抗?ErbB2抗體變異體制造技術

本發明專利技術涉及抗?ErbB2抗體變異體或其抗原結合片段、對這些進行編碼的核酸分子及它們的用途。本發明專利技術的抗體變異體能夠以高的親和度與ErbB2相結合。因此，上述抗體變異體即使使用少量也能有效地預防或治療癌。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利摘要】本專利技術涉及抗-ErbB2抗體變異體或其抗原結合片段、對這些進行編碼的核酸分子及它們的用途。本專利技術的抗體變異體能夠以高的親和度與ErbB2相結合。因此，上述抗體變異體即使使用少量也能有效地預防或治療癌。【專利說明】抗-ErbB2抗體變異體 【相關申請的交叉引用】 本申請是2013年4月26日提交的國際申請的國家階段，其要求2012年5月8日 提交的韓國專利申請No. 2012-0048805的優先權，其全部內容通過引用并入本文。 【
】 本專利技術涉及抗_ErbB2抗體變異體或其抗原結合片段、對這些進行編碼的核酸分 子及它們的用途。 【
技術介紹
】 眾所周知，HER2 (ErbB2)作為 EGFR (ErbBl)、HER3 (ErbB3)及 HER4 (ErbB4)等受 體酪氨酸激酶（receptor tyrosin kinase)的一個種類，存在于細胞膜，并對細胞的生 長、分化及生存起到重要的作用（Jaclyn et al. Clin Breast Cancer. 8:38-49(2008))。 HER2與其他HER家族蛋白不同，不會以依賴性的方式對配體進行活性化，而是始終以活性 化的狀態起作用，并且，通常在正常細胞中，在細胞膜中表達約20000個左右，但在癌細胞 中，過度表達約在正常細胞中的表達量的100倍即約20000000個左右（Shepard et al. J Clin Immunol. 11:117-127(1991))。這種 HER2 的過度表達不僅過度誘導 HER2-HER2 同 型二聚體（homodimer)，還過度誘導與作為其他HER家族的HERl或HER3的異源二聚體 (heterodimer)，其結果，引發細胞的增殖及生長，促進變形為癌細胞（Mayumi et al.Clin Cancer Res. 12:7242-7251 (2006))。 到目前為止，在乳腺癌（25-30 % )、卵巢癌（15-30% )、胃癌（23% )、肺癌 (11-32%)、腎癌（30-40%)、直腸癌（17-90 %)、胰腺癌（26-45 %)、膀胱癌（44%)、前 列腺癌（12% )及頭頸癌（29-39% )等多種癌細胞中報告了 HER2的過度表達（Cancer Tmmunol Immunother 53:166-175 (2004) ;Clin Cancer Res 12:4377s_4383s(2006) ;Br J Cancer 91:1195-1199(2004) ;Cancer 94:2584-2589(2002) ;Cancer 98:66-73(2003); Int J Oncol 27 :681-685(2005) ；Int J Pancreatol 17:15-21(1995) ；Int J Cancer 87:349-359(2000) ;Ann Oncol 12:S15-S19(2001) J Pathol 204:317-325(2004))。并 且，在子宮內膜癌、涎腺癌、結腸癌及甲狀腺癌中觀察到了 HER2的過度表達（Science 229:974(1985) ；Lancet ： 1:765-767(1986) ；Mol Cell Biol.6:955-958(1986) ；0ncogene Res.3:21-31 (1988) ；0ncogene 4:81-88(1989) ；Cancer Res. 51:1034(1991) ；Gynecol. Oncol,38:364 (1990) ；Cancer Res. 50:421-425 (1990) ；Cancer Res. 50:5184 (1990)； Cancer Res.49:6605 (1989) ；Mol.Carcinog. 3:254-257 (1990) ；Br.J.Cancer 57:358-363(1988) ;Pathobiology59:46-52(1991) ;Cancer 65:88-92(1990))。 將HER2作為祀的抗癌治療劑由美國基因泰克（Genentech)公司研發，且唯一的 是從1998年開始銷售的赫賽汀（Hereeptill?,曲妥珠單抗（Trastuzumab)，4D5)，適應 癥為將過度表達HER2的轉移性乳腺癌或早期乳腺癌與其他抗癌劑一同并用用藥（J. Clin. Oncol. 17:2639-2264(1999))。已知赫賽汀作用于HER2的細胞外域IV，并抑制HER2-HER2 之間的同型二聚體的生成，抑制癌細胞的生存和增殖（Ann Oncol 18:977-984(2007))。 但據報告，作為HER2靶抗癌治療劑，雖然赫賽汀已獲得成功，但當單獨用藥時，呈 現出12-34%左右的反應效果，當并用用藥時，呈現出38-50%左右的反應效果，并且，當單 獨用藥時，2-7%呈現出異常的心臟疾病，當并用用藥時，11-28%呈現出異常的心臟疾病， 而在10位女性中的一位左右因擔心會增加已具有的心臟疾病的危險而無法接受赫賽汀的 藥物治療（N Engl J Med 357:39-51 (2007))。因此，需要研發副作用少于赫賽汀的后續抗 體，當前，美國基因泰克（Genetech)公司所研發的奧密塔克（Omnitarg)在臨床第三階段 (Clin Cancer Res 12:4436s_4440s (2006))。但是，奧密塔克（Omnitarg)與赫賽汀相比， 雖然在副作用方面具有優點，但存在功效下降的缺點。基于這種理由，急需新的HER2抗體 或其改善的形態，例如親和性或功效等得到增加的4D5抗體變異體。 通常，獲得對抗原的高親和度抗體由于露出的抗原的表面受限而變得困難。尤 其，這種現象在從幼稚（naive)噬菌體展示文庫執行體外篩選（in vitro selection)時 更容易發生。因此，從幼稚噬菌體展示文庫通常所獲得的抗體的親和度僅為IO-IOOnM左右 (Iwai et al. Protein Eng Des Sel. 23:185-193 (2010))〇 用于提高抗體的親和度的方法可分為隨機方法（random approach)和靶方法 (targeted approach) (Sheedy et al. Biotechnol Adv. 5 (4) :333-52 (2007))。祀突變誘 發（Targeted mutagenesis)為針對特定CDR或FR,即特定氨基酸給予突變的方法，可利用 革巴聚合酶鏈式反應（targeted PCR)、Q)R步行（O)R walking)、定點誘變（site-directed mutagenesis)及⑶R祀熱點（O)R target hotspot)等方法。隨機突變誘發（Random mutagenesis)為針對可變域給予變異的方法，可利用易錯聚合酶鏈式反應（error-prone PCR)、DNA 改組及鏈改組等方法（Kim et al. Adv Drug Deliv Rev. 58:657-667(2006))。將 利用這種方法制備的多種變異體制成文庫，并經由通過在噬菌體的表面展示多種變本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種抗?ErbB2抗體變異體或其抗原結合片段，其特征在于，包含：(a)輕鏈可變域，以及(b)重鏈可變域，具有選自主要由以下氨基酸取代組成的組中的2種以上的氨基酸取代：在SEQ?ID?NO：1的氨基酸序列中，基于卡巴特編號系統的位置41的Pro被Arg取代，位置96的Gly被Asn取代，位置97的Gly被Ala取代，位置98的Asp被Trp取代，位置98的Asp被Lys取代，位置100b的Ala被Ser取代，位置100c的Met被Phe取代，位置101的Asp被Ala取代，位置101的Asp被Val取代，位置102的Tyr被His取代，及位置102的Tyr被Leu取代。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：文昇基，樸昭羅，安基榮，
申請(專利權)人：株式會社鐘根堂，
類型：發明
國別省市：韓國;KR