濾液用樹脂進行吸附，裝柱，然后依次用體積濃度為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，收集體積濃度為60%的乙醇水溶液洗脫餾分，減壓濃縮至浸膏狀物，并將浸膏狀物在50-60°C下真空減壓干燥，干燥完成即得牡丹花總黃酮粗品，備用； 3)牡丹花總黃酮精制品沉淀富集 將步驟2)得到的牡丹花總黃酮粗品用其重量20-30倍的體積濃度為95%的乙醇溶液溶解，溶解完全后加入醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成，過濾，將得到的沉淀用水洗滌2-3次，棄去濾液和 洗滌液，得到沉淀物，備用；將沉淀物干燥后懸浮于其重量40-50倍的體積濃度為95%的乙醇溶液中，通入H2S脫鉛，過濾，濾渣用體積濃度為95%...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉普，鄧瑞雪，易軍鵬，李小方，高嘉嶼，尹衛平，柴元武，時清亮，
申請(專利權)人：河南科技大學，
類型：發明
國別省市：河南;41
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