一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)及其制備、檢測方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種具有重氮氨基基因毒性警示結(jié)構(gòu)的左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)。本發(fā)明專利技術(shù)還提供一種上述雜質(zhì)的制備方法、檢測方法以及上述雜質(zhì)在檢測左西孟旦原料藥及其制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)的應(yīng)用。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)及其制備、檢測方法
本專利技術(shù)屬于藥物合成領(lǐng)域，具體涉及一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)及其制備、檢測方法的研究。
技術(shù)介紹
左西孟旦（Levosimendan），(R)-[[4-(1,4,5,6-四氫-4-甲基-6-氧代-3-噠嗪基)苯基]-亞肼基]丙二腈（式Ⅱ）是芬蘭ORION公司開發(fā)研制的噠嗪酮類、具有正性肌力作用的鈣增敏劑，其直接與肌鈣蛋白相結(jié)合，使鈣離子誘導(dǎo)的心肌收縮所必需的心肌纖維蛋白的空間構(gòu)型得以穩(wěn)定，從而使心肌收縮力增加，可有效治療心衰并對肌鈣蛋白具有顯著的鈣依賴性結(jié)合作用，適用于需要增加心肌收縮力的急性失代償心力衰竭（ADHF）的短期治療；同時，WO9321921還描述了左西孟旦在治療心肌局部缺血中的良好效果。左西孟旦作為一種有效的正性肌力作用的鈣增敏劑在國內(nèi)外廣受關(guān)注的同時，臨床研究者對左西孟旦的用藥安全性也進(jìn)行了更深入的研究。WO9965888A2指出，在細(xì)菌誘變性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)合成的左西孟旦樣品偶然會顯現(xiàn)出潛在的基因毒性，并描述了左西孟旦的潛在基因毒性是由[[4-(2-疊氮-3-甲基-5-氧代四氫呋喃-2-基)苯基]亞肼基]丙二腈（式Ⅲ）引起的，是有效的誘變劑；同時還指出，左西孟旦合成過程中可以生成足夠在細(xì)菌誘變性試驗(yàn)中得出陽性結(jié)果的量，這一研究結(jié)果引起了國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。式Ⅱ。式Ⅲ。基因毒性是指在以DNA反應(yīng)物質(zhì)為主要研究對象的體內(nèi)/體外試驗(yàn)中，對DNA有潛在的破壞性。基因毒性雜質(zhì)作為工藝雜質(zhì)的一類，近年來受到國內(nèi)外的高度重視。歐盟醫(yī)藥管理局（EMA）發(fā)布了《基因毒性雜質(zhì)限度指引》，并頒布了36種具有潛在基因毒性的化學(xué)結(jié)構(gòu)，旨在對潛在基因毒性雜質(zhì)的充分研究和有效控制，保障用藥安全性。目前，除WO9965888A2介紹了左西孟旦的潛在基因毒性雜質(zhì)以外，國內(nèi)外對左西孟旦中潛在的基因毒性雜質(zhì)的文獻(xiàn)報道甚少。因此，對左西孟旦中潛在的基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行更為深入的研究，以保證左西孟旦用藥的安全性已經(jīng)成為一個極其重要的課題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的在于提供一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)（式Ⅰ）。。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種式Ⅰ藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物。所述鹽可以是有機(jī)鹽或無機(jī)鹽，包括但不限于鹽酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、乙二酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽。本專利技術(shù)的另一目的是提供上述基因毒性雜質(zhì)的制備方法，包括將在一定溫度下，6-(4-氨基苯基)-4,5-二氫-5-甲基-3(2H)-噠嗪酮（式Ⅳ）與亞硝酸在適當(dāng)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。。所述反應(yīng)式如下：；其中，所述式Ⅳ化合物可以是以鹽、游離胺、溶劑化物的形式進(jìn)行反應(yīng)；所述的亞硝酸可以是亞硝酸鹽與酸原位反應(yīng)制備或亞硝酸溶液。在本專利技術(shù)的一個具體實(shí)施方案中，所述反應(yīng)是如下進(jìn)行的，將式Ⅳ化合物溶于水中，攪拌條件下，向反應(yīng)液中滴加鹽酸，將反應(yīng)體系降溫至0oC；攪拌條件下，將亞硝酸鈉水溶液緩慢滴入反應(yīng)液中，反應(yīng)體系中析出大量固體；繼續(xù)反應(yīng)，TLC檢測反應(yīng)完全；后處理得到最終產(chǎn)物。本專利技術(shù)的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的反應(yīng)溫度為-78oC~100oC，優(yōu)選-10oC~30oC，在一個具體實(shí)施方案中，所述反應(yīng)溫度為0oC。本專利技術(shù)的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的反應(yīng)溶劑選自水；鹵代烴類溶劑，包括但不限于氯仿、二氯甲烷、四氯化碳；醇類溶劑，包括但不限于甲醇、乙醇、異丙醇；酯類溶劑包括但不限于乙酸乙酯；芳烴類溶劑，包括但不限于苯、甲苯；酮類溶劑，包括但不限于丙酮、丁酮；醚類溶劑，包括但不限于乙醚、四氫呋喃；腈類溶劑，包括但不限于乙腈、丙腈；酰胺類溶劑，包括但不限于DMF；以及有機(jī)酸、無機(jī)酸及其溶液的任一種或其組合，優(yōu)選為水。本專利技術(shù)的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的有機(jī)酸及其溶液優(yōu)選醋酸。本專利技術(shù)的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述的無機(jī)酸及其溶液優(yōu)選為鹽酸、氫溴酸、硫酸。