一種葉螨生物測定方法及其應用技術

本發明專利技術“一種葉螨生物測定方法及其應用”，屬于植物蟲害防治領域。該方法中，將被供試藥劑浸泡過的葉碟放置在相同的供試藥劑浸泡過的藥管中，然后放入室內飼養的或者田間直接采集的葉螨進行培養，一段時間后計算葉螨的死亡情況從而評估該藥劑的對葉螨的毒殺活性，本發明專利技術的方法和操作過程具有簡便、快速、可靠、實用的特點，解決了現有常用的葉螨生物測定方法中存在的缺陷和不足。

【技術實現步驟摘要】
一種葉螨生物測定方法及其應用
[〇〇〇1] 本專利技術涉及一種葉螨生物測定方法，屬于植物蟲害防治領域。
技術介紹
葉螨屬節肢動物門（Arthropoda)、蛛形綱（Arachnida)、蝶螨亞綱（Acari)、真螨 目（Acariformes)、葉螨總科（Tetranychoidea)，葉螨屬（Tetranychus)。葉螨在田間發 生種類繁多，如二斑葉螨Tetranychus urticae、朱砂葉螨T. cinnabarinus和截形葉螨 T. truncatus等，葉螨分布廣泛、寄主植物種類多，是一種世界性的農業害螨。田間防治不及 時，常可造成經濟損失15% -20%。 生產上對葉螨的防治主要以化學防治措施為主。防治葉螨的高效低毒藥劑的篩選 基礎是基于葉螨生物測定的結果進行評價的。常用的葉螨生物測定方法是聯合國糧農組織 所推薦使用的標準方法一玻片浸漬法（FA0,1980)，需要用零號毛筆將葉螨背部小心地粘貼 在雙面膠帶上，再浸漬在不同濃度的藥液中（唐小鳳等，2014)，也是目前很多實驗室常用 的葉螨生測方法。但該技術明顯的缺點是操作技術相對復雜，易對螨體造成損傷，操作者需 要進行較長時間的技術練習才能操作成功；而且這種方法主要測試的觸殺和內吸性能，而 藥劑的胃毒特性則不易測試。第二種方法是葉碟噴霧法，該方法是將健康活潑的雌成螨挑 于干凈的寄主植物葉片做成的葉碟上，待葉螨種群穩定后，將其及葉碟一起置于Potter噴 霧塔下進行噴霧處理，而后晾干飼養即可（Tsagkarakou et al.，2009)。該技術的優點是較 為接近田間的實際農藥施用過程，操作簡單，對螨體損傷小，缺點是噴在葉碟上的藥液量多 少對殺螨效果影響較大，另外儀器相對昂貴，且對于儀器的要求較為嚴格。葉片殘毒法也稱 為藥膜法，是將寄主植物葉片先浸漬于藥液中，取出晾干后再將葉螨挑于葉片上，但是藥膜 的薄厚對于實驗結果有一定的影響，而且由于害螨只是通過螨足接觸藥劑，不能確定具體 的施藥量，對室內研究來說具有一定的局限性（陳麗麗等，2005)，而且葉螨也常出現逃逸， 影響計數。近幾年國外學者推薦使用瓶膜法（Residual Coated Vial,簡稱RCV)(Kwon et al·，2010 ;Feng et al·，2011 ;Wang et al·，2014)，但是這種方法在使用過程中，需要從收 集葉螨卵開始，采用3-5天內孵化的成螨進行測試（減少其吐絲結網的比例），因此試蟲準 備時間較長，同時由于藥劑的脅迫壓力，葉螨仍會出現應急反應而吐絲、纏繞等，造成的試 驗誤差較大；另外，該方法僅能測試藥劑的觸殺活性，藥劑的胃毒、內吸活性則難以測定。
技術實現思路
