一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒技術

本發明專利技術屬于免疫學技術領域，公開了一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。本發明專利技術提供的淋巴細胞免疫分型的方法，包括：T淋巴細胞免疫分型和B淋巴細胞免疫分型；T淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢測數據，分析所述檢測數據；B淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢測數據，分析所述檢測數據。本發明專利技術的方法實現了對淋巴細胞進行更加全面的精細免疫分型，所需待測樣品少，操作簡單、所需時間短、準確性高、可廣泛應用于淋巴細胞亞群免疫分型。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術屬于免疫學
，公開了一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。本專利技術提供的淋巴細胞免疫分型的方法，包括：T淋巴細胞免疫分型和B淋巴細胞免疫分型；T淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢測數據，分析所述檢測數據；B淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢測數據，分析所述檢測數據。本專利技術的方法實現了對淋巴細胞進行更加全面的精細免疫分型，所需待測樣品少，操作簡單、所需時間短、準確性高、可廣泛應用于淋巴細胞亞群免疫分型。【專利說明】一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒
本專利技術屬于免疫學
，特別涉及一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。
技術介紹
淋巴細胞（lymphocyte)也稱淋巴球，為白細胞中體積最小的一種，直徑6-8微米； 在人體約占白細胞數目的20% -30%，圓形細胞核，細胞質很少；由淋巴器官產生，是機體 免疫應答功能的重要細胞成分，是一類具有免疫識別功能的細胞系。淋巴細胞是復雜的異 質性細胞群體，根據其表型和功能特征可分為不同類別，如T細胞、B細胞、NK細胞等，這些 細胞還可以進一步分為若干亞群。淋巴細胞及其亞群在免疫應答過程中相互協作、相互制 約，共同完成對抗原物質的識別、應答和清除，從而維持機體內環境穩定。 早期研究根據淋巴細胞按其發生遷移、表面分子和功能的不同，大體上將淋巴細 胞分為T細胞、B細胞和自然殺傷（NK)細胞。其中T細胞可分為細胞毒性T細胞（cytotoxic T lymphocyte，Tc)、輔助 T 細胞（helper T lymphocyte，Th)、記憶 T 細胞（memory T lymphocyte，Tm)和調節 / 抑制 T 細胞（regulatory/suppressor T lymphocyte) ;B 細胞 可進一步分為記憶B細胞（memory B cell)、楽細胞（plasma cell)、初始B細胞（nalfve B cell)等亞類。 隨著科學研究的不斷進步，科學家發現了更多的細胞表面標志，可以將各類淋巴 細胞進行更加精細的細胞亞群分類。例如，可以將T細胞進一步劃分為：TCRa ￠ +雙陰性T 細胞（double negative T lymphocyte，DNT)、Y ST細胞、輔助初始T細胞、輔助耗竭T細 胞、輔助中心記憶T細胞、輔助效應記憶T細胞、細胞毒性初始T細胞、細胞毒性耗竭T細胞、 細胞毒性中心記憶T細胞、細胞毒性效應記憶T細胞。 血液樣品中淋巴細胞的種類與機體的免疫系統性能有著重要關系。通過對血液樣 品中淋巴細胞進行免疫分型和定量分析，能夠更加準確地評價機體的免疫功能，也能夠更 好地研究某些疾病的發生、發展以及治療效果評價。目前，常用于血液樣品中的淋巴細胞 免疫分型和定量分析的方法主要有：免疫酶標法、普通淋巴細胞分類、較細淋巴細胞亞群檢 測。免疫酶標法只是針對某一種或一類特定的抗原或抗體發生特異反應，檢測面窄、操作復 雜、對待檢測樣品需求量大，費時費力。普通淋巴細胞分類，普遍應用于淋巴細胞檢測，但只 能將淋巴細胞分為T細胞、Tc細胞、Th細胞、B細胞和NK細胞，不能進一步對細胞進行分 型。較細淋巴細胞亞群檢測依賴于流式細胞術，采用多色流式的方法，對淋巴細胞進行較為 詳細的分型，除傳統的T細胞、Tc細胞、Th細胞、B細胞和NK細胞外，還檢測Tm細胞及細胞 數量。但是，如果想進一步對細胞亞群進行免疫分型和定量分析的話，還需要借助于其他的 細胞免疫分型方法，操作復雜，對待測樣品的需求量大，并不適合實際應用。所以，還需要對 淋巴細胞免疫分型和定量分析的方法進行研究，以求盡可能利用簡單的方法將淋巴細胞進 行較精細地免疫分型和定量分析。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的專利技術目的在于提供一種淋巴細胞免疫分型的方法和試劑盒。 該淋巴細胞免疫分型的方法能夠對淋巴細胞進行更為全面的精細免疫分型和定量分析，效 率高，且節約了待測樣品的用量，更合適淋巴細胞的免疫分型和定量分析。 