一種與男性不育癥相關的遺傳標記制造技術

本發明專利技術公開了一種與男性不育癥相關的遺傳標記，其序列是UBE2B基因的序列，所述UBE2B基因的啟動子區域與轉錄因子SP1的結合位點突變，突變位點選自Chr.133706771T>A、Chr.133706876T>G和Chr.133706925A>G中的一個或多個。通過大規模測序在男性不育癥病人中篩選出了UBE2B基因啟動子區域的四個新的突變位點，將轉錄因子質粒分別與野生型質粒和突變體質粒共轉染到細胞內，通過實驗發現其功能有明顯差異，表明UBE2B基因啟動子區域的突變與男性不育癥(尤其是無精子癥)具有相關性，從而能夠通過該突變來實現對男性不育癥的診斷檢測。

【技術實現步驟摘要】

本申請涉及男性不育癥檢測領域。
技術介紹
不孕不育癥越來越受到關注，已成為一個亟待解決的世界性難題。男性不育發病因素具有復雜性和多樣性的特點，但其具體發病機制仍不清楚。目前對男性不育發病機制的探索主要集中在遺傳因素上，全球15％的不育病例是由基因突變引起的。目前研究認為男性不育很大程度上是參與精子發生過程的相關基因功能障礙導致生精異常所致。精子的發生和成熟過程伴隨著一系列的睪丸特異性基因的表達，這些基因被稱作“沙文基因”(chauvinist?gene)，這些基因在精子的生成過程中發揮決定性的作用。泛素結合酶E2B(Ubiquitin-conjugati-ng?enzyme?E2B,UBE2B)是與人類精子發生相關的一個基因，目前對該基因在精子發生過程中的作用有較為深入的研究。UBE2B，又名RAD6B和HR6B，屬于泛素蛋白酶體系(Ubiquitin?Proteasome?System?UPS)中的一部分，其編碼的E2B泛素結合酶與泛素激活酶、泛素連接酶一起將8KDa大小的泛素蛋白共軛結合在特定的蛋白底物上，通常對目的蛋白進行泛素化作用，通過蛋白酶體將泛素化的目的蛋白降解，而單一的泛素化作用卻參與許多生命過程，包括機體代謝平衡、應激反應、細胞器的生物合成、細胞周期調控、DNA修復、細胞凋亡、抗原加工和基因表達等。UBE2B基因編碼的蛋白序列在小鼠、大鼠和人完全相同，表明該基因在真核細胞中高度保守。小鼠UBE2B基因定位于染色體11q31.3位點，其cDNA長度2141bp，開放閱讀框458bp，編碼一個152個氨基酸，分子量為17.3KDa的蛋白質。免疫組織化學結果顯示，該基因在小鼠睪丸支持細胞和圓形精子高表達。UBE2B基因敲除小鼠表現為雄性不育，精子數目顯著減少，畸形精子數目明顯增多，精子運動力基本消失；進一步的研究發現，UBE2B基因敲除小鼠精母細胞聯會復合體(Synaptonemal?complex)、精子細胞核和鞭毛軸絲結構均發生異常。隨后的研究表明，組蛋白H2A是UBE2B作用的底物之一，UBE2B通過參與精母細胞和精子細胞的組蛋白修飾，調節精子發生的過程。在精母細胞減數分裂過程中，X與Y染色體形成XY復合體(XY?body)，而失去轉錄活性，這一過程與組蛋白的修飾密切相關。人的UBE2B基因定位于染色體5q31.1，含有6個外顯子。人類HR6A(UBE2A)和HR6B(UBE2B)是與酵母菌Rad6基因非常相似的兩種同源染色體，在隨后的研究中發現HR6A基因敲除小鼠有正常的生育能力，但是，當敲除小鼠的UEB2B基因時，雄性小鼠表現為不育，由此可推斷UBE2B基因在雄性小鼠生育能力上有重要作用。在人的UEB2B基因中，目前已知有476個基因多態性，其中一些與男性不育有關。Suryavathi等比較530例男性不育患者和300例健康男性UBE2B基因SNP差異，發現與男性不育癥發生相關的5個SNP位點，在患者和健康男性的發生率分別為37.5％和7.3％。上述結果表明UBE2B基因對于小鼠和人的精子發生具有重要的調節作用。近來，國外的一些研究認為UBE2B基因啟動子5'端非編碼區(5'UTR)的突變同樣導致男性不育的風險增加，該研究發現同野生型相比，在UBE2B基因的5'UTR區，不管是一個還是兩個CGG序列的缺失都將增強特異性β1糖蛋白(specificβ1glycoprotein?SP1)與UBE2B啟動子的親和力，這可能導致男性不育。而Sp1作為廣泛存在的轉錄激活因子在既往的研究中表明其在人類精子發生過程中的多個步驟發揮重要作用。基因多態性可能會增加男性不育的易感性，最近的研究分析表明啟動子多態性可能作為損害精子發生過程的一個潛在危險因素，例如雌激素α受體啟動子多態性可導致精子數量顯著下降，而伊朗國家不育患者的HO-1基因啟動子GT序列的重復擴張與少精子癥和無精子癥相關。
