一種細葉水團花用組織培養基組合物及快速組培方法技術

本發明專利技術屬于植物離體組織培養技術領域，具體涉及一種細葉水團花用組織培養基組合物及利用該組合物的細葉水團花的快速組織培養方法。該組合物包括誘導培養基、增殖培養基和生根培養基，是在現有的MS培養基基礎上改良所得的。本發明專利技術同時提供了一種高效的、快速的細葉水團花的組織培養方法，打破了細葉水團花傳統繁殖方法的限制，可同時獲得大量的細葉水團花再生植株，從而大幅縮短繁殖周期。經過數據統計，本發明專利技術所建立的細葉水團花的快繁體系，叢生芽的誘導率達到80%，誘導系數為4~6，增殖系數為8~10，生根率達到100%，形成再生植株的周期為3~4個月，對于細葉水團花的推廣種植具有較為重要的應用價值。

【技術實現步驟摘要】
一種細葉水團花用組織培養基組合物及快速組培方法
本專利技術屬于植物離體組織培養
，具體涉及一種細葉水團花用組織培養基組合物及利用該組合物的細葉水團花的快速組織培養方法。
技術介紹
細葉水團花(Adinarubella)是茜草科(Rubiaceae)水團花屬(Adina)的一種落葉小灌木，其枝條細長披散，有赤褐色柔毛。葉對生，厚紙質，無柄，葉片卵狀，披針形或卵狀橢圓形，表面深綠色，有光澤。頭狀花序單一或2-3個頂生或腋生；花紫紅色。蒴果長卵狀楔形?；ㄆ?-7月，果期9-10月。細葉水團花的枝條披散，俏麗婀娜。葉片狹長質厚，綠油油而閃閃泛光。花開時紫紅球花滿吐長蕊，奇麗奪目，適用于池畔、塘邊配植，亦宜作花徑綠籬，根、花可供藥用，莖皮纖維可造紙和做人造棉等。細葉水團花的根干蒼勁古樸、葉片細小稠密、色彩靚麗，因而也是制作盆景的好材料。我國木本觀賞植物離體培養工作始于20世紀70年代，但到目前為止，能通過組培快繁的樹木種類還只占木本觀賞植物總數的10％，其主要原因：一是組織培養過程中存在外植體褐變、試管苗玻璃化和生根難等現象；二是研究對象范圍小，可借鑒和應用的技術很有限（木本觀賞植物組織培養技術，李青林，鄒永田，劉廣林，黃曉光，河北農業科學，2010，14(6)：38—41，51），加之不同科屬植物生長環境與生長特性的差異、所需的基本培養基與激素配比的差異、所需植物外植體的差異等等因素，迄今為止,木本植物組培技術還難以找到可普遍遵循的規律。木本植物組培技術在林業科研生產中的應用與其它植物一樣，主要體現在植物的快速繁殖、植物脫毒、新品種培育和種質資源的保存等方面，不論在科研或生產中的應用，都應建立在成熟的植物組培技術基礎上。組培快繁技術、組培脫毒技術已在草本植物中廣泛推廣應用，但木本植物組培快繁技術的產業化應用，尤其是規?；a應用還為數不多。這其中主要因素是木本植物組培技術要求高，掌握難度大（木本植物組織培養技術在林業科研與生產中的應用與局限，吳麗君，福建林業科技，2003，30（1）：67-69，74），脫毒困難。細葉水團花屬于木本植物，其現行的繁殖方法主要是播種和扦插，到目前為止，用于細葉水團花的組培快繁技術與植株再生方法還未見相關報道。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種細葉水團花用組織培養基組合物及利用該組織培養基的細葉水團花組織培養方法。本專利技術所采取的技術方案如下。一種細葉水團花用組織培養基組合物，該組合物包括誘導培養基、增殖培養基和生根培養基；所述誘導培養基用于誘導細葉水團花發芽，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1號母液10mL+MS培養基的2號母液10mL+MS培養基的3號母液10mL+MS培養基的4號母液10mL+肌醇100.0mg+VB110.0mg+VB61.0mg+煙酸1.0mg+椰汁20mL+次氯酸鈉5~15mg+6-BA3.0~6.0mg+NAA1.0~3.0mg+瓊脂8~11g+蔗糖10~25g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述增殖培養基用于促進發芽后細葉水團花成苗，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1~6號母液各10mL+6-BA0.8~2.0mg+NAA0.05~0.4mg+瓊脂8~11g+蔗糖20~40g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述生根培養基用于促進成苗后細葉水團花生根，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1、3號母液各5mL+MS培養基的2、4、5、6號母液各10mL+NAA0.1~0.5mg+瓊脂8~11g+蔗糖20~40g，水補足1L，pH值為5.5~5.8。