本專利技術(shù)所述的左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)對比歐盟頒布的36種具有潛在基因毒性的化學(xué)結(jié)構(gòu)，具有重氮氨基基因毒性警示結(jié)構(gòu)。本專利技術(shù)的另一目的在于提供一種用于檢測左西孟旦樣品中潛在的基因毒性雜質(zhì)的參比試劑，所述試劑包括式Ⅰ化合物和/或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物。進(jìn)一步的，所述參比試劑還包括分析上可接受的載體。本專利技術(shù)在于提供一種式Ⅰ在用于檢測左西孟旦樣品及制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)的應(yīng)用。本專利技術(shù)還提供一種式Ⅰ的左西孟旦基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，包括采用高效液相色譜法測定左西孟旦中該基因毒性雜質(zhì)的含量。作為優(yōu)選，所述高效液相色譜法為反相色譜法；優(yōu)選色譜柱為C8、C18、苯基鍵合硅膠為填料的分析色譜柱；檢測器為紫外檢測器；以甲醇和磷酸鹽緩沖液為流動相，按照等度和梯度洗脫程序進(jìn)行檢測。所述的磷酸鹽緩沖溶液的pH值控制在1~4范圍內(nèi)。在本專利技術(shù)一個具體實(shí)例中，通過將左西孟旦進(jìn)行高效液相色譜分析。其中使用色譜柱：AgilentXDB-C184.6*250mm5um，柱溫：30℃，流速：1.0ml/min，波長：380nm，流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液（取1.8g磷酸氫二鈉溶解于1000ml水中，用磷酸調(diào)PH至2.1）=6:4。本專利技術(shù)在于提供左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)確證方法，包括采用高分辨質(zhì)譜、核磁共振波譜等技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證；其中，式Ⅰ潛在基因毒性雜質(zhì)的核磁氫譜數(shù)據(jù)解析如下：1H-NMR(d6-DMSO,400MHz):δ=12.78(s,1H,NH),11.02(s,1H,NH),10.92(s,1H,NH),7.84(m,4H,Ar),7.61(d,2H,Ar),7.40(d,2H,Ar),3.39(m,2H,CH2),2.72(m,2H,CH2),2.25(m,2H,CH),1.10(d,6H,2CH3)ppm。附圖說明圖1為左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)（式Ⅰ）的高分辨質(zhì)譜圖。圖2為左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)（式Ⅰ）的核磁共振氫譜圖。圖3為左西孟旦供試品溶液基因毒性雜質(zhì)（式Ⅰ）的高效液相色譜圖，1為左西孟旦，2為式Ⅰ化合物。具體實(shí)施方式以下具體實(shí)施方式可以對本專利技術(shù)的內(nèi)容做出更為詳細(xì)的說明，但本專利技術(shù)的主題范圍不局限于以下具體實(shí)施例，凡是基于本
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)、工藝均屬于本專利技術(shù)的范圍。實(shí)施例1左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)（式Ⅰ）的制備（一）將2.04g6-(4-氨基苯基)-4,5-二氫-5-甲基-3(2H)-噠嗪酮溶于30mL水中，攪拌條件下，向反應(yīng)液中滴加鹽酸，將反應(yīng)體系降溫至0oC。攪拌條件下，將亞硝酸鈉水溶液（25mL）緩慢滴入反應(yīng)液中，反應(yīng)體系中析出大量固體。繼續(xù)反應(yīng)3小時，TLC檢測反應(yīng)完全。過濾，濾餅依次用水、乙醇洗滌，減壓干燥，得到黃色固體約1.6g，收率：76%。1H-NMR(d6-DMSO,400MHz):δ=12.78(s,1H,NH),11.02(s,1H,NH),10.92(s,1H,NH),7.84(m,4H,Ar),7.61(d,2H,Ar),7.40(d,2H,Ar),3.39(m,2H,CH2),2.72(m,2H,CH2),2.25(m,2H,CH),1.10(d,6H,2CH3)ppm;HRMS-ESI(m/z):440.1807(M+Na+)。實(shí)施例2左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)（式Ⅰ）的制備（二）將1.0g6-(4-氨基苯基)-4,5-二氫-5-甲基-3(2H)-噠嗪酮溶于5mL稀鹽酸中，將本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)，其具有式Ⅰ所述結(jié)構(gòu)：。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)用于檢測左西孟旦原料藥及其制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)的應(yīng)用；所述制劑為口服劑或注射劑，所述左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)具有式Ⅰ所述結(jié)構(gòu)，2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述左西孟旦潛在基因毒性雜質(zhì)的制備方法包括以下步驟：一定溫度下，如式Ⅳ所示6-(4-氨基苯基)-4,5-二氫-5-甲基-3(2H)-噠嗪酮與亞硝酸在溶劑中進(jìn)行反應(yīng)：所述溶劑為水、鹵代烴類溶劑、醇類溶劑、酯類溶劑、芳烴類溶劑、酮類溶劑、醚類溶劑、腈類溶劑、酰胺類溶劑或有機(jī)酸、無機(jī)酸中的任一種或其組合；其中所述的有機(jī)酸為醋酸；所述的無機(jī)酸為鹽酸、氫溴酸、硫酸；該雜質(zhì)具有如下核磁數(shù)據(jù)：H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：δ＝12.78(s,1H,NH),11.02(s,1H,NH),10.92(s,1H,NH),7.84(m,4H,Ar),7....

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張善軍，向顯帥，李佳，高建，
申請(專利權(quán))人：成都新恒創(chuàng)藥業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：四川;51