人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法技術

本發明專利技術提供了一種人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法。根據本發明專利技術一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，包括包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板，CCL2標準品，生物素標記抗人CCL2抗體以及鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶。根據本發明專利技術另一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的制備方法，包括制備：包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板、CCL2標準品、生物素標記抗人CCL2抗體以及鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶。根據本發明專利技術又一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法，包括加樣、加生物素化抗體、加辣根過氧化物酶、顯色以及終止步驟。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術提供了一種人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法。根據本專利技術一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，包括包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板，CCL2標準品，生物素標記抗人CCL2抗體以及鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶。根據本專利技術另一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的制備方法，包括制備：包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板、CCL2標準品、生物素標記抗人CCL2抗體以及鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶。根據本專利技術又一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法，包括加樣、加生物素化抗體、加辣根過氧化物酶、顯色以及終止步驟。【專利說明】人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法
本專利技術涉及免疫學檢測領域，具體而言，涉及一種人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法。
技術介紹
人單核細胞趨化蛋白-1(CCL2/Monocyte Chemotactic Protein-l,MCP_l)也被稱為單核細胞趨化和激活因子，是趨化因子超家族中CC亞族的主要成員，具有很強的誘導和活化單核/巨噬細胞的能力。NK細胞、T細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞等細胞類型也對其有反應。人單核細胞趨化因子的cDNA編碼的是一個99個氨基酸殘基的前體蛋白，剪除一個23個氨基酸殘基的疏水信號肽生成最終的76氨基酸殘基的成熟蛋白。單核細胞、肥大細胞、成骨細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞等多只能夠細胞都可生成CCL2。 CCL2是7次跨膜的G蛋白偶聯受體CCR2的配體。在炎癥進程中發揮重要作用，它能在炎癥發生時募集炎癥細胞，誘導浸潤。CCL2的升高常與敗血癥、狼瘡性腎炎、多發性硬化、急性胰腺炎、類風濕性關節炎有關。在一些腫瘤諸如胃癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性膠質瘤、食管鱗狀細胞癌發生時也能檢測到CCL2的上調。 可見CCL2無論是對炎癥的評估還是對腫瘤的監測都有很高的價值，將其作為疾病的指標的研究也越來越受到重視，CCL2有望成為實驗室診斷的常規指標，用于腫瘤或腫瘤轉移的輔助診斷。目前國外已有測定CCL2的ELISA試劑盒面市，但多為僅供科研應用，由于價格昂貴、操作耗時等因素還不適合用于臨床，如R&D Systems的Immunoassay DCPOO系列。而國內測定CCL2的ELISA試劑盒，雖然價格適中，但試劑盒質量不穩定，靈敏度和準確度都達不到臨床應用的要求。 因此，為了解決現有技術中的上述不足，本專利技術提出了一種新的解決方案。
技術實現思路
為了解決現有技術中的上述問題，本專利技術一方面提供了一種人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，另一方面提供了上述人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的制備和使用方法。根據本專利技術提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，成本低，穩定性好，具有較高的靈敏度和準確度；根據本專利技術另一方面提供的上述人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的制備和使用方法，操作簡單，步驟簡化，用時較短。 本專利技術一方面提供了一種人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，包括:包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板，CCL2標準品，生物素標記抗人CCL2抗體，鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶。 優選地，所述CCL2標準品由重組人CCL2制備，共8瓶，其含CCL2的濃度范圍為 0-2000pg/ml ;所述生物素標記抗人CCL2抗體的濃度為83_125ng/ml。 進一步地，所述人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒還包括洗滌液、稀釋液、顯色液A、顯色液B和終止液。 進一步地，所述洗滌液為含吐溫的磷酸鹽緩沖液，所述稀釋液為含BSA的磷酸鹽緩沖液，所述顯色液A為含H2O2的磷酸鹽檸檬酸緩沖液，所述顯色液B為含TMB的檸檬酸緩沖液，所述終止液為1-2M的H2SO4溶液。 本專利技術另一方面提供了所述人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的制備方法，包括包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板的制備，CCL2標準品的制備，生物素標記抗人CCL2抗體的制備，鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶的制備。 進一步地，包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板的制備過程為:取空白酶標反應板，每孔加入100-200 μ I的鼠抗人CCL2單克隆抗體，室溫過夜孵育，棄去孔內液體，拍干后進行封閉。 進一步地，所述封閉過程為:每孔加入250_350μ I封閉液，孵育后棄去孔內液體， 拍干后風干。 可選地，所述封閉過程中的孵育條件為37°C孵育2個小時或者4°C過夜孵育。 優選地，包被的所述鼠抗人CCL2單克隆抗體的濃度為2000-2500ng/ml，所述封閉液為含有BSA和蔗糖的0.0lM的磷酸鹽緩沖液。 本專利技術又一方面提供了一種檢測人血清中CCL2含量的方法，使用所述人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，包括以下步驟: (I)加樣:取所述CCL2標準品分別加入所述酶標反應板，作為標準孔；所述酶標反應板上除所述標準孔外為樣品孔，所述樣品孔內依次加入所述稀釋液和檢測樣品，所述稀釋液和檢測樣品的加入量相等，且所述稀釋液和檢測樣品的加入量之和與所述CCL2標準品的加入量相等；所述酶標反應板的加樣順序為先于所述樣品孔內加入所述稀釋液，然后于所述標準孔內加入所述標準品，最后于所述樣品孔內加入所述檢測樣品； (2)加生物素化抗體:取所述生物素標記抗人CCL2抗體加入所述酶標反應板的標準孔和樣品孔，室溫孵育I個小時，洗板； (3)加辣根過氧化物酶:取所述鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶加入所述酶標反應板的標準孔和樣品孔，室溫孵育I個小時，洗板； (4)顯色:向所述標準孔和樣品孔中分別依次加入所述顯色液A和所述顯色液B，避光反應15-20分鐘； (5)終止:用所述終止液終止反應。 根據本申請提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法，能夠帶來以下有益效果:本專利技術提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，成本低，穩定性好，具有較高的靈敏度(靈敏度可高達0.007ng/ml)和準確度，彌補了我國國內自主研發人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的空缺，為人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的臨床應用奠定了基礎；本專利技術另一方面提供的上述人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒的制備和使用方法，優化了試驗條件，操作簡單，步驟簡化，用時較短，且能夠取得較好的結果，為基礎研究和臨床提供服務，有助于提聞臨床診治水平。 【專利附圖】【附圖說明】 圖1示出了本專利技術實施例提供的使用本專利技術提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒檢測人血清中CCL2含量的方法的流程示意圖； 圖2示出了本專利技術實施例提供的使用本專利技術提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒檢測人血清中CCL2含量的檢測的標準曲線。 【具體實施方式】 下面參照附圖詳細介紹本專利技術的示例性實施例。提供這些示例性實施例的目的是為了使得本領域普通技術人員能夠清楚地理解本專利技術，并且根據這里的描述能夠實現本專利技術。附圖和具體實施例不旨在對本專利技術進行限定，本專利技術的范圍由所附權利要求限定。 根據本專利技術一方面提供的人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，包括:包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板，CCL2標準品，生物素標記抗人CCL2抗體，鏈酶本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種人血清CCL2酶聯免疫檢測試劑盒，包括：包被有鼠抗人CCL2單克隆抗體的酶標反應板，CCL2標準品，生物素標記抗人CCL2抗體，鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張健，盧奕，李會強，黃昕，郭宏偉，鄒春林，
申請(專利權)人：廣西南寧隆吉維特生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣西;45