一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，包括固相萃取吸附-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，所述固相萃取為直接攪拌方式攪拌棒固相萃取，所述攪拌棒涂有基于二維或三維的石墨烯-聚合物涂層。所述石墨烯-聚合物涂層的材料包括石墨烯及石墨烯改性材料，所述石墨烯改性材料包括氧化石墨烯、石墨烯-聚乙二醇二甲基丙烯酸酯、石墨烯-聚吡咯、石墨烯-聚甲基三甲氧基硅烷和石墨烯類納米材料。本發(fā)明專利技術(shù)的應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法具有檢測(cè)準(zhǔn)確、靈敏度高、選擇性吸附效果好和使用壽命長(zhǎng)的特點(diǎn)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法
本專利技術(shù)涉及固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用
，特別涉及一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法。
技術(shù)介紹
金花茶屬于山茶科、山茶屬，與茶、山茶、南山茶、油茶、茶梅等為孿生姐妹。金花茶的花金黃色，耀眼奪目，仿佛涂著一層蠟，晶瑩而油潤(rùn)，似有半透明之感。金花茶單生于葉腋，花開(kāi)時(shí)，有杯狀的、壺狀的或碗狀的，嬌艷多姿，秀麗雅致。以前，人們沒(méi)有見(jiàn)到過(guò)花色金黃的種類。1960年，中國(guó)科學(xué)工作者首次在廣西南寧一帶發(fā)現(xiàn)了一種金黃色的山茶花，被命名為金花茶。國(guó)外稱之為神奇的東方魔茶，被譽(yù)為“植物界大熊貓”、“茶族皇后”，是國(guó)家八種一級(jí)保護(hù)植物之一，廣東梅州、廣西防城港等地也有人工引種。關(guān)于金花茶，《本草綱目》有載：“山茶產(chǎn)南方……又有一捻紅，千葉紅、千葉白等名，或云亦有黃色者”；廣西《地方志》亦有記載：“金花茶，常綠灌木，生長(zhǎng)在荒山野嶺中”；“金花茶的葉和花，經(jīng)加工可作名貴清熱、治痢疾、去脂降壓”。在兩廣地區(qū)民間，千百年來(lái)百姓廣泛應(yīng)用金花茶泡茶或煲湯以清熱解毒，降脂降糖、利尿去濕、降壓及提高免疫力等。研究發(fā)現(xiàn)，金花茶葉和花中富含茶多酚，β-谷甾醇，花青素、總黃酮(異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷、雙氫黃（醇）及新黃酮類等)、多種氨基酸、齊墩果酸、可溶性糖、天然維生素E、十八碳酸、鄰苯二甲酸單（乙基己基）酯、山奈酚等天然活性成分及硒、錳、鐵、鋅等微量元素。茶多酚，又叫茶單寧、茶鞣質(zhì),是茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱,包括黃烷醇類(兒茶素)、花色苷類(花青素和花白素)、酚酸類及縮酚酸類物質(zhì)等。茶多酚為一類含有多酚羥基的化學(xué)物質(zhì),能清除體內(nèi)活性自由基,具有很強(qiáng)的抗氧化作用,因此是一種很有前途的天然食品抗氧化劑。與傳傳統(tǒng)的抗氧化劑如抗氧劑264、丁基羥基茴香醚相比,抗氧劑264、丁基羥基茴香醚作為抗氧化劑也具有許多優(yōu)點(diǎn),但同時(shí)存在不同程度的毒性。而茶多酚作為天然抗氧化劑不但具有安全性高、無(wú)毒副作用等優(yōu)點(diǎn),而且抗氧化能力也優(yōu)于其他的諸如維生素E、維生素C等同類天然抗氧化劑,因此已成為人們研究與開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)。黃酮類化合物，又稱類黃酮，是指基本母核為2-苯基色原酮類化合物，現(xiàn)在則泛指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過(guò)中央三碳原子相互連接的一系列化合物，是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，也廣泛自于水果、蔬菜、茶、葡萄酒、種子或是植物根。在自然界中最常見(jiàn)的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。