本發明專利技術公開了一種干擾素誘導蛋白p204在制備抗肺癌轉移藥物中的應用。利用小鼠的體外淋巴細胞轉化實驗與體內荷瘤實驗表明本發明專利技術所述干擾素誘導蛋白p204可以顯著抑制肺癌細胞的轉移，預示該干擾素誘導蛋白有望成為抗肺癌轉移研究的重要靶點，為制備抗肺癌轉移藥物提供了基礎，具有良好的開發應用前景。
【技術實現步驟摘要】
干擾素誘導蛋白P204在制備抗肺癌轉移藥物中的應用
本專利技術涉及一種干擾素誘導蛋白的應用，尤其涉及一種干擾素誘導蛋白P204在 制備抗肺癌轉移藥物中的應用，屬于腫瘤生物學領域。
技術介紹
干擾素誘導蛋白p204(如下簡稱p204)是一種核蛋白，是干擾素（IFN)誘導產 生的P200蛋白家族（IFI-200) -員。該蛋白含有640個氨基酸殘基（詳見UniProtKB/ Swiss-Prot :P15092. 2)，分子量為72kDa，其N末端（aa 1-216)有核定位信號（NLS)和核輸 出信號（NES) ;C末端含有兩個保守的HIN-200結構域，Rb蛋白的結合基序定位其上。p204 在心臟、胸腺、脾臟、骨髓等器官中有大量表達。 實驗證明p204參與多種重要信號通路，它可以通過與下游轉錄因子、信號蛋白的 結合來調節其活性，并在組織分化中起重要作用，如P204具有調節骨骼和肌肉發育以及巨 噬細胞活性的功能。劉等研究發現，在成骨分化過程中，P204依靠其蛋白上的兩個非重疊 片段與Cbfal蛋白協同作用，這一過程需要pRb蛋白作為兩者的連接橋梁，p204通過C末 端LXCXE基序與pRb蛋白結合，最終與Cbfal和pRb蛋白組成了一個三元復合體共同參與 成骨細胞發育。 2010年Unterholzner報道人類IFI16及其鼠源蛋白p204是細胞質內病毒DNA的 感受器，P204可以通過HIN-200結構域探知胞質內非AT豐富的dsDNA，并在探測到DNA存 在后與STING蛋白相互作用，激活TBKI所介導的IRF3磷酸化途徑并直接活化NF-κ B(含 有p65和p60兩個亞基）。上述被激活的轉錄因子會入核誘導IFN- α / β的表達。但P204 在抗腫瘤轉移方面的研究鮮見報道。 目前癌癥是威脅人類健康的頭號殺手，全球因癌癥死亡的人數正逐年上升，據世 界衛生組織估計，隨著世界人口日趨老齡化，預計到2030年可能將超過1310萬。這其中大 多數患者并非死于原發性癌，而是死于轉移性癌。因此，研究和開發抗腫瘤轉移的生物藥物 具有極其重要的意義。經檢索，有關干擾素誘導蛋白P204在制備抗肺癌轉移藥物中的應用 未見報道。
技術實現思路
針對現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種干擾素誘導蛋白p204在制備 抗肺癌轉移藥物中的應用。 本專利技術所述干擾素誘導蛋白p204在制備抗肺癌轉移藥物中的應用。 本專利技術利用C57BL6野生型小鼠與p204敲除型小鼠為模型，研究了 p204分子的生 物學作用，實驗證實：該分子能夠顯著抑制肺癌細胞的轉移，為制備抗肺癌轉移藥物的研究 奠定了基礎。 為了更好的證明本專利技術所述分子的作用效果，下面結合小鼠（野生型小鼠與p204 敲除型小鼠）的體外淋巴細胞轉化實驗與體內荷瘤實驗和結果，來進一步闡述本專利技術所述 干擾素誘導蛋白P204在抗肺癌轉移中所具有的作用。 1.小鼠脾臟淋巴細胞轉化實驗 獲得野生型小鼠與P204敲除型小鼠的脾臟淋巴細胞，對其分別進行ConA/LPS刺 激，培養48h后，加入CCK-8檢測液，然后檢測OD值并按照公式：刺激指數=[(實驗孔（0D 值）-空白孔（0D值））八對照孔（0D值）-空白孔（0D值））]計算淋巴細胞的刺激指數（轉 化率）。 結果顯示在三組平行實驗中：對于ConA與LPS的刺激，野生型小鼠的淋巴細 胞轉化率均高于P204基因敲除小鼠，且結果經過spss軟件分析，兩者具有顯著性差異 (p〈0. 05)，表明p204基因的敲除導致了小鼠免疫功能的下降（見圖1)。 