結核分枝桿菌藥敏指示劑的使用方法技術

本發明專利技術涉及對結核分枝桿菌的耐藥性進行試驗的醫學檢驗領域，具體為一種結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法，包括以下步驟：對提供的標本進行前處理，制成濃集標本；向濃集標本中加入液體增菌培養基，制成液態增菌培養標本，增菌培養0～7天；將固體培養基加溫熔化，制成液態的固體培養基，然后將其溫度降至與上述液態增菌培養標本相應的培養溫度；將液態增菌培養標本與液態的固體培養基混合，制成液態藥敏試驗標本；將液態藥敏試驗標本凝固，制成帶有藥敏紙片的固態藥敏試驗標本；將固態藥敏試驗標本培養5～15天；通過指示劑指示觀察藥物抑菌圈；本發明專利技術能縮短結核分支枝桿菌藥敏試驗過程所需的時間。

【技術實現步驟摘要】

?本專利技術涉及對結核分枝桿菌的耐藥性進行試驗的醫學檢驗領域，具體為一種結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法。
技術介紹
結核病的耐藥性是一個日益嚴重的公共衛生問題，嚴重威脅著結核病的控制。中國工程院院士鐘南山在兩會期間曾稱，中國其有450萬活動性結核病人，帶菌者高達5.5億，而帶菌者一生中有10％的可能性會發病。2009年4月，中國衛生部部長陳竺在北京舉行的“耐多藥／廣泛耐藥結核病高負擔國家”部長級會議上通報了中國耐藥結核病的情況：中國疾病防控中心的抽樣調查顯示，中國結核病人中，耐多藥發病率為8.32％，總計約為12萬人，居世界第二位，廣泛耐藥發病率為0.68％，總計大約1萬人，其危害遠遠超過艾滋病。藥敏試驗是對結核分枝桿菌的耐藥性進行檢測的重要試驗。現有的結核分枝桿菌藥敏試驗方法，一般有紙片檢驗法和濃度檢驗法。紙片檢驗法是通過觀察由于貼在固體培養基表面上藥物紙片形成的藥物抑菌圈來確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性；濃度檢驗法是通過觀察檢測不同藥物和不同藥物濃度試驗容器中結核分枝桿菌的生長情況來確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性。不管是紙片檢驗法還是濃度檢驗法，其整個藥敏試驗過程一般可分為標本前處理、增殖或分離培養和藥敏檢驗三個階段。現有的紙片檢驗法，標本前處理階段的步驟為：①用吸管吸取提供的標本置于試驗容器中；②向試驗容器中加入消化液，對標本粘液進行消化，使標本中粘液和雜質包裹的細菌充分暴露；③離心分離，倒掉上清液，獲得濃集的標本；在獲得濃集的標本后再進行增殖或分離培養。增殖或分離培養階段的步驟為：④取已經濃集的標本少部分制成濃菌液；⑤將濃菌液接種于固體培養基例如羅氏培養基上進行增殖或分離培養，一般需在37℃培養箱中培養1月左右，把單個細菌培養成細菌菌落；在獲得細菌菌落后再進入藥敏檢驗階段。藥敏檢驗階段的步驟為：⑥取少量的細菌菌落，一般是取1――3個細菌菌落，將其溶解分散制成濃菌液；⑦將濃菌液接種于固體培養基例如瓊脂培養基表面上；⑧在固體培養基表面上貼上藥物紙片；⑨放入37℃培養箱中培養1個月左右，觀察藥物抑菌圈，確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性。現有的紙片檢驗法的優點是操作方便、設備簡單、投資小；但其存在以下缺點：⑴整個檢驗所需的時間太長：增殖或分離培養階段需要1個月左右，藥敏檢驗階段大約需要1個月左右，整個試驗過程大約需要2個月左右。如果在藥敏試驗得到結果后再使用藥物治療，就會嚴重影響治療時機。而臨床上在沒有藥敏試驗的情況下使用藥物治療一是可能會造結核分枝桿菌耐藥的嚴重后果；二是對感染耐藥性結核分枝桿菌的結核病患者很難達到好的治療效果。⑵不安全。整個試驗需要兩次人工接種，由于結核分枝桿菌具有傳染性，這樣對操作人員形成安全隱患，對環境形成污染隱患。 現有的濃度檢驗法，其在增殖培養階段采用固體培養基，其標本前處理、增殖或分離培養二個階段的步驟與現有的紙片檢驗法相同，但藥敏檢驗階段的步驟與現有的紙片檢驗法不同，具體為：從固體培養基上取增殖或分離培養獲得的細菌菌落，一般是取1個或數個細菌菌落，→→將其溶解分散制成菌懸液→→將菌懸液倒入按不同的藥物和不同的濃度配制成的多個試驗容器中，制成對比試驗標本→→觀察檢測試驗容器中細菌生長情況，確定結核分枝桿菌對藥物的敏感性。這種檢驗方法的優點是設備簡單、投資小；但其存在以下缺點：⑴所需的時間長。增殖或分離培養階段的方法和步驟與現有的紙片檢驗法的方法和步驟相同，因此，僅增殖或分離培養階段所需的時間就需要1個月左右；⑵操作麻煩、不安全且容易造成錯誤的檢驗結果。由于需要配制多個試驗容器，配制過程很麻煩且不安全，對操作人員形成安全隱患，對環境也形成污染隱患；在配制多個試驗容器過程中比較容易被其他細菌污染，這樣就可能造成錯誤的檢驗結果。 