一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗及其制備方法技術

一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗及其制備方法。所述疫苗中蛋白為乙肝表面抗原，細菌多糖選自b型流感嗜血桿菌多糖，A群、C群、Y群、W135群腦膜炎球菌多糖，傷寒沙門氏菌Vi型多糖，B群鏈球菌Ia型等，肺炎球菌血清型1、2型等，副傷寒沙門菌甲型或副傷寒沙門菌乙型中的任意一種或幾種。動物實驗表明，其疫苗中細菌多糖及乙肝表面抗原的抗體陽轉率均在85％以上，抗體陽轉率較高，其載體蛋白不僅起到了將細菌多糖由非T細胞依賴性抗原轉化為T細胞依賴性抗原的作用，同時起到了對乙肝病毒引起疾病的預防，解決了2歲以下嬰幼兒的免疫接種問題，又達到一針多免的效果，擴大了疫苗的使用人群和覆蓋率。

【技術實現步驟摘要】
一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫 苗及其制備方法
本專利技術涉及人用疫苗
，具體涉及用以乙肝表面抗原為載體蛋白制備的細 菌多糖蛋白結合物制成的單價或多價疫苗制品及其制備方法。
技術介紹
細菌多糖是細菌的主要毒力因子之一，具有較好的免疫原性，可誘發機體產生有 效的保護性抗體。但細菌多糖屬于非T細胞依賴性抗原，對免疫系統機能發育不完善的2 歲以下的嬰幼兒，不能誘導有效的保護性抗體，且不能產生免疫記憶。而將細菌多糖抗原與 載體蛋白共價結合后，可將細菌多糖由非T細胞依賴性抗原轉化為T細胞依賴性抗原，使細 菌多糖也能對2歲以下的嬰幼兒產生有效的抗體保護，從而也擴大了疫苗的使用人群。但 目前國內外上市銷售的細菌多糖蛋白結合疫苗，僅用于預防細菌多糖抗原引起的疾病，而 載體蛋白只起到將細菌多糖由非T細胞依賴性抗原轉化為T細胞依賴性抗原的作用。 鑒于此， 申請人:專利技術了一種用以乙肝表面抗原為蛋白載體制備的細菌性多糖蛋白 結合物制成的疫苗，其中的乙肝表面抗原不僅起到了將細菌多糖結合疫苗由非T細胞依賴 性抗原轉化為T細胞依賴性抗原的作用；而且起到了有效預防載體蛋白（乙肝表面抗原） 引起的疾病。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是克服現有技術存在疫苗中載體蛋白僅起到將細菌多 糖由非T細胞依賴性抗原轉化為T細胞依賴性抗原的作用的缺陷。 為解決上述技術問題，本專利技術提供了一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖 蛋白結合物疫苗及其制備方法，該疫苗使用后，既能產生針對細菌多糖的抗原的特異性抗 體，又能產生針對乙肝表面抗原的特異性抗體，克服了疫苗中載體蛋白僅起到將細菌多糖 由非T細胞依賴性抗原轉化為T細胞依賴性抗原的作用的缺陷，達到一針多免的效果。 本專利技術的技術方案如下： 1. -種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗，其特征在于：所 述疫苗中含有的蛋白為乙肝表面抗原，所述疫苗中含有的細菌多糖選自b型流感嗜血桿菌 多糖，奈瑟氏腦膜炎球菌血清群A群、C群、Y群、W135群多糖，傷寒沙門氏菌Vi型多糖，B群 鏈球菌la、lb、II、III、V型，肺炎球菌血清型 1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、 15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F，副傷寒沙門菌甲型或副傷寒沙門菌乙型中的任意 一種或幾種。 2.根據技術方案1所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫 苗，其特征在于：各細菌多糖分別以共價鍵與乙肝表面抗原相連接成細菌多糖蛋白結合物。 3.根據技術方案2所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫 苗，其特征在于：所述的細菌多糖蛋白結合物中總的細菌多糖與乙肝表面抗原的質量比為 1:0. 1 ?1:5。 4.根據技術方案1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結 合物疫苗，其特征在于：所述的乙肝病毒表面抗原為天然乙肝病毒表面抗原或重組乙肝表 面抗原。 5.根據技術方案1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結 合物疫苗，其特征在于：所述的疫苗為液體制劑、固體顆粒劑、半固體劑或液體制劑與固體 顆粒劑組合的組合劑。 6.根據技術方案4所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫 苗，其特征在于：所述的疫苗為液體制劑、固體顆粒劑、半固體劑或液體制劑與固體顆粒劑 組合的組合劑。 7.根據技術方案1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結 合物疫苗，其特征在于：所述的疫苗為注射劑、鼻用制劑、凝膠劑或控釋膠囊劑。 