針對上述生物測定方法中存在的問題和缺點，本專利技術提供一種新的葉螨生物測定 方法，技術方案如下： -種葉螨生物測定方法，包括如下步驟： (1)配藥：將供試藥劑配制成設定濃度的藥液； (2)浸管：將所述藥液轉入管狀容器中，使得管狀容器完全被藥液浸滿，不留空 隙； (3)晾管：浸管后倒掉管內藥液，將管狀容器倒置，室溫下晾干； (4)葉片浸藥：將新鮮的寄主植物葉片制成大小均一的圓形葉片，放入所述藥液 中浸泡，然后室溫晾干；[〇〇1〇] (5)裝管：將所述藥液浸過的葉片夾入浸管后的所述管狀容器中，所述葉片平整 斜向且葉背向上放置，然后再放入受試葉螨，蓋上管狀容器的蓋子； (6)培養箱飼養：將裝管后的所述管狀容器放置在溫度為26 土 1°C，光暗周期L: D =16h:8h的昆蟲培養箱中飼養； (7)結果檢查：檢查受試葉螨的死亡與成活情況，記錄其死亡數和成活數。 所述浸管的參數為：室溫下，浸泡2個小時。 所述葉片浸藥的時間為10秒鐘。 所述管狀容器為1. 5?2ml的塑料離心管；所述葉片的直徑為1. 5cm的圓形葉片。 每個所述離心管放入30頭雌成螨進行生物測定；放入葉螨的方法是將葉螨放入 折疊成漏斗形狀的稱量紙中，葉螨通過漏斗底部小口進入離心管中。[〇〇17] 上述任一方法在葉螨生物測定中的應用。[〇〇18] 一種篩選有效防治葉螨的藥劑的方法，其特征在于：采用上述任一所述的方法； 所述設定濃度指設定為系列梯度濃度； 所述供試藥劑為一至多種； 對每種供試藥劑的每個設定濃度下的藥液進行步驟（1)?（7)的操作，根據步驟 7的結果檢查篩選出對葉螨有毒殺活性的有效藥劑種類，進而明確葉螨對各藥劑的敏感度。 本專利技術提供一種新的葉螨生物測定方法，所述方法不僅在離心管內壁全部涂有藥 齊U，且放置的植物葉蝶也在藥液中浸過，因此稱為藥管浸葉法。該方法能夠對藥劑可能具有 的胃毒、觸殺、內吸活性同時進行綜合測定。結果顯示在測試藥劑的殺螨活性時，藥劑不同 系列濃度與葉螨的死亡率之間的線性關系良好，測試結果可靠。 與用于葉螨生物測定常用的玻片浸漬法相比，本專利技術的方法操作簡單，且不會損 傷受試葉螨蟲體，減小了因蟲體本身損傷導致的試驗誤差，且能夠對藥劑的胃毒特性進行 測定。與葉碟噴霧法和藥膜法相比，所述方法不需要任何昂貴儀器，所用材料常見其成本極 其低廉，不同批次試驗中每個葉片上的藥量相對一致，提高了試驗結果的穩定性，且不存在 葉螨逃逸、淹死等其它影響試驗結果的問題。與瓶膜法（RCV)相比，本專利技術的藥管浸葉法主 要具有以下優點：第一，測試所用材料采用實驗室內常見的1. 5?2ml的塑料離心管，材料 易得，且成本低；第二，用藥液將離心管浸滿無空隙，放置2h，而不需要采用特制的旋轉器 進行轉動lh ;第三，藥管內加入浸過藥液的葉螨寄主植物葉蝶，增加對藥劑胃毒作用的測 試；第四，測試葉螨的挑取，不需要采用3?5天內孵化的雌成螨，可以采集田間種群進行直 接測試，而不擔心葉螨吐絲纏繞的問題。 