此外，還有利用儀器鑒定藥物敏感性的方法，例如BACTEC?—TB460系統及BACTEC?960系統，其優點是操作簡單，試驗過程時間短，平均檢出時間為14.4天,最快10天左右。但其存在的主要缺點是儀器設備的價位高，投資大；使用成本高，一是儀器設備的使用成本高，二是需要多個對比試驗標本，試劑的成本較高，其費用較大，一般醫院難以承受，難以推廣普及。 從上面詳細分析現有的結核分枝桿菌藥敏試驗方法可以看出，現有的紙片檢驗法和濃度檢驗法存在以下缺點：（1）整個檢驗過程所需的時間長。（2）操作麻煩。（3）不安全。（4）容易出現誤檢。而利用儀器鑒定藥物敏感性的方法投資大，使用成本高，難以推廣普及。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種能縮短結核分支枝桿菌藥敏試驗過程所需時間的結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法。 為實現上述目的，本專利技術結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法，其特征在于，包括以下步驟 （1）對提供的標本進行前處理，制成濃集標本； （2）向濃集標本中加入液體增菌培養基，制成液態增菌培養標本，增菌培養0～7天； （3）將固體培養基加溫熔化，制成液態的固體培養基，然后將其溫度降至與上述液態增菌培養標本相應的培養溫度； 所述的固體培養基具有50℃～95℃的熔化溫度，?25℃～45℃的凝固溫度； 所述的固體培養基包括有瓊脂或瓊脂糖，以及營養物質； （4）將液態增菌培養標本與液態的固體培養基混合，制成液態藥敏試驗標本； （5）將液態藥敏試驗標本凝固，制成帶有藥敏紙片的固態藥敏試驗標本； （6）將固態藥敏試驗標本培養5～15天； （7）通過指示劑指示觀察藥物抑菌圈； 所述的指示劑包括亞碲酸鹽，或亞碲酸鹽和尿素；? 所述指示劑亞碲酸鹽是在完成將固態藥敏試驗標本培養5～15天后，向固態藥敏試驗標本中滴入；尿素是在固體培養基中加入。 由于本專利技術在固體培養基中加入指示劑尿素，結核分枝桿菌會產生尿素酶分解尿素,使固態藥檢試驗標本呈粉紅色或淡黃色，通過觀察固態藥敏試驗標本的顏色，初步判斷固態藥敏試驗標本中結核分枝桿菌生長情況，在固態藥敏試驗標本呈粉紅色或淡黃色后，說明固態藥敏試驗標本中的結核分枝桿菌數量達到了形成抑菌圈需要的數量，滴入亞碲酸鹽指示劑，在2到48小時內即能形成明顯的抑菌圈，因此，利用本專利技術做結核分枝桿菌藥敏試驗，與現有的紙片檢驗法和濃度檢驗法相比，縮短了結核分支枝桿菌藥敏試驗過程所需時間。 由于在進行結核分枝桿菌藥敏試驗過程中，本專利技術指示劑的使用方法是指示劑尿素加入到固體培養基中的，而指示劑亞碲酸鹽滴在固態藥敏試驗標本的上表面，因此使用安全方便。 附圖說明 下面結合附圖和實施例對本專利技術結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法作進一步說明 圖1所示為利用本專利技術進行結核分枝桿菌藥敏試驗的加熱恒溫機俯視圖示意圖。 圖2為圖1所示加熱恒溫機的A—A剖視圖示意圖。 圖3所示為利用本專利技術本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法，其特征在于，包括以下步驟（1）對提供的標本進行前處理，制成濃集標本；（2）向濃集標本中加入液體增菌培養基，制成液態增菌培養標本，增菌培養0～7天；（3）將固體培養基加溫熔化，制成液態的固體培養基，然后將其溫度降至與上述液態增菌培養標本相應的培養溫度；所述的固體培養基具有50℃～95℃的熔化溫度，?25℃～45℃的凝固溫度；所述的固體培養基包括有瓊脂或瓊脂糖，以及營養物質；（4）將液態增菌培養標本與液態的固體培養基混合，制成液態藥敏試驗標本；（5）將液態藥敏試驗標本凝固，制成帶有藥敏紙片的固態藥敏試驗標本；（6）將固態藥敏試驗標本培養5～15天；（7）通過指示劑指示觀察藥物抑菌圈；所述的指示劑包括亞碲酸鹽，或亞碲酸鹽和尿素；?所述指示劑亞碲酸鹽是在完成將固態藥敏試驗標本培養5～15天后，向固態藥敏試驗標本中滴入；尿素是在固體培養基中加入。

【技術特征摘要】
2010.06.02 CN 201010188846.41.一種結核分支枝桿菌藥敏指示劑的使用方法，其特征在于，包括以下步驟
（1）對提供的標本進行前處理，制成濃集標本；
（2）向濃集標本中加入液體增菌培養基，制成液態增菌培養標本，增菌培養0～7天；
（3）將固體培養基加溫熔化，制成液態的固體培養基，然后將其溫度降至與上述液態增菌培養標本相應的培養溫度；
所述的固體培養基具有50℃～95℃的熔化溫度，?25℃～45...

【專利技術屬性】
技術研發人員：彭鈞，
申請(專利權)人：湖南省天騎醫學新技術有限公司，
類型：發明
國別省市：湖南;43