近年來(lái)，由于自由基生命科學(xué)的進(jìn)展，使具有很強(qiáng)的抗氧化和消除自由基作用的類黃酮受到空前的重視。類黃酮參與了磷酸與花生四烯酸的代謝、蛋白質(zhì)的磷酸化、鈣離子的轉(zhuǎn)移、自由基的清除、抗氧化活力的增強(qiáng)、氧化還原作用、螯合作用和基因的表達(dá)。目前關(guān)于金花茶中茶多酚和總黃酮類活性成分研究大多局限在傳統(tǒng)紫外光譜、色譜檢測(cè)或溶劑浸提、膜分離等。在分析靈敏度、檢測(cè)限、分離效率、實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性等方面存在一些不足，如分析靈敏度差、檢測(cè)限高、分離效率低和實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性難度大等。固相微萃取技術(shù)作為一種新型的樣品預(yù)處理技術(shù)于1990年由Pawliszyn提出，由于其節(jié)省溶劑且操作簡(jiǎn)單快速，因此應(yīng)用廣泛。攪拌棒吸附萃取是一種新型的固相微萃取樣品前處理技術(shù),具有固定相體積大、萃取容量高、無(wú)需外加攪拌子、可避免競(jìng)爭(zhēng)性吸附、能在自身攪拌的同時(shí)實(shí)現(xiàn)萃取富集等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、環(huán)境和生物樣品分析的前處理。攪拌棒吸附萃取是一種非常適合低濃度樣品富集的技術(shù)，只需要將外壁包裹著吸附材料的磁力吸附攪拌棒放入裝有樣品溶液的杯或瓶中，開(kāi)動(dòng)磁力攪拌器攪拌幾分鐘到十多分鐘，富集后的活性有效成分就會(huì)被富集吸附在攪拌棒上。通過(guò)萃取攪拌棒的富集，可以具有分析多種濃度低于ppb的化合物的能力。攪拌棒吸附萃取不需要大量的溶劑萃取，富集效率比固相微萃取高，因?yàn)閯?dòng)態(tài)攪拌富集，重復(fù)性也比固相萃取好，使用簡(jiǎn)單方便，適合金花茶活性成分分析，特別是半揮發(fā)或不揮發(fā)的茶多酚、總黃酮類成分，一般的吹脫捕集技術(shù)或頂空分析技術(shù)很難分析，但是，應(yīng)用固相萃取技術(shù)分析上述組分具有較好的效果。該技術(shù)常與高效液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜、氣相色譜-質(zhì)譜、毛細(xì)管電泳等聯(lián)用實(shí)現(xiàn)對(duì)有效成分的同步檢測(cè)。但是，攪拌棒固相萃取技術(shù)盡管優(yōu)勢(shì)明顯，但是其性能很大程度取決于其涂層材料的性能。傳統(tǒng)的攪拌棒固相微萃取所用的萃取纖維攪拌棒表面涂有的薄層吸附高分子材料多為全氟化樹(shù)脂、聚吡咯、甲基乙烯基硅氧烷、環(huán)氧-聚二甲基硅氧烷等，這些材料往往價(jià)格較高且質(zhì)地脆弱，在實(shí)際加工中需要通過(guò)加厚涂層保證吸附性能，涂層的加厚會(huì)造成既會(huì)降低檢測(cè)靈敏度，又會(huì)提高攪拌棒涂層在實(shí)際操作過(guò)程中發(fā)生斷裂的概率，在分析某些物質(zhì)例如植物活性成分時(shí)還會(huì)出現(xiàn)樣品在固相萃取涂層材料的遺留現(xiàn)象或基質(zhì)干擾現(xiàn)象，嚴(yán)重影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，結(jié)合金花茶成分檢測(cè)的現(xiàn)狀，針對(duì)攪拌棒固相萃取檢測(cè)技術(shù)存在的問(wèn)題，形成了一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，具有檢測(cè)準(zhǔn)確、靈敏度高、選擇性吸附效果好和使用壽命長(zhǎng)的特點(diǎn)。本專利技術(shù)的內(nèi)容為：一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，包括固相萃取吸附-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，所述固相萃取為直接攪拌方式攪拌棒固相萃取，所述攪拌棒涂有基于二維或三維的石墨烯-聚合物涂層。