本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種快速檢測(cè)微生物菌劑影響連作植物生長(zhǎng)的方法。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)的技術(shù)方案要點(diǎn)為：一種快速檢測(cè)微生物菌劑影響連作植物生長(zhǎng)的方法，是利用實(shí)驗(yàn)室組織培養(yǎng)技術(shù)，在大田試驗(yàn)之前對(duì)供試微生物菌劑進(jìn)行定性檢驗(yàn)，不受季節(jié)、環(huán)境等外界因素的控制，為檢驗(yàn)菌體對(duì)連作植物生長(zhǎng)的性能提供了一條新的思路。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【專(zhuān)利摘要】本專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了。本專(zhuān)利技術(shù)的技術(shù)方案要點(diǎn)為：，是利用實(shí)驗(yàn)室組織培養(yǎng)技術(shù)，在大田試驗(yàn)之前對(duì)供試微生物菌劑進(jìn)行定性檢驗(yàn)，不受季節(jié)、環(huán)境等外界因素的控制，為檢驗(yàn)菌體對(duì)連作植物生長(zhǎng)的性能提供了一條新的思路。【專(zhuān)利說(shuō)明】
本專(zhuān)利技術(shù)屬于組織培養(yǎng)
，具體涉及一種快速檢測(cè)微生物菌劑影響連作植物 生長(zhǎng)的方法。
技術(shù)介紹
連作障礙發(fā)生于多種植物品種，包括人參、花生、大豆、黃瓜和地黃等，其中地黃是 一種重要的藥用植物，它具有極其明顯的連作障礙表型。在生產(chǎn)過(guò)程中，連作的地黃能夠正 常出苗，地上葉片生長(zhǎng)較弱，但其地下部分形成須根，不能正常膨大形成具有商品價(jià)值的塊 莖。種植過(guò)地黃的土壤需要經(jīng)8-10年才能再次種植，因此連作障礙嚴(yán)重制約地黃的規(guī)模化 生產(chǎn)，成為地黃生產(chǎn)中亟待解決的難題。 植物組織培養(yǎng)技術(shù)是一門(mén)應(yīng)用于植物繁育的特殊實(shí)用技術(shù)，它能夠依據(jù)植物細(xì)胞 全能性快速獲得優(yōu)質(zhì)植株。組織培養(yǎng)按照培養(yǎng)對(duì)象可分為組織或愈傷培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、植株 培養(yǎng)、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)等。植物組織培養(yǎng)具有培養(yǎng)條件可以人為控制、生長(zhǎng)周期短、繁 殖率高、管理方便、利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制等優(yōu)點(diǎn)。伴隨科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，尤其是外 源激素的大規(guī)模應(yīng)用，組織培養(yǎng)已經(jīng)成為一種大規(guī)模、批量工業(yè)化生產(chǎn)種苗的新方法，并在 生產(chǎn)上越來(lái)越得到廣泛的應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種快速檢測(cè)微生物菌劑影響連作植物生長(zhǎng)的 方法。 本專(zhuān)利技術(shù)的技術(shù)方案為：，其特 征在于包括以下步驟： 1外植體的選擇、獲取：從田間獲得成年健壯地黃植株的完整塊根，放入保鮮袋備用； 2外植體的消毒方法 (1) 將地黃塊根用清水洗凈，并切成1-1. 5cm長(zhǎng)的小段，每段中間部分必須含有一個(gè)或 一個(gè)以上生長(zhǎng)芽點(diǎn)， (2) 在無(wú)菌操作臺(tái)上，將地黃塊根放入無(wú)菌燒杯中，倒入體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精，處理 30秒，倒掉酒精，然后倒入升汞處理10-15分鐘，倒掉升汞，用無(wú)菌水洗4-5次， (3) 將地黃塊根轉(zhuǎn)移到無(wú)菌盤(pán)上，用無(wú)菌的鑷子和刀將地黃塊根切成帶芽的小塊， 接種于1/2MS+BA 0. 5mg/L培養(yǎng)基(用質(zhì)量濃度為0. 7%的冷凝脂固化，調(diào)節(jié)體系的PH為 5. 7-6. 0)中，放入培養(yǎng)箱中于25°C培養(yǎng)，光照條件為光照12h/d，光強(qiáng)度2000-3000LX ; 3待無(wú)菌幼苗長(zhǎng)至l-2cm時(shí)自基部切下，接種至MS+BA lmg/L+NAA 0. lmg/L培養(yǎng)基中， 在光照中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)； 4當(dāng)步驟3增殖培養(yǎng)的幼苗高至2-3cm時(shí)自基部切下，接種至1/2MS+IBA lmg/L培養(yǎng)基 中，放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行生根培養(yǎng)； 5取200g地黃大田栽培土壤置于三角瓶中，加入蒸餾水lOOOmL，瓶口用透氣塞封住， 沸水浴3h，冷卻沉淀24h，反復(fù)進(jìn)行3次，過(guò)濾取上清液在高壓鍋中滅菌后置于4°C保存?zhèn)?