8.根據技術方案4所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫 苗，其特征在于：所述的疫苗為注射劑、鼻用制劑、凝膠劑或控釋膠囊劑。 9.根據技術方案1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結 合物疫苗，其特征在于：所述的疫苗中還含有鋁佐劑或一種含有胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸的 脫氧核糖核酸片段。 10.根據技術方案4所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫 苗，其特征在于：所述的疫苗中還含有鋁佐劑或一種含有胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸的脫氧核 糖核酸片段。 11. -種用乙肝表面抗原為載體蛋白的單價細菌多糖蛋白結合物疫苗的制備方 法，包括以下步驟： (1)細菌多糖溶解 將一種細菌多糖用0. 2mol/L的NaCl溶解為1?20mg/ml的濃度；所述的一種細 菌多糖為b型流感嗜血桿菌多糖，奈瑟氏腦膜炎球菌血清群A群、C群、Y群、W135群多糖， 傷寒沙門氏菌￥1型多糖，8群鏈球菌1&、113、11、111、￥型，肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6八、 6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F，副傷寒沙門菌甲型 或副傷寒沙門菌乙型中的任意一種； (2)細菌多糖活化 在步驟（1)溶解的細菌多糖溶液中加入多糖活化劑得活化的細菌多糖，加入的多 糖活化劑的質量：細菌多糖質量比為〇. 1 :1?1. 5:1，所述的多糖活化劑為溴化氰、1-氰 基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯、碳二亞胺、3-(2-吡啶基二硫基）丙酸、N-羥基琥珀酰亞 胺酯中的任意一種； (3)細菌多糖衍生 在步驟（2)所得的活化的細菌多糖中按活化的細菌多糖：雙功能鏈接劑的質量比 為1:2?1:5的比列加入雙功能鏈接劑進行細菌多糖的衍生得細菌多糖衍生物，所述的雙 功能鏈接劑為己二酰肼、聚乙二醇、己二胺或己二醇中的任意一種； (4)細菌多糖衍生物的超濾 將步驟（3)得到的細菌多糖衍生物經1?30KD的超濾膜超濾凍干得細菌多糖衍 生物； (5)細菌多糖與蛋白結合 用0. 2mol/L的NaCl將步驟（4)得到的細菌多糖衍生物溶解至細菌多糖衍生物 的濃度為2?20mg/ml后；按細菌多糖衍生物：乙肝表面抗原的質量比為1:0. 4?1:2的 比例加入載體蛋白中，然后加入碳二亞胺至碳二亞胺濃度為0. 001?0. 2mol/L，維持pH為 5. 5±0. 5,反應2?4小時，得一種細菌多糖衍生物與載體蛋白共價結合物； (6)將步驟（5)所得一種細菌多糖衍生物與載體蛋白共價結合物用凝膠柱進行純 化，收集％ (無法進入凝膠過濾柱料的分子的洗脫體積）附近的吸收峰，除菌過濾即得純化 后的單價細菌多糖蛋白結合物原液； (7)制備疫苗液體制劑 在步驟（6)所得的純化后的單價細菌多糖蛋白結合物原液中加入注射用水、氯化 鈉、磷酸鹽緩液和鋁佐劑，使細菌多糖的濃度為g/ml?60iig/ml、氯化鈉濃度為4? 9mg/ml、磷酸氫二鈉濃度為38?72yg/ml、磷酸二氫鈉濃度為24?88yg/ml，所述錯佐劑 為氫氧化錯或磷酸錯，使氫氧化錯濃度為〇. 5?2. 5mg/ml,或磷酸錯濃度為0. 5?2.Omg/ ml，即制成用乙肝表面抗原為載體蛋白的單價細菌多糖蛋白結合物疫苗液體制劑； 或（8)制備疫苗固體顆粒劑 在步驟（6)所得的純化后的單價細菌多糖蛋白結合物原液中加入注射用水本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗，其特征在于：所述疫苗中含有的蛋白為乙肝表面抗原，所述疫苗中含有的細菌多糖選自b型流感嗜血桿菌多糖，奈瑟氏腦膜炎球菌血清群A群、C群、Y群、W135群多糖，傷寒沙門氏菌Vi型多糖，B群鏈球菌Ia、Ib、II、III、V型，肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F，副傷寒沙門菌甲型或副傷寒沙門菌乙型中的任意一種或幾種。

【技術特征摘要】