采用直接攪拌方式的攪拌棒固相萃取，操作方便，有效減少繁瑣操作工序帶來(lái)的累計(jì)誤差。通過(guò)選用石墨烯作為攪拌棒的涂層材料，可以充分利用石墨烯具有的優(yōu)異的力學(xué)性能、質(zhì)量輕、比表面積大、楊氏模量和斷裂強(qiáng)度大等特點(diǎn)，又可以利用其機(jī)械、力學(xué)、化學(xué)、電學(xué)性能優(yōu)異，而且原料易得的優(yōu)勢(shì)。因此，采用石墨烯類納米材料替代傳統(tǒng)的應(yīng)用在攪拌棒固相萃取技術(shù)的全氟化樹(shù)脂等涂層材料，可以發(fā)揮石墨烯的理論比表面積為2630m2/g的優(yōu)點(diǎn)，有效增大攪拌棒固相萃取涂層超大比表面。同時(shí)，石墨烯涂層材料與含苯環(huán)類物質(zhì)如茶多酚、總黃酮等化合物之間存在著較強(qiáng)的π-π相互作用，因而對(duì)金花茶中該類物質(zhì)具有較好的選擇性萃取吸附效果。由于石墨烯涂層機(jī)械性能優(yōu)異，使上述材料在高速旋轉(zhuǎn)萃取耐磨性出色，材料楊氏模量和斷裂強(qiáng)度大，可使攪拌棒使用壽命大大延長(zhǎng)，從而大大有利于金花茶茶多酚、總黃酮活性成分檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性。進(jìn)一步地，所述石墨烯-聚合物涂層的材料包括石墨烯及石墨烯改性材料，所述石墨烯改性材料包括氧化石墨烯、石墨烯-聚乙二醇二甲基丙烯酸酯、石墨烯-聚吡咯、石墨烯-聚甲基三甲氧基硅烷和石墨烯類納米材料。進(jìn)一步地，所述石墨烯-聚合物涂層的材料為以可再生資源碳化制備的活性碳通過(guò)改進(jìn)型Hummers法及可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合方法合成的。進(jìn)一步地，所述石墨烯-聚合物涂層為納米涂層。單層石墨烯往往僅有0.7-1.2nm厚，多層石墨烯涂層也僅有幾個(gè)納米厚，材料理論比表面積為2630m2/g，實(shí)際比表面400-800m2/g，，因而基于石墨烯的固相攪拌棒萃取吸附工藝可以獲得更高的萃取量、更低的檢出限和更好的重現(xiàn)性，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)金花茶中茶多酚、總黃酮類活性成分的高靈敏、寬范圍及良好重現(xiàn)性檢測(cè)。進(jìn)一步地，所述可再生資源碳化制備的活性碳的原料包括稻草、甘蔗渣和玉米桿。進(jìn)一步地，所述石墨烯-攪拌棒本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，包括固相萃取吸附?氣相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，其特征在于：所述固相萃取為直接攪拌方式攪拌棒固相萃取，所述攪拌棒涂有基于二維或三維的石墨烯?聚合物涂層。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，包括固相萃取吸附-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，其特征在于：所述固相萃取為直接攪拌方式攪拌棒固相萃取，所述攪拌棒涂有基于二維或三維的石墨烯-聚合物涂層；所述石墨烯-聚合物涂層為納米涂層；所述石墨烯-攪拌棒萃取聯(lián)用檢測(cè)為選擇性檢測(cè)，所述選擇性檢測(cè)的活性成分包括茶多酚和總黃酮類。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，其特征在于：所述石墨烯-聚合物涂層的材料包括石墨烯及石墨烯改性材料，所述石墨烯改性材料包括石墨烯-聚乙二醇二甲基丙烯酸酯、石墨烯-聚吡咯和石墨烯-聚甲基三甲氧基硅烷。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用于金花茶茶多酚、黃酮類成分檢測(cè)的測(cè)試方法，其特征在于：所述石墨烯-聚合物涂層的材料為以可再生資源碳化制備的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：程金生，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：廣東;44