用，將制備的土壤水提液等分成A、B兩份，在B液中接種已經(jīng)篩選獲得的微生物菌劑，37°C， 180rpm/min培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后將培養(yǎng)的菌液B經(jīng)0. 22 μ m的濾膜過(guò)濾除菌，4°C保存?zhèn)溆茫?6當(dāng)步驟4中生根培養(yǎng)的地黃幼苗的根長(zhǎng)達(dá)到0. 5-lcm時(shí)，轉(zhuǎn)至裝有MS+BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基的廣口瓶中，蔗糖50g/L，MS+BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L培養(yǎng)基配制時(shí)將蒸餾 水分別換成等體積的上述A液和經(jīng)過(guò)濾除菌的菌液B，培養(yǎng)溫度25°C，光強(qiáng)度2000-3000LX， 光照12h/d，培養(yǎng)觀察地黃根膨大情況，未經(jīng)微生物菌劑處理的A組一周后出現(xiàn)死苗現(xiàn)象， 共接種成活26株一個(gè)月內(nèi)死亡21株，經(jīng)過(guò)微生物菌劑處理的B組植株長(zhǎng)勢(shì)良好，且接種后 一周出現(xiàn)膨大的塊根（圖1和圖2)。 所述的MS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)成分組成的，其中大量元 素為硝酸銨1650mg/L、硝酸鉀1900mg/L、二水氯化鈣440mg/L、七水硫酸鎂370mg/L和磷酸 二氫鉀700mg/L，微量元素為碘化鉀0. 83mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫 酸鋅8. 6mg/L、二水錳酸鈉0· 25mg/L、五水硫酸銅0· 025mg/L和六水氯化鈷0· 025mg/L，鐵 鹽為乙二胺二乙酸二鈉37. 3mg/L和七水硫酸亞鐵27. 8mg/L，有機(jī)成分為二水肌醇100mg/ L、煙酸0. 5mg/L、鹽酸批卩多醇0. 5mg/L、鹽酸硫胺素0. 5mg/L和甘氨酸2mg/L，所述的1/2MS 培養(yǎng)基是大量兀素為MS培養(yǎng)基一半，微量兀素、鐵鹽和有機(jī)成分與MS培養(yǎng)基相同的的培養(yǎng) 基，所述的BA為6-芐基腺嘌呤，NAA為萘乙酸，IBA為吲哚乙酸。 本專(zhuān)利技術(shù)利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，在大田試驗(yàn)之前對(duì)供試微生物菌劑的作用效果進(jìn) 行實(shí)驗(yàn)室水平上的定性檢驗(yàn)，不受季節(jié)、環(huán)境等外界因素的控制，為檢驗(yàn)菌體性能提供了一 條新的思路。 【專(zhuān)利附圖】【附圖說(shuō)明】 圖1是本專(zhuān)利技術(shù)連作7天地黃未使用微生物菌劑和使用微生物菌劑根部及其放大 圖； 圖2是本專(zhuān)利技術(shù)連作28天地黃未使用微生物菌劑和使用微生物菌劑根部及其放大圖。 【專(zhuān)利附圖】【附圖說(shuō)明】：a、未使用微生物菌劑，b、使用微生物菌劑。 【具體實(shí)施方式】 以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)該將此理解為本 專(zhuān)利技術(shù)上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本專(zhuān)利技術(shù)上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā) 明的范圍。 實(shí)施例 ，包括以下步驟： 1外植體的選擇、獲取：從田間獲得成年健壯地黃植株的完整塊根，放入保鮮袋備用； 2外植體的消毒方法 (1) 將地黃塊根用清水洗凈，并切成1-1. 5cm長(zhǎng)的小段，每段中間部分必須含有一個(gè)或 一個(gè)以上生長(zhǎng)芽點(diǎn)， (2) 在無(wú)菌操作臺(tái)上，將地黃塊根放入無(wú)菌燒杯中，倒入體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精，處理 30秒，倒掉酒精，然后倒入升汞處理10-15分鐘，倒掉升汞，用無(wú)菌水洗4-5次， (3)將地黃塊根轉(zhuǎn)移到無(wú)菌盤(pán)上，用無(wú)菌的鑷子和刀將地黃塊根切成帶芽的小塊， 接種于1/2MS+BA 0. 5mg/L培養(yǎng)基(用質(zhì)量濃度為0. 7%的冷凝脂固化，調(diào)節(jié)體系的PH為 5. 7-6. 0)中，放入培養(yǎng)箱中于25°C培養(yǎng)，光照條件為光照12h/d，光強(qiáng)度2000-3000LX ; 3待無(wú)菌幼苗長(zhǎng)至l-2cm時(shí)自基部切下，接種至MS+BA lmg/L+NAA 0. lmg/L培養(yǎng)基中， 在光照中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)； 4當(dāng)步驟3增殖培養(yǎng)的幼苗高至2-3cm時(shí)自基部切下，接種至1/2MS+IBA lmg/L培養(yǎng)基 中，放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行生根培養(yǎng)； 5取200g地黃大田栽培土壤置于三角瓶中，加入蒸餾水lOOOmL，瓶口用透氣塞封住， 沸水浴3h，冷卻沉淀24h，反復(fù)進(jìn)行3次，過(guò)濾取上清液在高壓鍋中滅菌后置于4°C保存?zhèn)?