1. 一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗，其特征在于：所述疫 苗中含有的蛋白為乙肝表面抗原，所述疫苗中含有的細菌多糖選自b型流感嗜血桿菌多 糖，奈瑟氏腦膜炎球菌血清群A群、C群、Y群、W135群多糖，傷寒沙門氏菌Vi型多糖，B群 鏈球菌 la、lb、II、III、V 型，肺炎球菌血清型 1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、 15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F，副傷寒沙門菌甲型或副傷寒沙門菌乙型中的任意 一種或幾種。2. 根據權利要求1所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗，其 特征在于：各細菌多糖分別以共價鍵與乙肝表面抗原相連接成細菌多糖蛋白結合物。3. 根據權利要求2所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗， 其特征在于：所述的細菌多糖蛋白結合物中總的細菌多糖與乙肝表面抗原的質量比為 1:0. 1 ?1:5。4. 根據權利要求1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物 疫苗，其特征在于：所述的乙肝病毒表面抗原為天然乙肝病毒表面抗原或重組乙肝表面抗 原。5. 根據權利要求1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物 疫苗，其特征在于：所述的疫苗為液體制劑、固體顆粒劑、半固體劑或液體制劑與固體顆粒 劑組合的組合劑。6. 根據權利要求4所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗，其 特征在于：所述的疫苗為液體制劑、固體顆粒劑、半固體劑或液體制劑與固體顆粒劑組合的 組合劑。7. 根據權利要求1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物 疫苗，其特征在于：所述的疫苗為注射劑、鼻用制劑、凝膠劑或控釋膠囊劑。8. 根據權利要求4所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗，其 特征在于：所述的疫苗為注射劑、鼻用制劑、凝膠劑或控釋膠囊劑。9. 根據權利要求1或2或3所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物 疫苗，其特征在于：所述的疫苗中還含有鋁佐劑或一種含有胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸的脫氧 核糖核酸片段。10. 根據權利要求4所述的用乙肝表面抗原為載體蛋白的細菌多糖蛋白結合物疫苗， 其特征在于：所述的疫苗中還含有鋁佐劑或一種含有胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸的脫氧核糖核 酸片段。11. 一種用乙肝表面抗原為載體蛋白的單價細菌多糖蛋白結合物疫苗的制備方法，包 括以下步驟： (1) 細菌多糖溶解 將一種細菌多糖用〇. 2mol/L的NaCl溶解為1?20mg/ml的濃度；所述的一種細菌多 糖為b型流感嗜血桿菌多糖，奈瑟氏腦膜炎球菌血清群A群、C群、Y群、W135群多糖，傷寒 沙門氏菌Vi型多糖，B群鏈球菌la、lb、II、III、V型，肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、 7卩、8、9隊聽、1(^、1認、14、158、17卩、18(：、19六、19卩、20、22卩、23卩、33卩，副傷寒沙門菌甲型或副 傷寒沙門菌乙型中的任意一種； (2) 細菌多糖活化 在步驟（1)溶解的細菌多糖溶液中加入多糖活化劑得活化的細菌多糖，加入的多糖 活化劑的質量：細菌多糖質量比為0. 1 :1?1. 5:1，所述的多糖活化劑為溴化氰、1-氰 基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯、碳二亞胺、3-(2-吡啶基二硫基）丙酸、N-羥基琥珀酰亞 胺酯中的任意一種； (3) 細菌多糖衍生 在步驟（2)所得的活化的細菌多糖中按活化的細菌多糖：雙功能鏈接劑的質量比為 1:2?1:5的比列加入雙功能鏈接劑進行細菌多糖的衍生得細菌多糖衍生物，所述的雙功 能鏈接劑為己二酰肼、聚乙二醇、己二胺或己二醇中的任意一種； (4) 細菌多糖衍生物的超濾 將步驟（3)得到的細菌多糖衍生物經1?30KD的超濾膜超濾凍干得細菌多糖衍生物； (5) 細菌多糖與蛋白結合 用0. 2mol/L的NaCl將步驟（4)得到的細菌多糖衍生物溶解至細菌多糖衍生物的濃 度為2?20mg/ml后；按細菌多糖衍生物：乙肝表面抗原的質量比為1:0. 4?1:2的比 例加入載體蛋白中，然后加入碳二亞胺至碳二亞胺濃度為〇. 001?〇. 2mol/L，維持pH為 5. 5±0. 5,反應2?4小時，得一種細菌多糖衍生物與載體蛋白共價結合物； (6) 將步驟（5)所得一種細菌多糖衍生物與載體蛋白共價結合物用凝膠柱進行純化， 收集％ (無法進入凝膠過濾柱料的分子的洗脫體積）附近的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馬波，陳玉秋，吳凱，黃鎮，何建東，范榮坤，陶佳明，白銳瓊，錢雯，
申請(專利權)人：云南沃森生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：云南;53