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    一種快速測定血清或血漿中甘膽酸含量的試劑盒制造技術(shù)

    技術(shù)編號:11057516 閱讀:116 留言:0更新日期:2015-02-18 20:38
    本發(fā)明專利技術(shù)涉及生物檢測領(lǐng)域,特別是涉及一種定量檢測甘膽酸(CG)的檢測試劑盒及其制備方法和用途。本發(fā)明專利技術(shù)提供一種定量檢測甘膽酸(CG)的檢測試劑盒,包括試紙卡,試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,所述金標(biāo)墊上包含甘膽酸(CG)抗體,所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線,所述金標(biāo)墊上的甘膽酸(CG)抗體采用熒光微球標(biāo)記。本發(fā)明專利技術(shù)所提供的定量檢測甘膽酸(CG)的檢測試劑盒首次將甘膽酸(CG)通過熒光微球免疫層析技術(shù)進(jìn)行檢測,兼具靈敏性和特異性,具有操作快速簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。

    【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
    一種快速測定血清或血漿中甘膽酸含量的試劑盒
    本專利技術(shù)涉及生物檢測領(lǐng)域,特別是涉及一種快速測定血清或血漿中甘膽酸含量的 試劑盒及其制備方法和用途。
    技術(shù)介紹
    甘膽酸(CholyglyCine,CG)是膽酸與甘氨酸結(jié)合而成的結(jié)合型膽酸,在肝細(xì)胞 內(nèi),膽固醇經(jīng)過及其復(fù)雜的酶促反應(yīng),轉(zhuǎn)變成初級膽汁酸。其中有膽酸(CA)和鵝去氧膽酸 (CD-CA)。膽酸的類固醇核上有三個(gè)羥基(C3、C7、C12),側(cè)鏈末端的羥基以肽鍵與甘氨酸結(jié) 合。 CG由肝細(xì)胞合成,正常代謝途徑為腸肝循環(huán),經(jīng)毛細(xì)膽管、膽管排入膽囊,隨同膽 汁進(jìn)入十二指腸,幫助食物消化。95%膽酸在回腸末端重吸收,經(jīng)門靜脈再回肝臟,由肝細(xì) 胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結(jié)合形式存在,溢入體循環(huán)的總量小于1%。在正常情 況下,外周血中膽酸含量甚微,正常成人無論空腹或餐后,其血清CG濃度穩(wěn)定在低水平。 當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí),肝細(xì)胞攝取CG能力下降,致使血中CG含量增高;膽汁郁滯時(shí),肝臟排泄膽 酸發(fā)生障礙,而返流血液循環(huán)的CG含量增高,也使血CG含量增高。測定血清甘膽酸(CG) 是評價(jià)肝細(xì)胞功能及其肝膽系物質(zhì)循環(huán)功能的敏感指標(biāo)之一。 臨床上急性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、原發(fā)性肝癌、肝硬化、慢遷肝、梗阻性肝病、 腸一肝循環(huán)障礙、膽石癥伴黃疸、膽管、膽囊排泄功能障礙患者血CG均明顯高于正常人。 甘膽酸同時(shí)也是妊娠晚期血清中最主要的膽汁酸組分。正常妊娠時(shí)孕婦血清CG 水平隨孕周逐步增高,大量雌激素會(huì)引起肝細(xì)胞膜的改變,減少竇狀膜漿的流動(dòng)性,從而出 現(xiàn)膽汁分泌減少,返流入血,出現(xiàn)妊娠期內(nèi)膽汁淤積現(xiàn)象,CG水平升高。胎盤絨毛靜脈腔 內(nèi)外均處于高濃度膽汁酸刺激之中,引起血管收縮,胎盤絨毛表面血管痙攣,氧合血流量減 少,導(dǎo)致胎兒缺氧,可出現(xiàn)各種并發(fā)癥,如胎兒宮內(nèi)窘迫、早產(chǎn)等。 目前已知的甘膽酸檢測方法有放射免疫法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、化學(xué) 發(fā)光法(CL)等。但這些方法均存在較多缺陷,如放射免疫法同位素試劑具有放射性污染及 有效期較短和操作不方便等弊端,酶聯(lián)免疫吸附法操作較為繁瑣,耗時(shí)較長,不適宜臨床上 使用?;瘜W(xué)發(fā)光法盡管靈敏度較高,但需要專用的測定設(shè)備,費(fèi)用較高不利于推廣。而膠乳 增強(qiáng)免疫比濁法操作簡便、可適用于全自動(dòng)生化分析儀,檢測時(shí)間不到10分鐘適合臨床推 廣。但目前我國市場上的甘膽酸檢測試劑盒準(zhǔn)確度、靈敏度、重復(fù)性仍然較差。
    技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
    鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn),本專利技術(shù)的目的在于提供一種快速測定血清或血漿 中甘膽酸(CG)含量的試劑盒,用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。 為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的,本專利技術(shù)提供一種快速測定血清或血漿中甘膽酸 (CG)含量的試劑盒,包括試紙卡,所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依 次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,所述金標(biāo)墊上包含CG單克隆抗體,所述 硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線,所述金標(biāo)墊上的CG單克隆抗體采用熒光微球標(biāo) 記。 優(yōu)選的,所述金標(biāo)墊上的CG單克隆抗體采用180nm熒光微球標(biāo)記,EX (nm) = 650/ Em (nm) = 670,具有信號受背景干擾小,檢測靈敏度高,結(jié)果重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 優(yōu)選的,所述底板為PVC底板。 