【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物制劑
，特別涉及一種能夠有效提高白細胞活力和純度的。
技術介紹
干擾素(IFN)是一種廣譜抗病毒劑，并不直接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細胞表面受體作用使細胞產生抗病毒蛋白，從而抑制乙肝病毒的復制，其類型分為三類，α -(白細胞)型、(成纖維細胞)型和Y-(淋巴細胞)型；同時還可增強自然殺傷細胞(NK細胞)、巨噬細胞和T淋巴細胞的活力，從而起到免疫調節作用，并增強抗病毒能力。干擾素于1957年由Issacs和Lindeman首先發現,它是一組具有多種功能的活性蛋白質(主要是糖蛋白)，是一種由單核細胞和淋巴細胞產生的細胞因子。1979年Carter從豬白細胞中成功誘導出干擾素，研究表明:豬白細胞干擾素(PLeIFN)是一種小分子蛋白質，如同豬的胰島素、促甲狀腺素等小分子多肽，可以作用于動物機體表現出高抗病毒活性而無副作用。PLeIFN作為光譜抗病毒藥物，具有抗病毒、抑制腫瘤細胞生長、調節免疫反應等多種生物學功能，其療效在醫學臨床已經得到普遍肯定。隨著病原菌新菌株、變異株的不斷出現，目前很多藥物對某些畜禽疾病已經難以顯示滿意的防治效果，尤其是病毒性疾病的危害日益嚴重。特別是近些年來，豬病毒性傳染病發病率較高，嚴重地阻礙著養豬業的發展。而PLeIFN作為一種生物制品，不僅治療直接，而且安全有效，同時PLeIFN的使用對目前尚無有效藥物治療的豬病毒性疾病具有重要的臨床意義。然而，在現有的PleIFN制備過程中，由于白細胞活性低、雜蛋白的過多等原因，導致現有豬白細胞干擾素的生產成本過高、產品質量難控制以及臨床療效...
【技術保護點】
一種豬白細胞干擾素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1）、將無菌方法采集的新鮮抗凝血加入到等體積30g/L的明膠生理鹽水中，混合均勻后靜置在37℃恒溫箱中，至分層清楚，取上層液以3000rpm離心15min，棄上清液，重懸沉淀；??步驟2）、取步驟1收集的沉淀按照體積比1：1加入質量體積濃度0.83%的氯化銨溶液，混合均勻后以3000rpm離心15min，取第一次離心后的沉淀再次按照1：1的比例加入0.83%的氯化銨溶液，混合均勻后以3000rpm離心15min，將二次離心后的沉淀用Hanks液洗滌三遍，加入原全血液1～1.5倍體積量的含5％豬血清的Eagle’s?MEM混合培養液懸浮，根據細胞計數的結果進行稀釋，將豬白細胞數控制在1×107個/ml～5×107個/ml之間；??步驟3）、在已稀釋好的每毫升細胞懸液中加入含100個活性單位的豬白細胞干擾素，置于37℃水浴搖床攪拌培養3h；步驟4）、按照每毫升豬白細胞懸液40～80HA?NDVⅡ的加入量，在細胞懸液中加入一定量新城疫病毒NDVⅡ，于水浴恒溫振蕩器37℃旋轉培養24h，培養時分別在2h~3h、6h~7h期間加入1??...
【技術特征摘要】
1.一種豬白細胞干擾素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟I)、將無菌方法采集的新鮮抗凝血加入到等體積30g/L的明膠生理鹽水中，混合均勻后靜置在37°C恒溫箱中，至分層清楚，取上層液以3000rpm離心15min，棄上清液，重懸沉淀； 步驟2)、取步驟I收集的沉淀按照體積比1:1加入質量體積濃度0.83%的氯化銨溶液，混合均勻后以3000rpm離心15min，取第一次離心后的沉淀再次按照1:1的比例加入0.83%的氯化銨溶液，混合均勻后以3000rpm離心15min,將二次離心后的沉淀用Hanks液洗漆三遍,加入原全血液I~1.5倍體積量的含5%豬血清的Eagle’s MEM混合培養液懸浮，根據細胞計數的結果進行稀釋，將豬白細胞數控制在IX 17個/ml~5X 17個/ml之間； 步驟3)、在已稀釋好的每毫升細胞懸液中加入含100個活性單位的豬白細胞干擾素，置于37°C水浴搖床攪拌培養3h ； 步驟4)、按照每毫升豬白細胞懸液40~80HA NDV II的加入量，在細胞懸液中加入一定量新城疫病毒NDV II，于水浴恒溫振蕩器37°C旋轉培養24h，培養時分別在2h~3h,6h~7h期間加入I MNaOH溶液將pH控制在7.3~7.4，培養完成后，用6M Hcl把培養液pH調至3.5，在4°C下酸化處理4d，再用質量體積濃度6%的NaOH溶液把pH調至7.4，離心去除沉淀，上清液即為豬白細胞干擾素粗制液； 步驟5)、取步驟4制得的豬白細...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李勉，張永奎，郭婧，賈麗敏，
申請(專利權)人：張永奎，
類型：發明
國別省市：河南;41
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