本發明專利技術屬于多肽功能研究技術領域，具體公開了一種能促進羅非魚生長激素表達的多肽PP3及其應用，多肽PP3的氨基酸序列為HYINLITR。采用該多肽PP3的溶解液腹腔注射羅非魚，結果顯示PP3能夠顯著促進羅非魚腦垂體中生長激素的表達水平，具有生理活性。利用本發明專利技術的多肽PP3可以制備用以提高垂體GHmRNA表達的口服制劑或制備魚苗苗種促生長劑或添加劑。
【技術實現步驟摘要】
一種能促進羅非魚生長激素表達的多肽PP3及其應用
本專利技術屬于多肽功能研究
，具體涉及一種能促進羅非魚生長激素表達的多肽PP3及其應用，所述應用具體為多肽在促進羅非魚幼魚生長中的應用。
技術介紹
羅非魚俗稱福壽魚，屬麗魚科(Cichlidae),羅非魚屬(Oreochromis)。羅非魚具有食性雜、耐低氧、繁殖力強等特點，目前已成為世界水產業重要的養殖魚類，被譽為未來動物性蛋白質的主要來源之一。 羅非魚在國際市場的需求量不斷增加，在全球魚類貿易中，羅非魚占第3位，僅次于鮭魚和鱒魚，具有極高的經濟價值。隨著養殖和出口規模的不斷擴大，對餌料配置的要求也不斷提高，由于飼料成本不斷增加，研究趨向于以植物蛋白代替魚粉來減少成本。但是魚類攝入植物蛋白飼料，會出現攝食量減少、體重減輕的現象。因此，近年來在羅非魚產業界的一個重要研究課題就是，如何采用分子生物學手段，深入研究羅非魚攝食、消化與營養吸收和生長的調控機制，根據研究的結果，研究開發生物功能性產品如多肽等，并進一步作為飼料添加劑產品應用于羅非魚養殖。這種產品對于促進羅非魚攝食，提高消化吸收效率，增強魚肉品質，調節生長速率，從而取得更大的經濟效益有著重要的意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是為了解決投喂羅非魚植物蛋白飼料時，會出現攝食量減少、體重減輕的問題，提供一種能促進羅非魚生長激素表達，從而促進羅非魚生長的多肽。 本專利技術的另一個目的是提供一種生物活性多肽產品在羅非魚養殖中的應用。 為了實現上述目的，本專利技術是通過以下方案予以實現的:本專利技術通過分析羅非魚消化系統中消化產物組分，對其中重要的多肽片段組分的生理功能進行研究，首次發現了一種可以促進羅非魚生長激素表達的多肽PP3，該多肽的氨基酸序列為HYINLITR。 通過生物合成的方法可以制備大量的多肽產品，將多肽作為羅非魚魚苗的飼料添加劑去喂養羅非魚，從而研究多肽PP3的生物學功能，結果發現:多肽PP3可以顯著促進羅非魚生長激素表達，從而促進羅非魚的生長。 因此，本專利技術要求保護多肽PP3在制備提高羅非魚垂體GH mRNA表達制劑中的應用，以及多肽PP3在制備魚苗苗種促生長劑或添加劑中的應用。 與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果:本專利技術通過分析羅非魚消化系統中消化產物組分，對其中重要的多肽片段組分的生理功能進行研究，首次發現了一種可以促進羅非魚生長激素表達的多肽PP3，將該多肽作為羅非魚幼苗的飼料添加劑，可以顯著促進羅非魚的生長，在羅非魚的養殖中具有很好的應用前景。 【附圖說明】圖1是羅非魚神消化道酶解產物的總離子流圖。 圖2是酶解片段PP3的質譜圖。 圖3是腹腔注射陽性對照蛋白后2h三種劑量對羅非魚垂體GH mRNA表達的影響；其中表示與對照組相比有顯著性差異，P < 0.05 ;NC代表陰性對照；P_L代表陽性對照蛋白低劑量組；P-M代表陽性對照蛋白中劑量組；P-H代表陽性對照蛋白高劑量組。 圖4是腹腔注射陽性對照蛋白后6h三種劑量對羅非魚垂體GH mRNA表達的影響；其中表示與對照組相比有顯著性差異，P < 0.05 ;NC代表陰性對照；P_L代表陽性對照蛋白低劑量組；P-M代表陽性對照蛋白中劑量組；P-H代表陽性對照蛋白高劑量組。 圖5是腹腔注射酶解片段PP3后2h三種劑量對羅非魚垂體GH mRNA表達的影響；其中表示與對照組相比有顯著性差異，P < 0.05 ；NC代表陰性對照；Y4-L代表PP3多肽低劑量組；Y4-M代表PP3多肽中劑量組；Y4-H代表PP3多肽高劑量組。 