原兒茶酸對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護制造技術

本發明專利技術公開了原兒茶酸對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護作用。構建小鼠膽總管結扎(BDL)術繼發小腸屏障損傷模型。將小鼠隨機分為假手術組、模型組、模型+原兒茶酸低、中、高劑量(20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg)組。各給藥組于術前2天給至術后5天給相應劑量原兒茶酸。結果：模型組小鼠較對照組病理損傷評分顯著升高、血清TNF-α、IL-6和TB顯著升高。原兒茶酸低、中、高劑量(腹腔注射原兒茶酸20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg)組可不同程度改善上述指標變化，并呈劑量依賴趨勢。

【技術實現步驟摘要】
原兒茶酸對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護
本專利技術涉及原兒茶酸對小鼠膽總管梗阻腸屏障損傷的保護，屬于醫藥
。
技術介紹
膽總管梗阻是圍手術期患者常見并發癥，直接導致了患者并發癥率和死亡率的增 高。膽總管梗阻后，腸道內膽汁缺乏，不僅可引起正常消化功能的紊亂，更可導致腸道生態 失衡，細菌大量增殖，以致腸粘膜功能損傷。既往研究認為，膽總管梗阻后引起的腸粘膜功 能損傷可導致腸道細菌移位，是引起圍手術期患者腸源性膿毒血癥的重要原因；而口服膽 鹽可抑制以上損害的發生。早期研究認為，細菌增殖引起腸道持續炎癥反應是引起腸屏障 損傷的重要原因。而新近的觀點認為，腸道氧化應激和細胞凋亡也是膽總管梗阻后腸粘膜 屏障損傷的重要機制，針對此機制進行調控可在此病理生理過程中發揮重要作用。 過氧化物酶體增殖物激活受體Y (PPARY)是一種配體活化的核轉錄因子，可通 過調節體內谷胱甘肽（GSH)系統的平衡，改善機體氧化應激損傷。同時有報道認為抗凋亡 因子Bcl-2也是PPARY的直接調控元件，激活PPARY可上調Bcl-2的表達，從而抑制細胞 凋亡。新近研究表明，PPARY信號通路的激活在腸缺血再灌注損傷中發揮重要作用，可通 過減輕腸道緊密連接蛋白的下調以維護腸屏障的完整性。 原兒茶酸（Protocatechuic acid)為中國傳統中藥-丹參的水溶性活性成分， 具有抑菌抗炎、對抗氧化應激和抑制細胞凋亡等多種藥理作用。新近報道認為，原兒茶酸可 調控PPARY通路的活化，發揮PPARY配體樣作用，然而，PPARY配體涉及眾多疾病，根據 現有技術難以預期原兒茶酸（Protocatechuic acid)對膽總管梗阻腸屏障損傷具有保護作 用。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是提供一種對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護作用的藥 物。 為了解決上述技術問題，本專利技術提供了一種對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護作用 的藥物，其特征在于以原兒茶酸（Protocatechuic acid)作為活性成分。 在本專利技術的一個優選實施方式中，所述的藥物包括或者不包括其它活性成分。 在本專利技術的另一方面，還涉及原兒茶酸（Protocatechuic acid)在制備保護膽總 管梗阻腸屏障損傷的藥物中的應用。 【具體實施方式】： 下面結合實施例對本專利技術作進一步描述。將通過下列實施例進一步詳細說明本發 明，但本專利技術不限于這些實施例，下列生產實施例中就是施用不同配方本肥料產生的效果。 實施例1 1.材料與方法 1. 1試驗藥物原兒茶酸，德國J&K chemical公司產品，批號LP10I02,經高效液相 色譜法鑒定純度為99. 12%。使用前以滅菌生理鹽水稀釋至相應濃度。 1. 2動物健康SPF級成年雄性昆明小鼠，體重18?22g，大連醫科大學實驗動物中 心提供，合格證號SCXK (遼）20020008。 1. 