綜上，本專利技術的葉螨生物測定方法具有以下明顯的技術優點：（1)簡便性：采用 藥管浸葉法進行葉螨的生物測定，技術操作簡便，不需要像采用玻片浸漬法一樣反復練習 才能掌握其操作步驟；（2)快速性：葉螨可以隨時采集隨時進行生物測定，不需如瓶膜法 (RCV)中必須采用孵化前3-5天的雌成螨進行；（3)可靠性：由于螨體不會受到損傷，且加 入了可供葉螨取食的寄主葉片，測試過程中葉螨不會結網，結果檢查比較容易，減小了試驗 誤差，提高了測試結果的可靠性和穩定性；(4)實用性：加入可供葉螨取食的浸藥葉片可同 時測試藥劑的胃毒、觸殺、內吸活性，解決了常規的玻片浸漬法（Slide-dip method)和瓶膜 法（RCV)中主要測試藥劑的觸殺活性而不能測試其它特性的問題，測試過程與田間葉螨種 群的受藥過程更為接近，因此試驗結果更科學。 【附圖說明】 圖1.采用本專利技術方法獲得的阿維菌素的劑量對數值與葉螨死亡率機率值之間的 線性關系； 其中，縱坐標表示截形葉螨死亡率的機率值，橫坐標表示阿維菌素各測試濃度的 對數值。 圖2.采用本專利技術方法獲得的噠螨靈的劑量對數值與葉螨死亡率機率值之間的線 性關系； 其中，縱坐標表示截形葉螨死亡率的機率值，橫坐標表示噠螨靈各測試濃度的對 數值。 【具體實施方式】 以下通過具體實施例對本專利技術進行解釋，需要說明的是，本專利技術的保護范圍并不 局限于此。 試驗材料的來源： 截形葉螨室內相對敏感種群：由南京農業大學植物保護學院洪曉月本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種葉螨生物測定方法，包括如下步驟：(1)配藥：將供試藥劑配制成設定濃度的藥液；(2)浸管：將所述藥液轉入管狀容器中，使得管狀容器完全被藥液浸滿，不留空隙；(3)晾管：浸管后倒掉管內藥液，將管狀容器倒置，室溫下晾干；(4)葉片浸藥：將新鮮的寄主植物葉片制成大小均一的圓形葉片，放入所述藥液中浸泡，然后室溫晾干；(5)裝管：將所述藥液浸過的葉片夾入浸管后的所述管狀容器中，所述葉片平整斜向且葉背向上放置，然后再放入受試葉螨，蓋上管狀容器的蓋子；(6)培養箱飼養：將裝管后的所述管狀容器放置在溫度為26±1℃，光暗周期L:D＝16h:8h的昆蟲培養箱中飼養；(7)結果檢查：檢查受試葉螨的死亡與成活情況，記錄其死亡數和成活數。

【技術特征摘要】
1. 一種葉螨生物測定方法，包括如下步驟： (1) 配藥：將供試藥劑配制成設定濃度的藥液； (2) 浸管：將所述藥液轉入管狀容器中，使得管狀容器完全被藥液浸滿，不留空隙； (3) 晾管：浸管后倒掉管內藥液，將管狀容器倒置，室溫下晾干； (4) 葉片浸藥：將新鮮的寄主植物葉片制成大小均一的圓形葉片，放入所述藥液中浸 泡，然后室溫晾干； (5) 裝管：將所述藥液浸過的葉片夾入浸管后的所述管狀容器中，所述葉片平整斜向 且葉背向上放置，然后再放入受試葉螨，蓋上管狀容器的蓋子； (6) 培養箱飼養：將裝管后的所述管狀容器放置在溫度為26土TC，光暗周期L:D = 16h:8h的昆蟲培養箱中飼養； (7) 結果檢查：檢查受試葉螨的死亡與成活情況，記錄其死亡數和成活數。2. 根據權利要求1所述的方法，所述浸管的參數為：室...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王少麗，王玲，張友軍，吳青君，謝文，徐寶云，
申請(專利權)人：中國農業科學院蔬菜花卉研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11