2.荷瘤小鼠模型構建 取Lewis肺癌細胞，分別接種于野生型小鼠與p204敲除型小鼠的左側腋窩下，對 照組注射〇. 9%滅菌生理鹽水。接種7天后能用手觸摸到左側腋窩處有隆起的腫瘤組織，說 明荷瘤模型構建成功。 3.荷瘤小鼠體重與腫瘤體積記錄。 對荷瘤模型構建成功的小鼠跟蹤觀察，記錄體重數據并按照公式計算體重變化 率：體重變化率=(檢測時體重-腫瘤接種時體重）/腫瘤接種時體重。 結果顯示，a.兩種基因型小鼠在注射腫瘤細胞后，體重較對照組（只注射生理鹽 水）均有明顯增加（荷瘤實驗組小鼠體重為22?26g，體重增加約為4?7g ;對照組小 鼠體重為22?25g,體重增加約為1?2. 5g),且荷瘤實驗組與對照組體重增加值相比具 有極顯著差異（P〈〇. 01) ;b.荷瘤實驗組小鼠的體重變化率在第15d開始具有顯著性差異 (p〈0. 05)并在第24d開始具有極顯著性差異，而同一時間點對照組小鼠體重變化率無顯著 性差異（P>〇.〇5) ;c.p204敲除小鼠在第22d體重下降。以上三點暗示了 p204敲除后小鼠 體內腫瘤重量增幅雖小，但其惡化情況卻更為嚴重，影響了小鼠正常生理功能（飲食、排泄 等），使其體重迅速下降（見圖2)。 試驗期間，每周處死荷瘤小鼠后，將腫瘤塊剝離，使用游標卡尺對腫瘤的長徑（a) 與短徑（b)進行記錄，并按照公式V = (ab2)/2計算腫瘤體積。 結果顯示，無論野生型還是p204敲除型小鼠，其腫瘤體積均隨接種時間增長而增 大，但野生型小鼠腫瘤體積明顯大于同時間點的P204敲除型小鼠，且在腫瘤細胞接種后的 第三周和第四周具有統計學差異（Ρ〈〇· 05)(見圖3A); 在第四周預計處死的10只實驗組小鼠中，野生型小鼠僅有一只提前死亡，死亡率 為10%,而ρ204敲除型小鼠有四只提前死亡,死亡率為40% (見圖3Β)。 實驗組的ρ204敲除型小鼠其腫瘤體積小于實驗組的野生型小鼠，卻具有更高的 死亡率，暗示了由于與野生型小鼠相比， Ρ204敲除型小鼠體內環境更適合腫瘤的浸潤。所 以野生型小鼠體內腫瘤基本在注射部位（腋下）生長，而Ρ204敲除型小鼠腫瘤細胞更多的 去浸潤其它組織，導致小鼠飲水攝食等出現障礙，并最終死亡。 4.小鼠肺部組織石蠟切片與HE染色觀察 處死小鼠后，取小鼠的左側肺葉進行石蠟切片，并將切片進行HE染色，在倒置顯 微鏡下進行觀察并拍照。 結果表明：無論是野生型還是p204敲除型，其對照組小鼠的肺部切片（圖4C、4D) 均顯示無炎癥情況和淋巴細胞浸潤，肺泡形態正常，無腫瘤灶。對比荷瘤實驗組小鼠的肺部 切片可以清楚觀察到P204敲除型小鼠其肺部出現明顯淋巴細胞聚集和腫瘤浸潤情況（圖 4B圖中箭頭所示部位為肺癌細胞轉移浸潤），而野生型實驗組小鼠僅出現炎癥反應，無腫 瘤細胞的浸潤（圖4A)。 上述實驗數據均經統計學處理（spss軟件分析），實驗數據以平均值土標準誤差 表不。 通過上述實驗及其結果，可以得到以下結論： p204敲除小鼠相比野生型小鼠其免疫力降低，但其腫瘤塊體積卻小于相同時間點 的野生型小鼠（具有顯著性差異），再結合石蠟切片所顯示的結果說明：干擾素誘導蛋白 P204其全身性敲除導致小鼠免疫力降低，并有利于肺癌細胞在小鼠體內的轉移與浸潤，表 明干擾素誘導蛋白P204可以抑制肺癌細胞的轉移。 本專利技術公開的干擾素誘導蛋白p204在抗肺癌轉移中的應用，預示該干擾素誘導 蛋白P204有望成為抗肺癌轉移研究的重要靶點，為制備抗肺癌轉移本文檔來自技高網...
【技術保護點】
干擾素誘導蛋白p204在制備抗肺癌轉移藥物中的應用。
【技術特征摘要】
1.干擾素誘導蛋白P204在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：時永香，劉傳聚，楊楨，魏偉，尹郭偉，閆曉桐，
申請(專利權)人：山東大學，
類型：發明
國別省市：山東;37
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