優(yōu)選的,所述硝酸纖維素膜上,檢測線位于離加樣端較近一側(cè),質(zhì)控線位于離加樣 端較遠(yuǎn)一側(cè)。 優(yōu)選的,所述檢測線上包被有CG單克隆抗體。所述金標(biāo)墊上的CG單克隆抗體與 檢測線上的CG單克隆抗體可以是相同的抗體,也可以是不同的抗體。 優(yōu)選的,質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。 優(yōu)選的,所述樣品墊采用緩沖液處理,所述緩沖液選自PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖 液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合,緩沖液 的濃度為20-200mM。 優(yōu)選的,本專利技術(shù)所述的金標(biāo)墊還經(jīng)過預(yù)處理,預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液選 自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合,緩沖液的濃度為 5_50mM〇 優(yōu)選的,所述緩沖液還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑,所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一種,所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。 優(yōu)選的,所述緩沖溶液還包括表面活性劑,所述表面活性劑選自S-19 TWEEN 20、 S-20TWEEN 80、S-13 TRITON X-45、S-14 TRITON X-100、S-15 TRITON X305 中的任意一種 或多種的組合,所述表面活性劑的濃度為10?50g/L。 優(yōu)選的,為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果,本專利技術(shù)所述的金標(biāo)墊在 預(yù)處理時(shí)所使用的預(yù)處理緩沖液包括下列組分:水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉 和甘氨酸,且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L, 緩沖液的pH值為7. 2 - 7.6。 優(yōu)選的,各組分在緩沖液中的濃度為: 本文檔來自技高網(wǎng)
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    【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
    一種定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,包括試紙卡,試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,所述金標(biāo)墊上包含CG抗體,所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線,所述金標(biāo)墊上的CG抗體采用熒光微球標(biāo)記。

    【技術(shù)特征摘要】
    1. 一種定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,包括試紙卡,試紙卡包括底板、及位于底板 表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,所述金標(biāo)墊上包 含CG抗體,所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線,所述金標(biāo)墊上的CG抗體采用熒光 微球標(biāo)記。2. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,其特征在于,所述硝酸纖維 素膜上,檢測線位于離加樣端較近一側(cè),質(zhì)控線位于離加樣端較遠(yuǎn)一側(cè)。3. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,其特征在于,所述檢測線上 包被有CG抗體。4. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,其特征在于,質(zhì)控線上包被 羊抗鼠抗體。5. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,其特征在于,所述樣品墊采 用緩沖液處理,所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖 液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合,緩沖液的濃度為20-200mM。6. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甘膽酸CG的檢測試劑盒,其特征在于,所述金標(biāo)墊采 用緩沖液處理,所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tri s-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多 種的組合,緩沖液的濃度為5-50mM。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的定量檢測甘...

    【專利技術(shù)屬性】
    技術(shù)研發(fā)人員:陳亨宇,
    申請(專利權(quán))人:重慶乾德生物技術(shù)有限公司
    類型:發(fā)明
    國別省市:重慶;85

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