丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法及其應用技術

本發明專利技術公開了一種丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法及其應用，所述含量測定方法是以丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對照品為對照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90為流動相梯度洗脫的超高效液相色譜法。本發明專利技術提供的丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法，能夠同時測定丹參藥材中多種水溶性成分的含量，并可應用于丹參藥材指紋圖譜的檢測中。該測定方法對丹參藥材中水溶性成分的分離效果好，具有快速、準確、高重現性、高回收率的特點，而且其專屬性強、精密度高、重復性好、穩定性高、測量結果準確。應用該方法所測得指紋圖譜的峰多，反映的信息較完全；峰形好，易于鑒別，相似度高，準確可靠。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及丹參藥材中水溶性成分含量測定方法及其應用，屬于中藥檢測

技術介紹
丹參(拉丁學名：Salvia?miltiorrhiza?Bunge)又名赤參，紫丹參，紅根等。根入藥，含丹參酮，為強壯性通經劑，有祛瘀、生新、活血、調經等效用，為婦科要藥，主治子宮出血，月經不調，血瘀，腹痛，經痛，經閉，廟痛。對治療冠心病有良好效果。此外亦治神經性衰弱失眠，關節痛，貧血，乳腺炎，淋巴腺炎，關節炎，瘡癤痛腫，丹毒，急慢性肝炎，腎孟腎炎，跌打損傷，晚期血吸蟲病肝脾腫大，癲癎。外用又可洗漆瘡。丹參的主要化學成分分為脂溶性和水溶性兩大類：丹參的脂溶性成分大多為共軛醌、酮類化合物，丹參的水溶性成分主要為酚酸類物質。丹參的主要藥理作用為可降低沙土鼠和大鼠缺血性腦卒中的發病率和死亡率，減輕缺血后引起的腦水腫，改善冠脈循環，對心肌缺血和心肌梗死保護，改善微循環，改善血液流變性，抑制凝血、激活纖溶，抑制血小板功能和抗血栓形成，穩定紅細胞膜，抗肝纖維化，降血脂和抗動脈粥樣硬化，促進組織的修復與再生作用等。丹參品種、產地和采收期的不同會造成其成品質量的差異。為保證產品質量的穩定性，對其水溶性成分的含量測定及指紋圖譜研究較多。《丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜研究》(周欣等，色譜，2005年03期，292～295)中公開了一種丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜的檢測方法。現有技術中，丹參藥材中水溶性成分含量測定及指紋圖譜檢測中，一般只測定其中一至兩種成分的含量。為了減少分開多次測定丹參藥材不同水溶性成分含量而產生的誤差，如果能一次性測定多種成分的含量，不僅可以節約時間和成本，還可以使得同一系統條件下的測試結果更穩定、可靠。然而目前尚未有同時測定和檢測丹參多種組分的含量以及指紋圖譜的相關報道。
技術實現思路
為解決現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法及其應用，能夠同時測定丹參藥材中多種水溶性成分的含量，并檢測其指紋圖譜，所述測定方法對丹參藥材中水溶性成分的分離效果好，具有快速、準確、高重現性、高回收率的特點。為了實現上述目標，本專利技術采用如下的技術方案：丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法，所述方法是以丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對照品為對照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90為流動相梯度洗脫的超高效液相色譜法。具體的含量測定方法為：照超高效液相色譜法，按照以下步驟測定：(1)色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.026％磷酸水溶液為流動相A，乙腈為流動相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脫：0～5min：A∶B＝85～75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；檢測波長為276～306nm；流速為0.1～0.5mL·min-1；柱溫為25℃～35℃；理論板數按按丹酚酸B峰計算應不低于2000；(2)對照品溶液的制備：取丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對照品適量，精密稱定，分別加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五種對照品儲備液，分別吸取各對照品儲備液，加5％甲醇配制成丹參素對照品濃度為82.2μg/mL、原兒茶醛對照品濃度為15.5μg/mL、迷迭香酸對照品濃度為37.2μg/mL、丹酚酸B對照品濃度為522.5μg/mL、丹酚酸A對照品濃度為32.2μg/mL的混合溶液，于4℃冷藏備用，作為對照品溶液；(3)供試品溶液的制備：取丹參藥材粉末0.2g，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，加入40mL?5％甲醇，超聲提取30min，用5％甲醇補足重量；濾過，取續濾液，即得；(4)測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μL，注入超高效液相色譜儀，測定，即得。前述含量測定方法中，步驟(1)中檢測波長為286nm，流速為0.2mL·min-1，柱溫為30℃。丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法在丹參藥材指紋圖譜檢測中的應用。前述含量測定方法的應用，是用指紋圖譜軟件對含量測定方法中得到的17分鐘內的色譜圖進行處理，即得丹參藥材水溶性成分的指紋圖譜。前述含量測定方法的應用中，所述丹參藥材水溶性成分的指紋圖譜中有17個共有峰。雖然丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A均屬于丹參藥材中水溶性成分，但其各有區別，適宜的含量測定條件往往并不相同，要同時測定它們的含量，必須對UPLC的各項條件參數進行摸索、試驗。為了能將丹參藥材中水溶性成分有效分離開來，對色譜條件尤其是流動相種類、流動相比例以及梯度洗脫條件的摸索、確定是非常關鍵的。本專利技術在現有技術的基礎之上，繼續探索，通過對流動相種類、流動相比例、梯度洗脫條件、對照品及供試品的制備方法等進行摸索、篩選，最終建立了丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法。一、主要儀器與試藥美國WATERS超高效液相色譜(UPLC)Acquity系統，包括自動進樣器，四元溶劑管理器，PDA檢測器以及Empower?3色譜工作站，WATERS?ACQUITY?UPLC?BEH?C18色譜柱(2.1×100mm,1.7μm)乙腈為色譜純，美國Fisher公司；其他試劑為分析純，購買于國藥集團。丹酚酸B、丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸及丹酚酸A均為HPLC級，純度≥98％。丹參藥材共13批，其中：1～3批藥材(S1、S2、S3藥材)來源于四川逢春制藥股份有限公司(道地藥材)、4～13批藥材(S4～S13藥材)來源于貴州信邦中藥材發展有限公司。二、含量測定的方法與結果1、色譜條件的選擇1.1柱溫的選擇為尋找最佳柱溫，采用不同柱溫進行實驗，觀察結果，結果見表1。表1?柱溫實驗表柱溫(℃)2025303540觀察結果分離度差分離度較好分離度良好分離度較好溶劑粘度大由表1可知，在25～35℃分離度良好，因而選擇25～35℃作為柱溫均可。其中柱溫30℃時，分離效果最好。1.2流速的選擇為尋找最佳流速范圍，采用不同流速進行實驗，記錄色譜峰，結果見表2。表2?色譜峰記錄表由表3可知，設置流速為0.1～0.5mL/min，各峰間的分辨率良好，色譜時間短，峰面積適中，效果最好。1.3流動相選擇本文檔來自技高網...