為了實現本專利技術的專利技術目的，本專利技術采用如下的技術方案： 本專利技術提供了一種用于淋巴細胞免疫分型的方法，包括T淋巴細胞免疫分型和B 淋巴細胞免疫分型； 該T淋巴細胞免疫分型包括： 取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢 測數據，分析所述檢測數據； 該B淋巴細胞免疫分型包括： 取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢 測，得檢測數據，分析所述檢測數據； 該T淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括： 抗TCR a P的抗體、抗TCR Y S的抗體、抗⑶3的抗體、抗⑶4的抗體、抗⑶8的抗 體、抗⑶27的抗體和抗⑶45RA抗體； 該B淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括： 抗⑶19的抗體、抗IgD的抗體、抗⑶38的抗體、抗⑶24的抗體和抗⑶27的抗體； 該T淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括： 細胞表面標志⑶3+TCR a @ +⑶4XD丨代表TCR a @ +雙陰性T細胞； 細胞表面標志⑶3+TCR Y S +代表Y S T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27+代表輔助初始T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27_代表輔助耗竭T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27+代表輔助中心記憶T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27_代表輔助效應記憶T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27+代表細胞毒性初始T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27_代表細胞毒性耗竭T細胞； 細胞表面標志⑶8+⑶45RATD27+代表細胞毒性中心記憶T細胞； 細胞表面標志⑶3+⑶8+⑶45RAXD27_代表細胞毒性效應記憶T細胞； 該B淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括： 細胞表面標志⑶19+D27+代表記憶B細胞； 細胞表面標志⑶19+D27_IgD+代表初始B細胞； 細胞表面標志⑶19+⑶24++CD38++代表過渡B細胞； 細胞表面標志⑶19+⑶24TD38++代表漿母細胞。 在本專利技術中，流式細胞術中所用到的抗體可以為與待測樣品同源的抗體或也可以 為與待測樣品非同源的抗體，只要該抗體能夠與待測樣品中細胞表面標志物產生抗原-抗 體特異性結合反應即可。 在本專利技術中，" + "代表陽性，即表示該抗原在細胞表面有表達； "++"代表強陽性，即表示該抗原在細胞表面高表達； 代表陰性，即表示該抗原在細胞表面不表達。 淋巴細胞的表面標志是指存在于淋巴細胞表面的膜分子，它們是淋巴細胞識別 抗原、與其他免疫細胞相互作用以及接受信號刺激并產生應答的物質基礎，也是鑒別和分 離淋巴細胞的重要依據。在淋巴細胞的分化發育過程中，淋巴樣干細胞進一步分化成各 個細胞亞群，賦予了各個細胞亞群特定的表面標志。有些表面標志是淋巴細胞共有的，有 些表面標志是某一類或某幾類淋巴細胞特有的，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于淋巴細胞免疫分型的方法，其特征在于，包括T淋巴細胞免疫分型和B淋巴細胞免疫分型；所述T淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢測數據，分析所述檢測數據；所述B淋巴細胞免疫分型包括：取不同的熒光標記的抗體，與新的所述待檢測樣品混合，孵育后，經流式細胞術檢測，得檢測數據，分析所述檢測數據；所述T淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括：抗TCRαβ的抗體、抗TCRγδ的抗體、抗CD3的抗體、抗CD4的抗體、抗CD8的抗體、抗CD27的抗體和抗CD45RA抗體；所述B淋巴細胞免疫分型時，所用的抗體包括：抗CD19的抗體、抗IgD的抗體、抗CD38的抗體、抗CD24的抗體和抗CD27的抗體；所述T淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括：細胞表面標志CD3+TCRαβ+CD4?CD8?代表TCRαβ+雙陰性T細胞；細胞表面標志CD3+TCRγδ+代表γδT細胞；細胞表面標志CD3+CD4+CD45RA+CD27+代表輔助初始T細胞；細胞表面標志CD3+CD4+CD45RA+CD27?代表輔助耗竭T細胞；細胞表面標志CD3+CD4+CD45RA?CD27+代表輔助中心記憶T細胞；細胞表面標志CD3+CD4+CD45RA?CD27?代表輔助效應記憶T細胞；細胞表面標志CD3+CD8+CD45RA+CD27+代表細胞毒性初始T細胞；細胞表面標志CD3+CD8+CD45RA+CD27?代表細胞毒性耗竭T細胞；細胞表面標志CD8+CD45RA?CD27+代表細胞毒性中心記憶T細胞；細胞表面標志CD3+CD8+CD45RA?CD27?代表細胞毒性效應記憶T細胞；所述B淋巴細胞免疫分型時，所述分析的方法包括：細胞表面標志CD19+D27+代表記憶B細胞；細胞表面標志CD19+D27?IgD+代表初始B細胞；細胞表面標志CD19+CD24++CD38++代表過渡B細胞；細胞表面標志CD19+CD24?CD38++代表漿母細胞。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙曉東，周麗娜，
申請(專利權)人：重慶醫科大學附屬兒童醫院，
類型：發明
國別省市：重慶;85