圖6是腹腔注射酶解片段PP3后6h三種劑量對羅非魚垂體GH mRNA表達的影響；其中表示與對照組相比有顯著性差異，P < 0.05 ；NC代表陰性對照；Y4-L代表PP3多肽低劑量組；Y4-M代表PP3多肽中劑量組；Y4-H代表PP3多肽高劑量組。 圖7是腹腔注射陽性對照蛋白后2h三種劑量對羅非魚垂體GH mRNA表達的影響；其中表示與對照組相比有顯著性差異，P < 0.05 ;NC代表陰性對照；P_L代表陽性對照蛋白低劑量組；P-M代表陽性對照蛋白中劑量組；P-H代表陽性對照蛋白高劑量組。 圖8是腹腔注射多肽PP3后a三種劑量對羅非魚垂體GH mRNA表達的影響；其中表示與對照組相比有顯著性差異，P < 0.05 ；NC代表陰性對照；Y4-L代表PP3多肽低劑量組；Y4-M代表PP3多肽中劑量組；Y4-H代表PP3多肽高劑量組。 【具體實施方式】 下面結合說明書附圖和具體實施例來進一步說明本專利技術，但實施例并不對本專利技術的保護范圍做任何形式的限定。除非特別說明，實施例中采用的試劑、方法和設備均為本
常規試劑、方法和設備。 除非特別說明，以下實施例所用飼料、試劑和材料均為市購。 實施例1:羅非魚消化道酶解產物的分析選擇體重50 ±2克體重均一的羅非魚分組進行投喂商品化配合飼料，適應期為7天，每天9:00飽食投喂，第4天進行提取樣品。投喂后分1.0、1.5、3.0、6.0、9.0、12.0、24.0小時6個時段，每個時段兩條魚，所有的樣品均將兩條魚的量混合在一起。每個時段先用注射器從魚的尾靜脈抽血，將血液全部抽提，注入按1/10用PBS溶解的3.8%(w / v)檸檬酸三鈉中。然后解剖羅非魚，取胃腸道，用生理鹽水沖洗，羅非魚胃分為賁門、幽門盲囊和幽門，腸道分為十二指腸(胃的幽門部到腸道螺旋部分)、前腸(腸道螺旋部分)，前腸每10厘米(依具體情況而定)為一段，后腸(螺旋末端到示瓣收縮區)，按段用繩子扎緊各個部分，用剪刀剪開一個小口獲取各個部分的消化液。將消化液注入有一定結合緩沖液(0.5M NaCl, 20mMTriS-Hcl，5mM咪唑，pH 7.9)的離心管中，立即插冰上。消化液取完之后渦旋混勻，每個時段樣品保存待處理。 消化液蛋白處理方法:預實驗:消化液離心(轉速2000rpm),看沉淀量，加大結合緩沖液的量，渦旋，靜置10分鐘，2000rpm離心，直到沉淀量不再減少為止(保證蛋白基本溶解)，摸索溶解消化液的結合緩沖液量。正式實驗:取樣時用結合緩沖液溶解蛋白，第二天12000g、10 min、4°C離心得上清。樣品保存于_20度。高效液相色譜質譜檢測羅非魚消化道酶解樣品。檢測通過先將樣品進行液相分離，然后對分離的樣品進行質譜檢測，結果如圖1，在10.96min時檢測到酶解片段PP3，酶解片段PP3進行質譜檢測確定氨基酸序列為HYINLITR。 實施例2:羅非魚酶解片段PP3的功能研究-腹腔注射羅非魚幼魚根據質譜檢測所獲得的序列通過化學合成，制備了多肽PP3。用PBS緩沖液溶解PP3和陽性對照蛋白(NPY即神經肽Y)，對羅非魚幼魚進行腹腔注射。實驗分為陰性對照組(PBS緩沖液)，PP3和陽性對照蛋白高劑量組(0.24nmol/gbw),PP3和陽性對照蛋白中劑量組(0.12nmol/gbw)以及PP3和陽性對照蛋白低劑量組(0.024nmol/gbw),每組10尾魚。在注射后分別在2h、6h將魚用丁香酚麻醉，取垂體組織于液氮中，然后再轉入_80°C冰箱保存待用。按照invitrogen公司的T本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種人工合成多肽PP3，其特征在于，所述多肽PP3的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
【技術特征摘要】
1.一種人工合成多肽PP3，其特征在于，所述多肽PP3的氨基酸序列如SEQ ID N0:1所/Jn ο2.權利要求1所述多肽...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李文笙，吳阿敏，
申請(專利權)人：中山大學，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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