一種抗腫瘤小分子多肽及應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種抗腫瘤小分子多肽及應(yīng)用。該抗腫瘤小分子多肽的氨基酸序列如下所示：LQLQAEER。該抗腫瘤小分子多肽能特異性結(jié)合FGFR2，阻斷FGFRs信號(hào)通路，達(dá)到抗腫瘤的效果。因此，可用其制備抗腫瘤藥物。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于生物技術(shù)和醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種抗腫瘤小分子多肽及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
FGFRs(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體)在多種腫瘤組織中表達(dá)異常：FGFRs的突變和異常擴(kuò)增在婦科腫瘤特別是乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起了重要的作用。如在乳腺癌中發(fā)現(xiàn)了FGFR1和FGFR2的過(guò)度擴(kuò)增，在膀胱癌中發(fā)現(xiàn)FGFR3突變，在多發(fā)性骨髓瘤中發(fā)現(xiàn)FGFR3的易位，胰腺癌病人癌細(xì)胞中FGFR2表達(dá)量高的存活期明顯短于表達(dá)量低的病人，在胃癌、肺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌中均有FGFR2的基因突變、過(guò)表達(dá)或者表達(dá)異常；另外，在FGFR2在基因表達(dá)的剪切過(guò)程中由原來(lái)Ⅲb亞型轉(zhuǎn)變?yōu)棰骳亞型后，往往伴隨著腫瘤惡性化增加的表現(xiàn)形式，包括乳腺癌、前列腺癌、胃癌、食管癌、子宮內(nèi)膜癌等，而阻斷FGFRs磷酸化介導(dǎo)的信號(hào)通路可抑制腫瘤的生長(zhǎng)及腫瘤細(xì)胞的增殖等作用。目前，已有蛋白類藥物通過(guò)阻斷FGFRs信號(hào)通路達(dá)到治療腫瘤疾病的效果，如Cetuximab(西妥昔單抗)、panitumumab(帕尼單抗)等抗體。蛋白藥物可較好的阻斷FGFRs的信號(hào)傳遞，但是蛋白類藥物由于分子量較大，注射到人體一般會(huì)有免疫原性。因此，多肽類藥物具有分子量小，在人體內(nèi)不結(jié)存，無(wú)副作用，免疫原性小，活性好等優(yōu)點(diǎn)成為一個(gè)研究的熱點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種抗腫瘤小分子多肽。本專利技術(shù)的另一目的在于提供所述的抗腫瘤小分子多肽的應(yīng)用。本專利技術(shù)的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種抗腫瘤小分子多肽，氨基酸序列如下所示：LQLQAEER；所述的抗腫瘤小分子多肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；所述的腫瘤優(yōu)選為具有FGFRs表達(dá)生長(zhǎng)依賴性的腫瘤細(xì)胞和/或腫瘤組織，特別是具有FGFR2表達(dá)生長(zhǎng)依賴性的腫瘤細(xì)胞和/或腫瘤組織，比如目前有文獻(xiàn)報(bào)道和本專利技術(shù)實(shí)施例證實(shí)FGFR2生長(zhǎng)依賴的乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、食管癌和胃癌等。本專利技術(shù)相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：本專利技術(shù)提供的抗腫瘤小分子多肽能特異性結(jié)合FGFR2，阻斷FGFRs信號(hào)通路，達(dá)到抗腫瘤的效果。附圖說(shuō)明圖1是P5肽對(duì)MCF-7細(xì)胞作用的結(jié)果圖。圖2是P5肽對(duì)各細(xì)胞株的抑制效果圖，其中：圖A為P5肽對(duì)DU145細(xì)胞株的抑制效果圖，圖B為P5肽對(duì)SGC7901細(xì)胞株的抑制效果圖，圖C為P5肽對(duì)KYSE510細(xì)胞株的抑制效果圖，圖D為P5肽對(duì)KYSE30細(xì)胞株的抑制效果圖。圖3是FGF2上P5肽同源序列在FGFR2中結(jié)合位置的模擬結(jié)構(gòu)圖。圖4是P5及其衍生肽對(duì)DU145細(xì)胞的抑制作用結(jié)果圖；其中，圖A為P5DU145細(xì)胞的抑制作用結(jié)果圖，圖B為P5-1對(duì)DU145細(xì)胞的抑制作用結(jié)果圖，圖C為P5-2對(duì)DU145細(xì)胞的抑制作用結(jié)果圖，圖D為P5-3對(duì)DU145細(xì)胞的抑制作用結(jié)果圖。圖5是P5及突變多肽P5-3與FGFR2結(jié)合能力檢測(cè)結(jié)果圖；其中，圖Aa為用FGFR2抗體檢測(cè)FGFR2蛋白的結(jié)果圖，圖Ab為用10μg/ml生物素標(biāo)記的P5檢測(cè)FGFR2蛋白的結(jié)果圖，圖Ac為用10μM生物素標(biāo)記的檢測(cè)FGFR2蛋白的結(jié)果圖，泳道1為細(xì)胞裂解物，泳道2為FGFR2蛋白；圖B為ELISA法檢測(cè)P5肽及P5-3肽與FGFR2蛋白結(jié)合的結(jié)果圖。圖6是檢測(cè)加入P5后FGFR2相關(guān)信號(hào)因子變化的Western?Blot圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本專利技術(shù)作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本專利技術(shù)的實(shí)施方式不限于此。