一種用于測定醋酸格拉替雷樣品中哌啶雜質(zhì)含量的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種用于測定醋酸格拉替雷樣品中哌啶雜質(zhì)含量的方法。所述方法主要包括：(1)取一定量的醋酸格拉替雷樣品，置于氣相頂空瓶中；(2)加入一定量堿性溶液溶解樣品，壓蓋密封，并加熱；(3)通過氣相色譜分析樣品中的哌啶含量。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種用于測定醋酸格拉替雷樣品中哌啶雜質(zhì)含量的方法。
技術(shù)介紹
醋酸格拉替雷(Glatiramer?acetate)是一種合成的肽類化合物，是由以色列藥廠TEVA所研發(fā)制造的，商品名Copaxone，于1996年獲美國FDA核準用於治療多發(fā)性硬化癥，藥品為白色至灰白色的滅菌凍晶粉末。哌啶，又名六氫吡啶、一氮六環(huán)，英文名稱：Piperidine，分子式：C5H11N，分子量為85.15，CAS號：110-89-4。為無色澄清液體，有類似氨的氣味。其結(jié)構(gòu)為：哌啶主要用作溶劑、有機合成中間體、環(huán)氧樹脂交聯(lián)劑、縮合催化劑等。醫(yī)藥上用作麻醉劑、殺菌劑等，對眼睛和皮膚有強烈刺激性并是升壓劑。小劑量可刺激交感和副交感神經(jīng)節(jié)，大劑量反而有抑制作用，誤服后可引起虛弱、惡心、流涎、呼吸困難、肌肉癱瘓和窒息。屬于第二類易制毒。在多肽藥物的合成工藝中，哌啶被用作脫保護，所以在終產(chǎn)物中可能會有殘留哌啶。能夠準確、可靠的分析出醋酸格拉替雷中殘留溶劑哌啶的含量，對于藥物的生產(chǎn)控制和產(chǎn)品質(zhì)量控制具有重要的實用價值。哌啶極性很大，且無紫外吸收，所以不能用一般的高效液相色譜方法進行測定，目前關(guān)于哌啶的檢測方法報道的不是很多，也不是很成熟，現(xiàn)有的方法主要是依靠陽離子色譜來進行分析，陽離子色譜法雖然能夠分離出哌啶并進行檢測，但其只能對游離哌啶進行檢測，對于以結(jié)合形式存在的哌啶是無法進行分離、準確測定的，所以測定結(jié)果不能體現(xiàn)出樣品中真正的哌啶含量。可見，開發(fā)出一種能夠檢測出所有存在形式的哌啶分析方法是很有必要的，哌啶沸點為106度，且在高溫下化學性質(zhì)穩(wěn)定，適合氣相色譜分析要求，但一般的氣相方法也只能對以游離形式存在的哌啶進行分析，當樣品中同時存在結(jié)合形式的哌啶時，還是不能進行準確測定。因此，需要一種更為準確的哌啶檢測和定量方法
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對上述哌啶檢測分析過程中的問題，專利技術(shù)人根據(jù)多年的實際工作經(jīng)驗，結(jié)合在醋酸格拉替雷制備過程中的相應情況，研發(fā)了一種適用于醋酸格拉替雷樣品中的哌啶雜質(zhì)檢測分析的新方法。本專利技術(shù)首先涉及一種醋酸格拉替雷產(chǎn)品中哌啶雜質(zhì)的檢測分析方法，其步驟包括：(1)取一定量的醋酸格拉替雷樣品，置于氣相頂空瓶中；(2)加入一定量堿性溶液溶解樣品，壓蓋密封，并加熱；(3)通過氣相色譜分析樣品中的哌啶含量。其中，步驟(1)所述的醋酸格拉替雷樣品的量為5～200mg/ml，所述的氣相頂空瓶為10～50mL規(guī)格，優(yōu)選為取150mg樣品,置于10毫升氣相頂空瓶中。步驟(2)所述的堿性溶液為氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氫氧化鋇溶液、氫氧化鈣溶液以及甲醇鈉、乙醇鈉等有機堿性溶液，其濃度為0.1-10M；制成的樣品中含哌啶的濃度為0.1-10000ppm。優(yōu)選為1M濃度的氫氧化鈉溶液，用量為1mL氫氧化鈉/50mg醋酸格拉替雷。步驟(2)所述的加熱溫度為60～90℃下，加熱處理時間為12～48小時，優(yōu)選為在80℃下，加熱處理24小時。步驟(3)所述的氣相色譜的條件為，1)色譜柱包括但不限于SGE?AC-5、DB-5、HP-5、SPB-5、Rtx-5、BP-5等色譜柱，優(yōu)選為Agilent?CP-Sil8CB-Amines；柱長為10～100m，內(nèi)徑：0.2～0.53mm，膜厚：0.25～3.0μm；2)樣品進樣方式為直接進樣和頂空進樣，進樣量為1-1000微升。本專利技術(shù)所述的頂空進樣的條件參數(shù)為：1)樣品加熱溫度為40-150度，樣品瓶加熱時間為10到100分鐘；2)進樣口溫度為120-300℃，柱溫為40-200℃；3)所用檢測器為氫火焰離子化檢測器，即FID檢測器，檢測器溫度為150-450℃，分流比為0-100:1；4)樣品分析所用載氣為高純氮氣、高純氦氣或高純氫氣，優(yōu)選為高純氮氣；5)載氣流速為0.2到10mL/min。本專利技術(shù)所述的哌啶含量的計算方法優(yōu)選為外標法。附圖說明圖1、本專利技術(shù)所述氣相色譜方法檢測空白溶劑的譜圖。