所述細葉水團花用組織培養基組合物，較為配方組分如下：所述誘導培養基組分為：MS培養基的1號母液10mL+MS培養基的2號母液10mL+MS培養基的3號母液10mL+MS培養基的4號母液10mL+肌醇100.0mg+VB110.0mg+VB61.0mg+煙酸1.0mg+椰汁20mL+次氯酸鈉15mg+6-BA6.0mg+NAA3.0mg+瓊脂11g+蔗糖25g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5；所述增殖培養基組分為：MS培養基的1~6號母液各10mL+6-BA2.0mg+NAA0.4mg+瓊脂11g+蔗糖40g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5；所述生根培養基組分為：MS培養基的1、3號母液各5mL+MS培養基的2、4、5、6號母液各10mL+NAA0.5mg+瓊脂11g+蔗糖40g，水補足1L，pH值為5.5。所述細葉水團花用組織培養基組合物中誘導培養基和增殖培養基中所述殺菌劑為：益培隆A劑333μL+B劑14.5mg。利用所述細葉水團花用組織培養基組合物的細葉水團花的組織培養方法，包括以下步驟：（1）以細葉水團花當年生莖段為外植體，將外植體消毒滅菌后，用誘導培養基誘導形成叢生芽；培養條件為：溫度25±2℃，光照時間12h/d，光照強度2000~3000Lux，培養時間為30~40d；（2）將步驟（1）中的叢生芽分株用增殖培養基進行增殖培養形成叢生苗；培養條件為：溫度25±2℃，光照時間12h/d，光照強度2000~3000Lux，培養時間為25~30d；（3）將步驟（2）中叢生苗用生根培養基誘導形成生根苗；培養條件為：溫度25±2℃，光照時間12h/d，光照強度2000~3000Lux，培養時間為25~30d；（4）將步驟（3）中生根后的再生苗進行煉苗，25±2℃條件下生長7d，然后用流水洗去再生苗根部的培養基，根部殺菌移栽，即可得到再生植株。步驟（1）中所述消毒滅菌包括以下步驟：（1）將外植體流水沖洗10~12小時；（2）在超凈工作臺上用75%的酒精表面滅菌50s，滅菌蒸餾水沖洗1~2次；（3）用0.1%的氯化汞處理10min，滅菌蒸餾水沖洗2~3次；（4）用10%次氯酸鈉滅菌10~15min，滅菌蒸餾水沖洗4~5次，無菌濾紙吸去多余水分后用于接種。步驟（4）所述殺菌采用1‰的高錳酸鉀溶液。步驟（4）所述移栽采用的栽培基質為消毒后的東北草炭和蛭石組成的栽培基質，以質量比計，其中東北草炭︰蛭石=2︰1。通過多次試驗、配比組合，本專利技術在現有的MS培養基基礎上，提供了一種用于細葉水團花的組織培養基組合物，以此組合物為基礎，本專利技術同時提供了一種高效的、快速的細葉水團花的組織培養方法，打破了細葉水團花傳統繁殖方法的限制，可同時獲得大量的細葉水團花再生植株，從而大幅縮短繁殖周期。經過數據統計，本專利技術所建立的細葉水團花的快繁體系，叢生芽的誘導率達到80%，誘導系數為4~6，增殖系數為8~10，生根率達到100%，形成再生植株的周期為3~4個月，相較于現有的細葉水團花的繁殖方式，對于細葉水團花的推廣種植具有較為重要的應用價值。附圖說明圖1為將外植體接種于誘導培養基后誘導萌發的叢生芽；圖2為將叢生芽用增殖培養基擴增培養的叢生苗；圖3為將叢生苗用生根培養基誘導形成的生根苗。具體實施方式下面結合實施例對本專利技術做進一步的解釋說明。介紹具體實施例前，對本專利技術中所用的主要儀器設備和試劑簡要介紹如下，未說明部分以本領域常用設備或試劑為準。