本專利技術(shù)首先采用生物信息學(xué)的方法，依照FGF2-FGFR2蛋白結(jié)合模式，以FGF2-FGFR2相互作用位點(diǎn)為基礎(chǔ)，采用Accerly公司的蛋白模擬軟件Discovery?Studio2.5/3.5對(duì)FGF2及其特異性結(jié)合受體FGFR2IIIc的結(jié)合進(jìn)行分析，設(shè)計(jì)小分子多肽，其中每條多肽中都含有FGF2上1至3個(gè)與FGFR2作用的關(guān)鍵氨基酸，并且要求多肽長(zhǎng)度是剛好落在FGFR2蛋白的活性口袋中，希望這幾條多肽(如表1所示)能阻斷FGF2與FGFR2的結(jié)合，從而發(fā)揮抗腫瘤的功能。其次，采用MTT法表達(dá)并依賴FGFR2生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞株進(jìn)行篩選，從候選的若干條短肽中發(fā)現(xiàn)其中一條P5肽能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了P5肽的抑瘤效果。進(jìn)一步的，本專利技術(shù)專利技術(shù)人對(duì)P5肽與FGFR2的特異性進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)P5肽能夠與FGFR2特異性結(jié)合，而突變了關(guān)鍵氨基酸的短肽則不能與FGFR2結(jié)合，而且也沒有觀察到這些突變短肽的抗腫瘤活性；同樣的，檢測(cè)與腫瘤生長(zhǎng)的信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)，P5肽能特異性地抑制FGFRs的磷酸化以及與增殖、生長(zhǎng)非常相關(guān)的ERK通路的活性。最后，本專利技術(shù)專利技術(shù)人進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)前列腺癌細(xì)胞成瘤裸鼠注射P5短肽，觀察到P5短肽能夠顯著抑制前列腺癌瘤體的生長(zhǎng)速度。本專利技術(shù)中的檢測(cè)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，可按常規(guī)手段操作，如Western?blot可參考《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》進(jìn)行操作。實(shí)施例1小分子多肽的設(shè)計(jì)合成與抗腫瘤效果的檢測(cè)(1)小分子多肽的設(shè)計(jì)本專利技術(shù)采用生物信息學(xué)的方法，依照FGF2-FGFR2蛋白結(jié)合模式，以FGF2-FGFR2相互作用位點(diǎn)為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)小分子多肽，F(xiàn)GF2上與FGFR2作用的關(guān)鍵位點(diǎn)主要為：Tyr-24，Phe-31，Gln-56，Vla-57，Glu-58，Tyr-73，Val-88，Phe-93，Asn-102，Asn-104，Leu-140，Met-142；FGFR2上與FGF2作用的關(guān)鍵位點(diǎn)為：Leu-166，Ala-168，Pro-170，Val-249，Arg-251，Asp-283，Val-317，Asn-318，Asp-321。采用Accerly公司的蛋白模擬軟件Discovery?Studio2.5/3.5對(duì)FGF2及其特異性結(jié)合受體FGFR2IIIc的結(jié)合進(jìn)行分析，從其中每條多肽中都含有FGF2上1至3個(gè)與FGFR2作用的關(guān)鍵氨基酸，并且要求多肽長(zhǎng)度是剛好落在FGFR2蛋白的活性口袋中，希望這幾條多肽能阻斷FGF2與FGFR2的結(jié)合，從而發(fā)揮抗腫瘤的功能。模擬出來(lái)的小分子多肽選擇最優(yōu)的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如表1所示，通過(guò)上海波泰生物科技有限公司合成。表1小分子多肽名稱氨基酸序列P1VERSPHR-NH2P2DPKPLWCKN-NH2P3SNNYNTRS-NH2P4CFFFERLES-NH2P5LQLQAEER-NH2...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種抗腫瘤小分子多肽，其特征在于氨基酸序列如下所示：LQLQAEER。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗腫瘤小分子多肽，其特征在于氨基酸序列如下所示：LQLQAEER。
2.權(quán)利要求1所述的抗腫瘤小分子多肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗腫瘤小分子多肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，
其特征在于：所述的腫瘤為具有FGFRs表達(dá)生長(zhǎng)依賴性的腫瘤細(xì)胞和/或腫瘤組
織。
4.根...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳小佳，洪岸，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：暨南大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：廣東;44