一種煙草發酵所得煙用香料及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種煙草發酵所得煙用香料及其應用。從云南烤煙紅花大金元品種煙葉中分離了一株優勢微生物，分類命名為長孢洛德酵母(Lodderomyces?elongisporus).CGMCC6645。將該酵母接種到以煙草為原料的培養基中進行發酵培養。培養之后的發酵產物具有天然香味，含有苯乙醇、4-羥基丁酸內酯、鄰苯二甲酸二丁酯等多種致香成分。將該煙用香料添加到煙絲中，具有有效增加清香感，改善煙氣口感和余味，提高喉部舒適性，降低刺激性，掩蓋雜氣，以及使吸味更加柔和的良好效果。整個生產工藝簡單、實用，具有良好的應用前景。

【技術實現步驟摘要】
一種煙草發酵所得煙用香料及其應用
本專利技術屬于卷煙香精香料
，具體是涉及一種用酵母菌發酵煙草后得到的 煙用香料。同時，本專利技術還涉及該煙用香料在卷煙生產中的具體應用。
技術介紹
煙草是我國財政的重要支柱之一。國家煙草專賣局在十一五中國卷煙科技發 展綱要第7條明確指出，要攻克影響煙葉香氣質、香氣量的關鍵技術，縮小與國外煙葉質 量差距，以提高國內外市場競力。 煙用香精香料是專供各種煙草制品加香矯味使用的一種添加劑。煙用香精香料技 術是煙草行業的核心技術之一。通過近年的研究，國內在煙用香精香料技術方面取得了一 定成績，對形成中式卷煙香氣和吃味特征做出了貢獻。煙用香料一般分為天然煙用香料和 人工合成煙用香料。天然煙用香料在加入卷煙后經燃燒裂解能釋放出香氣香味，在卷煙生 產中占據著非常重要地位。 隨著中國煙草工業的快速發展，大品牌的形成，卷煙減害降焦的要求，以及煙草品 類的進一步完善，對高品質天然煙用香精香料的需求與日俱增，天然香料資源日漸短缺，市 場價格比較昂貴。微生物發酵生產天然香料具有發酵周期短、發酵效率高、低成本、高收益、 環境友好等優勢，能夠滿足天然香料工業的需求。
技術實現思路
本專利技術的目的在于針對現有技術的不足，提供一種以特殊的產香酵母發酵煙草后 制備得到的煙用香料，該香料符合天然香料的要求，能夠與煙香形成良好的配伍。 本專利技術的目的還在于提供所述煙用香料在卷煙生產中的具體應用。 本專利技術的目的通過下述技術方案予以實現。 除非另有說明，本專利技術中所采用的百分數均為質量百分數。 本專利技術從云南烤煙紅花大金元品種煙葉中分離了一株優勢微生物0F-08作為試 驗菌種，對其進行了 26S rDNA分析，鑒定結果表明該菌株屬于長孢洛德酵母，其分類命名為 Lodderomyces elongisporus，保藏號為 CGMCC No. 6645。 本專利技術所述的長孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus)菌株的形態學特征 為：菌落較大，呈卵球形，奶白色凸起，菌落比較粗糙，邊緣整齊；在液體培養基中，培養液 澄清有沉淀，且有菌蹼。 本專利技術所述的長孢洛德酵母0F-08的分子鑒定特征為：利用通用引物NL-I (5'CAT ATCAATAAGCGGAGGAAAAG3'）和 NL-4 (5' GGTCCGTGITTCAAGACGG3'），以長孢洛德酵母 0F-08 的 基因組DNA作為模板擴增得到600bp左右的PCR產物，回收測序、校正之后得到的0F-08菌 株的部分26S rDNA基因序列578bp，該序列已經提交國際核苷酸序列數據庫（GenBank)，序 列索引號為JQ916053。 利用所述長孢洛德酵母菌發酵煙草，制備得到一種煙用香料，其特征在于：將煙草 粉碎后與水按1:5?1:50的質量比配制成發酵培養基，高壓滅菌后按1%的質量比接種長 孢洛德酵母CGMCC6645,發酵培養2天后對發酵液進行過濾濃縮，即得所需煙用香料。 所述的煙草與水的質量比優選為1:20。 所述的煙草包括煙片、煙梗或煙末；優選為煙梗。 所述煙草發酵所得煙用香料在卷煙生產中的應用，具體為：在卷煙制絲加料階段， 將所述煙用香料噴灑在預先平衡好的煙絲上，添加量為8?12g/箱煙絲；其中，煙絲平衡的 條件為：溫度22±2°C，相對濕度60% ±2%，平衡時間24h。 與現有技術相比，本專利技術具有以下突出的優點： (1)通過長孢洛德酵母菌發酵煙草得到的煙用香料，具有天然香料的香味，通過 GC-MS檢測，結果表明發酵液中含有苯乙醇、4-羥基丁酸內酯、鄰苯二甲酸二丁酯等致香成 分；將該香料添加到卷煙中進行評吸，具有有效增加清香感，改善煙氣口感和余味，提高喉 部舒適性，降低刺激性，掩蓋雜氣，以及使吸味更加柔和的良好效果。 (2)本專利技術原料價格低廉，來源豐富；所用菌株易于保存，易于活化和發酵； (3)生產工藝簡單、操作容易、成本低廉，便于實現大規模工業化生產，具有良好的 開發應用前景。 保藏生物材料的說明 本專利技術的菌株，已于2012年10月08日，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心（CGMCC);該中心地址：中國北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研 究所。該菌株分類命名為長孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus);保藏號為CGMCC No.6645〇 【具體實施方式】 為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下通過實施例及試驗數 據，對本專利技術作進一步的詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發 明，并不用于限定本專利技術。 實施例1 -長孢洛德酵母菌0F-08 (L. elongisporus 0F-08)的篩選方法。 煙葉樣品用自來水沖洗3_5min并用細毛刷清除葉片表面污垢。葉片自然晾干后， 隨機選5片葉子，在健康部位（無病斑）用無菌剪刀隨機取下3X3cm 2的組織塊3-5片，混 合后用無菌水漂洗5min并用無菌濾紙吸干水分。稱取IOg葉塊，按下述程序進行表面消 毒：75%的無菌酒精浸泡lmin，無菌水清洗3次，并用無菌濾紙吸干水分，避免酒精殘留； 再用有效氯含量為3 %的NaClO溶液浸泡2min，無菌水清洗后吸干水分，置于超凈工作臺中 備用。取200 μ L最后一次洗滌組織的無菌水涂布在YH)培養基平板，28°C培養2d后無酵 母菌菌落出現，表明消毒徹底。將經過表面消毒的組織塊放在無菌研缽中研磨至漿狀，加入 IOmL無菌水，混勻后用3層無菌擦鏡紙過濾，獲得的濾液用無菌水稀釋至ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ3。每 一稀釋度取200 μ L涂布一個YH)培養基平板，每個濃度設定3個重復，三個濃度共9皿。涂 布平板在超凈工作臺中放置5h后于32°C下倒置培養2d，統計每平板的微生物菌落數，并對 所得的內生酵母進行純化、保存和鑒定，得到了長孢洛德酵母（L. elongisporus 0F-08)。 實施例2 -發酵煙草材料 取適量煙草材料（包括碎煙片、煙梗、煙梗末等），分別用蒸餾水稀釋5倍、10倍、 15倍、20倍、30倍和50倍，高壓滅菌后按1 %的接種量接入長孢洛德酵母菌CGMCC6645對 其進行發酵，培養兩天后觀察發酵液變化情況，結果表明，發酵液具有天然香味。通過比較 不同的煙草材料發酵情況，結果表明，發酵煙梗末所得的香料，香味比較純正、濃厚。并且， 發酵材料和水的比例不同，發酵液的變化情況不一樣，產香效果也不一樣。煙草材料和水的 比例為1:20時，發酵效果比較明顯。 實施例3 --發酵液的萃取 將實施例2所得的發酵液過濾除渣后，用二氯甲烷溶劑同時蒸餾萃取3h，萃取液 用無水硫酸鈉干燥，置于4°C過夜，過濾，減壓濃縮至約lml，濃縮液用于GC-MS分析（詳見 表1)。對照為不接種酵母菌的培養基。 --發酵液物質成分測定 酵母菌發酵煙草材料所得香料中含有多種煙用香料成分，包括苯乙醇、鄰苯二甲 酸二丁酯、4-羥基丁酸內酯、糠醛、7-羥基-6-甲氧基香豆素、對羥基苯乙醇、莨菪亭、二輕 獼猴桃內酯等。其中，最主要的成分為具有本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種煙草發酵所得煙用香料，其特征在于：將煙草粉碎后與水按1:5～1:50的質量比配制成發酵培養基，高壓滅菌后按1％的質量比接種長孢洛德酵母CGMCC6645，發酵培養2天后對發酵液進行過濾濃縮，即得所需煙用香料。

【技術特征摘要】
1. 一種煙草發酵所得煙用香料，其特征在于：將煙草粉碎后與水按1:5?1:50的質量 比配制成發酵培養基，高壓滅菌后按1 %的質量比接種長孢洛德酵母CGMCC6645,發酵培養 2天后對發酵液進行過濾濃縮，即得所需煙用香料。2. 根據權利要求1所述的煙草發酵所得煙用香料，其特征在于：所述的煙草與水的質 量比優選為1:20。3. 根據...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馮斌，段焰青，李利君，楊培香，夏建軍，黨立志，王文元，劉亞，
申請(專利權)人：云南中煙工業有限責任公司，
類型：發明
國別省市：云南;53