用，將制備的土壤水提液等分成A、B兩份，在B液中接種已經(jīng)篩選獲得的微生物菌劑，37°C， 180rpm/min培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后將培養(yǎng)的菌液B經(jīng)0. 22 μ m的濾膜過(guò)濾除菌，4°C保存?zhèn)溆茫?6當(dāng)步驟4中生根培養(yǎng)的地黃幼苗的根長(zhǎng)達(dá)到0. 5-lcm時(shí)，轉(zhuǎn)至裝有MS+BA 2mg/L+NAA 0· lmg/L培養(yǎng)基的廣口瓶中，本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種快速檢測(cè)微生物菌劑影響連作植物生長(zhǎng)的方法，其特征在于包括以下步驟：（1）外植體的選擇、獲取：從田間獲得成年健壯地黃植株的完整塊根，放入保鮮袋備用；（2）外植體的消毒方法將地黃塊根用清水洗凈，并切成1?1.5cm長(zhǎng)的小段，每段中間部分必須含有一個(gè)或一個(gè)以上生長(zhǎng)芽點(diǎn)，在無(wú)菌操作臺(tái)上，將地黃塊根放入無(wú)菌燒杯中，倒入體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精，處理30秒，倒掉酒精，然后倒入升汞處理10?15分鐘，倒掉升汞，用無(wú)菌水洗4?5次，將地黃塊根轉(zhuǎn)移到無(wú)菌盤(pán)上，用無(wú)菌的鑷子和刀將地黃塊根切成帶芽的小塊，接種于1/2MS+BA?0.5mg/L培養(yǎng)基中，該1/2MS+BA?0.5mg/L培養(yǎng)基用質(zhì)量濃度為0.7%的冷凝脂固化并調(diào)節(jié)體系的PH為5.7?6.0，放入培養(yǎng)箱中于25℃培養(yǎng)，光照條件為光照12h/d，光強(qiáng)度2000?3000Lx；（3）待無(wú)菌幼苗長(zhǎng)至1?2cm時(shí)自基部切下，接種至MS+BA?1mg/L+NAA?0.1mg/L培養(yǎng)基中，在光照中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)；（4）當(dāng)步驟（3）增殖培養(yǎng)的幼苗高至2?3cm時(shí)自基部切下，接種至1/2MS+IBA?1mg/L培養(yǎng)基中，放入光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行生根培養(yǎng)；（5）取200g地黃大田栽培土壤置于三角瓶中，加入蒸餾水1000mL，瓶口用透氣塞封住，沸水浴3h，冷卻沉淀24h，反復(fù)進(jìn)行3次，過(guò)濾取上清液在高壓鍋中滅菌后置于4℃保存?zhèn)溆茫瑢⒅苽涞耐寥浪嵋旱确殖葾、B兩份，在B液中接種已經(jīng)篩選獲得的微生物菌劑，37℃，180rpm/min培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后將培養(yǎng)的菌液B經(jīng)0.22μm的濾膜過(guò)濾除菌，4℃保存?zhèn)溆茫唬?）當(dāng)步驟（4）中生根培養(yǎng)的地黃幼苗的根長(zhǎng)達(dá)到0.5?1cm時(shí)，轉(zhuǎn)至裝有MS+BA?2mg/L+NAA?0.1mg/L培養(yǎng)基的廣口瓶中，蔗糖50g/L，MS+BA?2mg/L+NAA?0.1mg/L培養(yǎng)基配制時(shí)將蒸餾水分別換成等體積的上述A液和經(jīng)過(guò)濾除菌的菌液B，培養(yǎng)溫度25℃，光強(qiáng)度2000?3000Lx，光照12h/d，培養(yǎng)觀察地黃根膨大情況，未經(jīng)微生物菌劑處理的A組一周后出現(xiàn)死苗現(xiàn)象，經(jīng)過(guò)微生物菌劑處理的B組植株長(zhǎng)勢(shì)良好，且接種后一周出現(xiàn)膨大的塊根，所述的MS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)成分組成的，其中大量元素為硝酸銨1650mg/L、硝酸鉀1900mg/L、二水氯化鈣440mg/L、七水硫酸鎂370mg/L和磷酸二氫鉀700mg/L，微量元素為碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、二水錳酸鈉0.25mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L和六水氯化鈷0.025mg/L，鐵鹽為乙二胺二乙酸二鈉37.3mg/L和七水硫酸亞鐵27.8mg/L，有機(jī)成分為二水肌醇100mg/L、煙酸0.5mg/L、鹽酸吡哆醇0.5mg/L、鹽酸硫胺素0.5mg/L和甘氨酸2mg/L，所述的1/2MS培養(yǎng)基是大量元素為MS培養(yǎng)基一半，微量元素、鐵鹽和有機(jī)成分與MS培養(yǎng)基相同的的培養(yǎng)基，所述的BA為6?芐基腺嘌呤，NAA為萘乙酸，IBA為吲哚乙酸。...
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊清香，苗瀛，王瑞飛，李明軍，李向武，張昊，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：河南師范大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：河南;41
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