圖2、本專利技術(shù)所述氣相色譜方法檢測醋酸格拉替雷樣品中哌啶雜質(zhì)的譜圖。圖3、本專利技術(shù)所述氣相色譜方法檢測哌啶標準品的譜圖。具體實施方式結(jié)合以下實施例對本專利技術(shù)作進一步說明：實施例1：系統(tǒng)適用性試驗為了保證該分析方法的可行性，首先進行了系統(tǒng)適用性試驗，結(jié)果如下：稱取251.17毫克的哌啶，置于50mL容量瓶中，用50％DMSO水溶液稀釋至刻度，作為母液；取1mL母液置于100mL容量瓶中，用1M氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，制成濃度為50.23μg/mL的哌啶對照品溶液，連續(xù)進樣5針，計算峰面積RSD，其結(jié)果為5.12％，可見其結(jié)果符合要求。實施例2：分析方法準確度的測定具體過程為：2.1.對照液的配置：50％濃度水平對照液：取實施例1中的母液0.5mL，置于100mL容量瓶中，用1M氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。100％濃度水平對照液：取實施例1中的母液1.0mL，置于100mL容量瓶中，用1M氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。150％濃度水平對照液：取實施例1中的母液1.5mL，置于100mL容量瓶中，用1M氫氧化鈉溶液稀釋至刻度。2.2.回收樣品溶液的配置：50％濃度水平的樣品溶液：分別稱取醋酸格拉替雷樣品150.31mg、154.28mg、148.20mg置于10毫升氣相頂空瓶中，加入3mL50％濃度水平對照液，壓蓋。100％濃度水平的樣品溶液：分別稱取醋酸格拉替雷樣品149.67mg、155.26mg、153.06mg置于10毫升氣相頂空瓶中，加入3mL100％濃度水平對照液，壓蓋。150％濃度水平的樣品溶液：分別稱取醋酸格拉替雷樣品149.66mg、149.12mg、156.01mg置于10毫升氣相頂空瓶中，加入3mL150％濃度水平對照液，壓蓋。將以上各回收樣品溶液在80℃加熱24小時，以實施例1中的對照液，作為對照進行測定，計算回收率。三個濃度水平的平均回收率為98.26％，回收率RSD為1.01％，可見此方法可以對樣品中的哌啶進行準確測定。實施例3：樣品中的哌啶含量測定方法一分別稱取樣品151.78mg、150.49mg,置于10毫升氣相頂空瓶中，加入3mL1M氫氧化鈉溶液，壓蓋，在80℃加熱24小時，色譜條件為：色譜柱為Agilent?CP-Sil?8CB,(30m*0.32mm*1.0μm)氣相色譜柱。樣品進樣方式為頂空進樣，進樣量為1000微升，樣品瓶加熱溫度為90度，樣品瓶加熱時間為30分鐘，進樣口溫度為180度，起始柱溫為150℃，維持5分鐘，以每分鐘20℃本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種醋酸格拉替雷產(chǎn)品中哌啶雜質(zhì)的檢測分析方法，其步驟包括：(1)取一定量的醋酸格拉替雷樣品，置于氣相頂空瓶中；(2)加入一定量堿性溶液溶解樣品，壓蓋密封，并加熱；(3)通過氣相色譜分析樣品中的哌啶含量。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種醋酸格拉替雷產(chǎn)品中哌啶雜質(zhì)的檢測分析方法，其步驟包括：
(1)取一定量的醋酸格拉替雷樣品，置于氣相頂空瓶中；
(2)加入一定量堿性溶液溶解樣品，壓蓋密封，并加熱；
(3)通過氣相色譜分析樣品中的哌啶含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，步驟(1)所述的醋酸格拉替雷樣品的量為5～200mg/ml，
所述的氣相頂空瓶為10～50mL規(guī)格，優(yōu)選為取150mg樣品,置于10毫升氣相頂空瓶中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一所述的分析方法，其特征在于，步驟(2)所述的堿性溶液為氫氧化鈉溶液、
氫氧化鉀溶液、氫氧化鋇溶液、氫氧化鈣溶液以及甲醇鈉、乙醇鈉等有機堿性溶液，其濃度為0.1-10M；
制成的樣品中含哌啶的濃度為0.1-10000ppm。優(yōu)選為1M濃度的氫氧化鈉溶液，用量為1mL氫氧化鈉/50mg
醋酸格拉替雷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一所述的分析方法，其特征在于，步驟(2)所述的加熱溫度為60～90℃下，加
熱處理時間為12～48小時，優(yōu)選為在80℃下，加熱處理24小時。

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王宏飛，單林娟，鄧興建，唐洋明，馬亞平，袁建成，
申請(專利權(quán))人：深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44