3試劑小鼠白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α (TNF-α )酶聯免疫吸附試 驗（ELISA)試劑盒購自武漢博士德公司；超氧化物歧化酶（S0D)、丙二醛（MDA)、還原型谷胱 甘肽（GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX)測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所；原 位細胞凋亡檢測試劑（羅氏公司）；PPARy、Occludin-抗購自英國Abeam公司；Bcl-2 - 抗購自碧云天生物技術研究所；β -actin -抗、辣根過氧化物酶二抗購自北京中杉金橋生 物技術有限公司。 1. 4儀器全自動多功能酶標儀（美國Thermo公司）；AU-1000型全自動生化分析儀 (日本奧林巴斯公司）；NU-9668E超低溫冰箱（美國Nuaire公司）；UV-2100型紫外分光光 度計（美國UNIC0公司）；YS-2H生物顯微鏡（日本尼康公司）；全自動凝膠成像系統（美 國UVP公司）。 1.5方法昆明小鼠實驗前一周適應性飼養，自由進食進水。所有操作均遵照國際 實驗動物使用和保護指南。將50只小鼠隨機分為以下5組，每組10只：（1)假手術組；（2) 模型組；（3)原兒茶酸20mg/kg組；（4)原兒茶酸40mg/kg組；（5)原兒茶酸80mg/kg組。 除假手術組外，其余各組按照Inagaki報道方法（Inagaki T，Moschetta A, Lee Y K，et al. Regulation of antibacterial defense in the small intestine by the nuclear bile acid receptor.Proc Natl Acad Sci USA，2006;103(10) :3920 ?3925)構建小鼠膽 總管結扎致腸屏障損傷疾病模型；假手術組僅分離膽總管而不結扎。各組給藥時間為術前 2天至術后5天，腹腔注射相應劑量原兒茶酸，每日一次；假手術組和模型組平行給予藥物 溶媒。以上給藥方案及劑量選擇均基于既往文獻報道。術后第5天各組小鼠于麻醉狀態下 腹主動脈取血處死，收集標本進行各項指標測定。 1. 5. 1小腸組織病理學檢測取末端回腸標本迅速固定于4%多聚甲醛，石蠟包埋， 4 μ m切片，進行常規HE染色。小腸粘膜屏障損傷參照Zhang報道方法[15]進行評價：0分， 無腸粘膜損傷；1分，腸絨毛頂端個別空泡形成；2分，1/3腸絨毛頂端空泡形成；3分，2/3腸 絨毛頂端空泡形成；4分，上皮下間隙增寬；5分，腸粘膜潰瘍。鏡下進行評分后綜合統計分 析。 1.5. 2血清總膽紅素（TB)、TNF-α、IL-6測定小鼠腹主動脈取血后，血樣靜置 30min，3000g離心15min后取血清-80°C凍存備用。靜置與離心過程均置于4°C環境。血 清TB檢測使用全自動生化分析儀進行，血清TNF- a、IL-6測定按照說明書采用ELISA法進 行。 1. 5. 3小腸組織SOD、MDA、GSH、GSH-PX測定留取末端回腸標本，組織粉碎、離心后 按照說明書測定上清液中各指標水平。 1. 5. 4小腸組織細胞凋亡測定取末端回腸標本迅速固定于4%多聚甲醛，石蠟包 埋，4 μ m切片，按照羅氏原位細胞凋亡檢測試劑盒說明書進行凋亡細胞熒光標記。抗淬滅封 片后于突光顯微鏡下利用Image Pro Plus軟件檢測突光強度。 2 結果 2. 1原兒茶酸對小鼠膽總管梗阻后小腸組織病理學損傷的影響。 與對照組相比，模型組小腸粘膜組織可見較多上皮下間隙，散在潰瘍及腸絨毛頂 端空泡形成，病理評分顯著增高（P < 〇. 01)。與模型組相比原兒茶酸40mg/kg組和原兒茶 酸80mg/kg組腸道病理學損傷顯著減輕，病理評分降低（P < 0. 05或P < 0. 01)，以原兒茶 酸80mg/kg組較為明顯（P < 0. 01)。原兒茶酸20mg/kg組病理評分與模型組相比無統計學 差異（P> 0.05)。如表1所示。 表1小腸組織病理學評分土s， η=8) 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護作用的藥物，其特征在于以原兒茶酸(Protocatechuic?acid)作為活性成分。

【技術特征摘要】
1. 一種對膽總管梗阻腸屏障損傷的保護作用的藥物，其特征在于以原兒茶酸 (Protocatechuic acid)作為活性成分。2. 根據權利要求1所...

【專利技術屬性】
技術研發人員：寧強，
申請(專利權)人：寧強，
類型：發明
國別省市：遼寧;21