技術實現思路
本專利技術提供一種與男性不育癥相關的遺傳標記。本專利技術提供一種與男性不育癥相關的遺傳標記，其序列是UBE2B基因的序列，所述UBE2B基因的啟動子區域突變，突變位點選自Chr.133706771T>A、Chr.133706876T>G、Chr.133706925A>G和Chr.133706996T>G中的一個或多個。一種與男性不育癥相關的遺傳標記，其序列是UBE2B基因的序列，所述UBE2B基因的啟動子區域與轉錄因子SP1的結合位點突變，突變位點選自Chr.133706771T>A、Chr.133706876T>G和Chr.133706925A>G中的一個或多個。不育癥是無精子癥。一般的，突變位點選自上述突變位點中的一個。所述突變位點是Chr.133706925A>G。檢測所述遺傳標記的引物對，其上游引物的序列如SEQ?ID?NO:7所示，其下游引物的序列如SEQ?ID?NO:8所示。一種男性不育癥的檢測試劑盒，能夠特異性識別所述的遺傳標記。一種所述引物對的用于檢測男性不育癥的試劑盒。一種所述遺傳標記在制備男性不育癥檢測試劑盒上的應用。本專利技術的有益效果是：通過大規模測序在男性不育癥病人中篩選出了UBE2B基因啟動子區域的四個新的突變位點，將轉錄因子質粒分別與野生型質粒和突變體質粒共轉染到細胞內，通過實驗發現其功能有明顯差異，表明UBE2B基因啟動子區域的突變與男性不育癥(尤其是無精子癥)具有相關性，從而能夠通過該突變來實現對男性不育癥的診斷檢測。附圖說明圖1是UBE2B啟動子區域的基因突變鑒定結果圖；圖2是雙熒光素酶報告基因實驗的結果圖，橫坐標分別表示對照組、野生型、mut1、mut2及mut3突變體，對于每組，左側方柱表示轉染HeLa細胞，右側方柱表示轉染293FT細胞；圖3是含有UBE2B?mut3突變的患者的病理切片的組織形態學結果圖。具體實施方式下面通過具體實施方式結合附圖對本專利技術作進一步詳細說明。1實驗材料1.1男性不育患者和有正常生育能力男性的血液標本收集北京大學深圳醫院300例特發性無精子癥(IA)患者和300例有正常生育能力男性的血液標本。根據WHO的IA診斷標準納入患者，其標準如下：1)3次離心鏡檢精液仍未見到精子，2)骨盆腔和生殖系統無驗證和損傷，3)無內分泌系統疾病，4)無染色體核型異常和Y染色體微缺失。對于無精子癥患者盡可能行睪丸活檢和組織類型分析，對本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種與男性不育癥相關的遺傳標記，其序列是UBE2B基因的序列，所述UBE2B基因的啟動子區域突變，突變位點選自Chr.133706771T>A、Chr.133706876T>G、Chr.133706925A>G和Chr.133706996T>G中的一個或多個。

【技術特征摘要】
1.一種與男性不育癥相關的遺傳標記，其序列是UBE2B基因的序列，所
述UBE2B基因的啟動子區域突變，突變位點選自Chr.133706771T>A、
Chr.133706876T>G、Chr.133706925A>G和Chr.133706996T>G中的一個或多
個。
2.一種與男性不育癥相關的遺傳標記，其序列是UBE2B基因的序列，所
述UBE2B基因的啟動子區域與轉錄因子SP1的結合位點突變，突變位點選自
Chr.133706771T>A、Chr.133706876T>G和Chr.133706925A>...

【專利技術屬性】
技術研發人員：牟麗莎，黃衛人，刁瑞英，吳漢偉，蔡志明，
申請(專利權)人：深圳市第二人民醫院，
類型：發明
國別省市：廣東;44