【技術保護點】
丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法，其特征在于：所述方法是以丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對照品為對照，以0.026％磷酸水溶液?乙腈＝85～10∶15～90為流動相梯度洗脫的超高效液相色譜法。

【技術特征摘要】
1.丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法，其特征在于：所述方法是以丹參素、原兒茶醛、
迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對照品為對照，以0.026％磷酸水溶液-乙腈＝85～10∶15～90
為流動相梯度洗脫的超高效液相色譜法。
2.根據權利要求1所述的丹參藥材中水溶性成分的含量測定方法，其特征在于：按照以下步
驟測定：
(1)色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.026％磷酸水溶
液為流動相A，乙腈為流動相B，A∶B＝85～10∶15～90，梯度洗脫：0～5min：A∶B＝85～
75∶15～25，5～8min：A∶B＝75～70∶25～30，8～12min：A∶B＝70～50∶30～50，12～
12.01min：A∶B＝50～10∶50～90，12.01～17min：A∶B＝10∶90；檢測波長為276～306nm；
流速為0.1～0.5mL·min-1；柱溫為25℃～35℃；理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于2000；
(2)對照品溶液的制備：取丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A對照品適
量，精密稱定，分別加入5％甲醇溶解，制成1mg/mL的五種對照品儲備液，分別吸取各對照
品儲備液，加5％甲醇配制成丹參素對照品濃度為82.2μg\...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張觀福，
申請(專利權)人：貴州信邦制藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：貴州;52