基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amadori化合物。本發(fā)明專利技術(shù)涉及到對(duì)番茄制品、干制果品、煙草等食品中Amadori化合物的檢測(cè)，以進(jìn)一步指導(dǎo)食品加工。方法利用Amadori化合物與Cu2+形成穩(wěn)定絡(luò)合物，而該絡(luò)合物具有比Amadori化合物本身更強(qiáng)的紫外吸收、波長(zhǎng)紅移的特性，結(jié)合Amadori化合物-Cu2+絡(luò)合能力以及荷質(zhì)比不同提供毛細(xì)管電泳分離的動(dòng)力，利用毛細(xì)管電泳的在線掃集技術(shù)進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度和檢測(cè)限，可用于番茄制品如番茄粉、干果如葡萄干、煙草中Amadori化合物的檢測(cè)。本發(fā)明專利技術(shù)的突出優(yōu)點(diǎn)在于無(wú)需對(duì)樣品中的Amadori化合物衍生化處理，操作方便，能夠在30min的較短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)Amadori化合物的有效分離、測(cè)定，具有較高的靈敏度、檢測(cè)限，高效便捷，可靠性強(qiáng)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amador i化合物
基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amadori化合物。本專利技術(shù)涉及到對(duì)番茄制品、干制果品、煙草等食品中Amadori化合物的檢測(cè)，以進(jìn)一步指導(dǎo)食品加工。方法利用Amadori化合物與Cu2+形成穩(wěn)定絡(luò)合物，而該絡(luò)合物具有比Amadori化合物本身更強(qiáng)的紫外吸收、波長(zhǎng)紅移的特性，結(jié)合Amadori化合物-Cu2+絡(luò)合能力以及荷質(zhì)比不同提供毛細(xì)管電泳分離的動(dòng)力，利用毛細(xì)管電泳的在線掃集技術(shù)進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度和檢測(cè)限，可用于番茄制品如番茄粉、干果如葡萄干、煙草中Amadori化合物的檢測(cè)。屬于儀器分析和食品加工領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
Amadori化合物是美拉德反應(yīng)的初級(jí)產(chǎn)物。食品熱加工過(guò)程中，葡萄糖、果糖等還原糖作為羰基供體，與氨基酸、肽、蛋白質(zhì)中含有的自由氨基之間發(fā)生糖胺縮合反應(yīng)，經(jīng) Amadori重排后，形成結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定的中間產(chǎn)物-1_氨基_1_脫氧_2_酮糖，即 Amadori 化合物，其通用表達(dá)方式為 Fructose Amino acid,包括 FruGlu、FruPca、FruHis、FruPhe、FruLeu、FruIle、FruAla等。Amadori化合物的含量對(duì)生產(chǎn)中控制產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)、色澤、風(fēng)味等產(chǎn)品質(zhì)量，改善工藝具有重要意義，尤其是在番茄制品、干果制品、煙草等的加工中。 由于Amadori化合物對(duì)番爺制品、煙草產(chǎn)品的質(zhì)量有非常大的影響，建立一種快速、高效的測(cè)定Amadori化合物的方法非常重要。但目前對(duì)Amadori化合物的檢測(cè)方法主要有利用不同檢測(cè)器(示差折光檢測(cè)器RID、紫外檢測(cè)器UV、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器ELSD、質(zhì)譜檢測(cè)器MS)、不同固定相的高效液相色譜法；利用電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)或者二極管陣列檢測(cè)器(PDA)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)的高效離子交換色譜法(HPAEC)以及利用紫外可見(jiàn)檢測(cè)器(UV)、熒光檢測(cè)器(FL)和質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)的毛細(xì)管電泳法。