主要儀器設備有：GXZ-430D智能光照培養箱，寧波東南儀器有限公司制造；HIRAYAMA高壓滅菌鍋，株式會社平山制作所；MET本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種細葉水團花用組織培養基組合物，其特征在于，該組合物包括誘導培養基、增殖培養基和生根培養基；所述誘導培養基用于誘導外植體形成叢生芽，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1~4號母液各10?mL+肌醇100.0mg+VB1?10.0?mg+VB6?1.0mg+煙酸1.0?mg+椰汁20?mL?+次氯酸鈉5~15?mg?+6?BA?3.0~6.0mg+NAA?1.0~3.0mg+瓊脂8~11g+蔗糖10~25g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述增殖培養基用于促進叢生芽形成叢生苗，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1~6號母液各10mL+6?BA?0.8~2.0mg+NAA?0.05~0.4mg+瓊脂8~11g+蔗糖20~40g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述生根培養基用于促進叢生苗生根，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1、3號母液各5mL+?MS培養基的2、4、5、6號母液各10mL+NAA?0.1~0.5mg+瓊脂8~11g+蔗糖20~40g，水補足1L，pH值為5.5~5.8。

【技術特征摘要】
1.一種細葉水團花用組織培養基組合物，其特征在于，該組合物包括誘導培養基、增殖培養基和生根培養基；所述誘導培養基用于誘導外植體形成叢生芽，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1~4號母液各10mL+肌醇100.0mg+VB110.0mg+VB61.0mg+煙酸1.0mg+椰汁20mL+次氯酸鈉5~15mg+6-BA3.0~6.0mg+NAA1.0~3.0mg+瓊脂8~11g+蔗糖10~25g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述增殖培養基用于促進叢生芽形成叢生苗，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1~6號母液各10mL+6-BA0.8~2.0mg+NAA0.05~0.4mg+瓊脂8~11g+蔗糖20~40g+殺菌劑，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述生根培養基用于促進叢生苗生根，以配制1L培養基為例，組分為：MS培養基的1、3號母液各5mL+MS培養基的2、4、5、6號母液各10mL+NAA0.1~0.5mg+瓊脂8~11g+蔗糖20~40g，水補足1L，pH值為5.5~5.8；所述MS培養基1~6號母液，以1L基礎MS培養基所需物質計算，各型號母液中所包括的物質如下：1號母液：KNO3190g，NH4NO3165g，MgSO437g；2號母液：CaCl2·2H2O44g；3號母液：KH2PO417g；4號母液：Na2EDTA3.73g，FeSO4·7H2O2.78g；5號母液：KI0.083g，H3BO30.62g，MnSO4·H2O1.69g，ZnSO4·7H2O0.86g，Na2MoO40.0025g，CuSO4·5H2O0.0025g，CoCl2·6H2O0.0025g；6號母液：肌醇10g，煙酸0.05g，甘氨酸0.2g，鹽酸吡哆辛0.05g，鹽酸噻胺0.01g；誘導培養基和增殖培養基中所述殺菌劑為：益培隆A劑333μL+B劑14.5mg；所述益培隆為上海宇涵生物科技有限公司產品。2.如權利要求1所述細葉水團花用組織培養基組合物，其特征在于，所述誘導培養基，以配制1L培養基為例，其組分為：MS培養基的1~4號母液各10mL+肌醇100.0mg+VB110.0mg+VB61.0mg+煙酸1.0mg+椰汁20mL+次氯酸...

【專利技術屬性】
技術研發人員：蔣素華，田云芳，梁芳，王林青，馬杰，袁秀云，崔波，
申請(專利權)人：鄭州師范學院，
類型：發明
國別省市：河南;41