而這些現(xiàn)有的方法各有其缺點(diǎn)和局限性:高效液相色譜法需要耗時(shí)的清洗柱子的過(guò)程，并且利用常規(guī)的反相柱，不能將結(jié)構(gòu)相似的多種Amadori化合物有效的分開(kāi)；高效離子交換色譜法只對(duì)一部分Amadori化合物有良好的分離檢測(cè)能力，不適用于分析復(fù)雜體系，另外部分Amadori化合物會(huì)在離子交換柱上發(fā)生分解；而毛細(xì)管電泳檢測(cè)主要是利用紫外或熒光檢測(cè)器，但由于大多數(shù)Amadori化合物有很弱的或者沒(méi)有紫外可見(jiàn)光吸收和熒光產(chǎn)生，因此利用紫外或熒光檢測(cè)器的毛細(xì)管電泳檢測(cè)Amadori化合物往往需要衍生化處理，衍生化過(guò)程復(fù)雜且耗時(shí)，同時(shí)利用質(zhì)譜檢測(cè)器的毛細(xì)管電泳由于設(shè)備昂貴，并沒(méi)有廣泛被使用。 研究表明，路易斯酸和路易斯堿的相互作用能提供毛細(xì)管電泳分離的動(dòng)力。許多有機(jī)化合物含有大量的O和N原子，能夠提供孤對(duì)電子，從而與Cu2+發(fā)生相互作用，形成絡(luò)合物(J.Sep.Sc1.2009，32，1927-1933 ；J.Anal.Chem.2006，34，1219-1222 ；J.Am.Chem.Soc.2000,122,3787-3788)。比如 Amadori 化合物就能與 Cu2+ 形成絡(luò)合物(InorganicaChimica Acta 214(1993)57-66 ；J.Agric.Food Chem.2007,55,10373-10381 ；InorganicaChimica Acta 413(2014)45-54)。不同Amadori化合物與Cu2+的不同絡(luò)合能力以及荷質(zhì)比提供分離的動(dòng)力。更為重要的是Cu2+與Amadori化合物的絡(luò)合作用所引起的電荷轉(zhuǎn)移躍遷使得絡(luò)合物的紫外吸收波長(zhǎng)紅移，在260nm左右有很強(qiáng)的紫外吸收，這也大大提高了檢測(cè)的靈敏度，使得定量成為可能。 毛細(xì)管電泳的在線掃集技術(shù):樣品區(qū)的自由態(tài)的分析物A帶很少電量或者不帶電，因此其有效遷移率很小，在施加電壓后，Mn+即Cu2+有很大的有效遷移率，因此能夠很快的進(jìn)入樣品區(qū)SZ，進(jìn)一步與Amadori化合物形成絡(luò)合物，并且絡(luò)合物的遷移率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于A，從而樣品區(qū)分析物濃度能進(jìn)一步提高(J.Sep.Sc1.2009，32，1927-1933)。 本專利技術(shù)利用Amadori化合物與Cu2+形成穩(wěn)定絡(luò)合物,而該絡(luò)合物具有比Amadori化合物本身更強(qiáng)的的紫外吸收、波長(zhǎng)紅移的特性，結(jié)合毛細(xì)管電泳的在線掃集技術(shù)進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度和檢測(cè)限，可用于番茄制品、干果制品、煙草等食品中Amadori化合物的快速檢測(cè)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)所存在的不足，本專利技術(shù)集合了絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)，提供一種快速、準(zhǔn)確測(cè)定番茄制品、干果制品、煙草等食品中Amadori化合物含量的方法，以便進(jìn)一步指導(dǎo)食品的加工。 本專利技術(shù)的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的:基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amadori化合物。包括以下步驟: ①單標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:標(biāo)準(zhǔn)固體樣品自制(通過(guò)LC-MS和NMR驗(yàn)證純度)或者購(gòu)于TRC公司，然后分別稱取適量的各種Amadori化合物，分別配成10ml的標(biāo)準(zhǔn)水溶液，濃度均為1.0X10_3mol/L，4°C下儲(chǔ)藏并且避光(3天之內(nèi)使用)。 ②混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:分別移取各單標(biāo)準(zhǔn)溶液5ml于50ml的容量瓶中，用超純水定容到刻度，得到濃度為1.0 X 10_4mol/L，4°C下儲(chǔ)藏并且避光(3天之內(nèi)使用)，通過(guò)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液優(yōu)化毛細(xì)管電泳條件(見(jiàn)步驟⑤)。 ③標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:分別吸取適量的單標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，配成5ml濃度分別為0.5Xl(T4mol/L、0.25X l(T4mol/L、0.2X l(T4mol/L、0.lXl(T4mol/L 的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，在步驟②優(yōu)化條件的基礎(chǔ)上，進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，每個(gè)樣品測(cè)定5次，記錄出峰時(shí)間，同時(shí)以峰高為橫坐標(biāo)，Amadori化合物濃度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、相關(guān)系數(shù) ④樣品萃取:將番茄粉或者番茄醬添加到去離子水中，攪拌一段時(shí)間后，混合物進(jìn)行冷凍離心，上清液用PVDF注射過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，制得試樣。或者將煙草樣品粉碎，以體積濃度為60%甲醇/水溶液萃取，過(guò)濾，收集濾液，濾液中加入正己烷萃取2-5次，除去色素等雜質(zhì)，再將甲醇/水相濃縮至干，用去離子水定容后，用PVDF注射過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，制得試樣。 ⑤樣品測(cè)定:基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amadori化合物:檢測(cè)波長(zhǎng)260nm,進(jìn)樣量0.5psi X 5.0sec,電泳溫度20°C,分離電壓23KV,緩沖溶液為35mM CuSO4水溶液，用0.05%乙酸進(jìn)行PH調(diào)節(jié)，緩沖溶液PH4.26，儀器具體操作要求⑤如下: 使用貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)有限公司的P/ACE MDQ毛細(xì)管電泳系統(tǒng)，首次分析前用lmol/L氫氧化鈉溶液潤(rùn)洗lOmin，等待5min，然后依次用去離子水、緩沖溶液各潤(rùn)洗lOmin。每分析I小時(shí)，小瓶中的緩沖溶液換成新的緩沖溶液，并且清理掉電極上析出的金屬雜質(zhì)，同時(shí)二次進(jìn)樣間隙用新緩沖溶液潤(rùn)洗毛細(xì)管5min。 本專利技術(shù)的有益效果 本專利技術(shù)的突出優(yōu)點(diǎn)在于無(wú)需對(duì)樣品中的Ama本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amadori化合物。其特征在于結(jié)合Amadori化合物?Cu2+絡(luò)合能力以及荷質(zhì)比不同提供毛細(xì)管電泳分離的動(dòng)力，利用毛細(xì)管電泳的在線掃集技術(shù)進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度和檢測(cè)限，無(wú)需對(duì)Amadori化合物進(jìn)行衍生化處理就能在較高波長(zhǎng)利用紫外檢測(cè)器直接進(jìn)行檢測(cè)。
【技術(shù)特征摘要】
1.基于絡(luò)合作用與在線掃集技術(shù)的毛細(xì)管電泳直接紫外法快速檢測(cè)Amadori化合物。其特征在于結(jié)合Amadori化合物-Cu2+絡(luò)合能力以及荷質(zhì)比不同提供毛細(xì)管電泳分離的動(dòng)力，利用毛細(xì)管電泳的在線掃集技術(shù)進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度和檢測(cè)限，無(wú)需對(duì)Amadori化合物進(jìn)行衍生化處理就能在較高波長(zhǎng)利用紫外檢測(cè)器直接進(jìn)行檢測(cè)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的Amadori化合物的方法，其特征在于可一次性檢測(cè)以下(但不限于以下)Amadori 化合物:FruGlu、FruPca、FruHis、FruPhe,FruLeu 和 Frulle。具體檢測(cè)參數(shù):檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，進(jìn)樣量0.5psiX5.0sec,電泳溫度20°C，分離電壓23KV，緩沖溶液為...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張連富，余佳浩，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江南大學(xué)，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：江蘇;32
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