本發明專利技術公開了一種無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，屬于新型納米功能材料和生物傳感器領域。本發明專利技術首先在二氧化鈦納米顆粒基底上，利用光電化學合成方法，制備核殼結構的枝晶納米棒狀的貴金屬合金納米材料，進而制得了成本低、靈敏度高、特異性好、檢測快速、制備簡單的檢測瘦肉精的無標記電致化學發光免疫傳感器。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了一種無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，屬于新型納米功能材料和生物傳感器領域。本專利技術首先在二氧化鈦納米顆粒基底上，利用光電化學合成方法，制備核殼結構的枝晶納米棒狀的貴金屬合金納米材料，進而制得了成本低、靈敏度高、特異性好、檢測快速、制備簡單的檢測瘦肉精的無標記電致化學發光免疫傳感器。【專利說明】無標巧電致化學發光瘦肉精免疫傳感器的制備方法和應用
本專利技術設及采用一種快速、靈敏檢測瘦肉精的無標記電致化學發光免疫傳感器的 制備方法和應用，屬于新型納米功能材料與生物傳感器
。
技術介紹
瘦肉精是一類叫做0 -興奮劑的藥物，而不是某一種特定的藥物。該類藥物具有 實現促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的功能，所W統稱為"瘦肉精"。根據國務院食品安全委員 會辦公室r瘦肉精"專項整治方案》（食安辦〔2011) 14號）規定的"瘦肉精"品種目錄為16 種，包括：萊克多己胺Ractopamine ;克倫特羅Clenbuterol ;沙了胺醇Sa化utamol ;硫酸沙 了胺醇 Sa化utamol Sulfate ;鹽酸多己胺 Dopamine Hy化ochloride ;西馬特羅 Cimaterol ; 硫酸特布他林Terbutaline Sulfate ;苯己醇胺APhenylethanolamine A ;班布特羅 Bambuterol ;鹽酸齊帕特羅 Zilpaterol Hy化ochloride ;鹽酸氯丙那林 Clo巧renaline Hy化ochloride ;馬布特羅Mabuterol ;西布特羅Cimbuterol ;漠布特羅化ombuterol ;酒石 酸阿福特羅 Arformoterol Tartrate ;富馬酸福莫特羅 F'ormoterol Fumatrate。 瘦肉精可W提高豬的瘦肉率，但如果人們食用含有大量瘦肉精的豬肉后，會造成 屯、血管系統的損壞，并可能出現嚴重的神經癥狀。針對瘦肉精中毒事件頻發該一嚴重現象， 2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，農業部分別下發文件禁止食品動物禁止使 用0 -興奮劑類藥物作為飼料添加劑(農業部176號、193號公告、1519號條例）。 目前，檢測瘦肉精的方法有高效液相色譜法HPLC、氣相色譜一質譜法GC-MS和酶 聯免疫法化ISA。該些方法，雖具有一定的靈敏度，但存在樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、 難于操作，或者重現性差等缺點，在實際應用中受到一定的限制。 電化學發光免疫傳感器由于其靈敏度高、特異性好、操作簡便等優點被廣泛應用 于臨床診斷、藥物分析、環境監測等領域。制備性能優越的電化學發光免疫傳感器，其最關 鍵技術就是發光強度及穩定性和免疫分子的有效固定及重現性等性能的提高。 魯米諾-過氧化氨Luminol-H2〇2發光體系由于成本低廉、發光強度高，已被廣泛 應用到電致化學發光的分析方法中，但由于Luminol-H2〇2發光體系的發光需要借助一定的 催化劑，才能有快速、靈敏、高強度的光信號響應，因此一般常加入辣根過氧化物酶HRP來 進行催化反應。而HRP的使用對反應條件要求苛刻，不利于Luminol-H2〇2發光體系的普及 使用。因此開發新型納米材料模擬酶來代替HRP，會相比于HRP具有較寬泛的使用條件。另 夕F，貴金屬納米材料具有比表面積大、易于與多種生物分子(核酸、蛋白質和生物分子等）結 合、對人體無害等特點，可被應用于電致化學發光免疫傳感器的制備中。 為了解決上述問題，本專利技術采用W光化學合成方法，直接在電極上實現了 Ti化 NPs負載的核殼結構的金銀鈕合金納米椿-殼聚糖復合材料Ti化-Au@Ag-Pd NDRs-C服，使 之與Ti化NPs的復合材料共同修飾的電極，一方面增加了電極比表面積，增強電極導電能 力和抗體的負載量，提高傳感器的檢測限，另一方面二者可W產生協同催化作用，可W無需 使用&化，僅利用水溶液中的溶解氧即可使魯米諾產生電致化學發光，并且該體系具有更好 的催化響應速度和電致化學發光強度。由此，成功的專利技術了無標記電致化學發光瘦肉精免 疫傳感器的制備方法。
技術實現思路
[000引本專利技術的目的在于避免現有檢測方法中存在的儀器設備復雜、操作過程繁瑣及對 檢驗人員的技能要求高等缺點，提供了一種快速、靈敏檢測瘦肉精的無標記電致化學發光 免疫傳感器的制備方法，所制備的傳感器具有靈敏度高、特異性強的特點，且制備簡單、操 作方便，可應用于瘦肉精的快速、靈敏檢測。 本專利技術采用的技術方案如下； 1.無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟為： (OW直徑4 mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5?10 uL二氧化鐵納米 粒子溶膠Ti〇2 NPs，室溫下驚干后，滴涂5?10化的金銀納米椿-殼聚糖復合材料Au@Ag NRs-C服溶液，并在室溫下驚干； (2) 將步驟（1)中得到的電極超純水清洗，室溫下驚干成膜，表面滴涂5?lOuL 0.01 mol/L的氯鈕酸溶液H2PCICI4,立刻使用高壓隸燈照射30?90秒，制得Ti〇2 NPs負載的金銀 鈕合金納米椿-殼聚糖復合材料Ti〇2-Au@Ag-Pd NDRs-C服修飾的工作電極，室溫下驚干； (3) 將步驟（2)中得到的電極用超純水清洗，室溫下驚干后，將電極浸入到邸C/N服溶 液中，1小時后取出； (4) 將步驟（3)中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂5?10化10嗦/mL的瘦 肉精抗體溶液，4 °C冰箱中保存驚干； (5) 將步驟（4)中得到的電極用超純水清洗，繼續在電極表面滴涂5?10化100嗦/mL 的牛血清白蛋白BSA溶液，4 °C冰箱中保存驚干，超純水清洗，4 °C冰箱中驚干成膜，審U 得無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器； 所述的Ti化NPs為Img/mL的二氧化鐵納米粒子水溶液； 所述的Au@Ag NRs-C服為金@銀核殼納米椿與殼聚糖復合材料的水溶液，所述金@銀核 殼納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W銀納米粒子為殼層的核殼結構的椿狀納米粒子，所 述椿狀納米粒子的長度為20?50nm，所述殼聚糖為將殼聚糖純品加入到體積分數為1%的 醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液； 所述的^PdCL為抑值為1?2的氯鈕酸水溶液； 所述的Au@Ag-Pd NDRs為金銀鈕合金納米椿，所述的金銀鈕合金納米椿為金@銀鈕核 殼枝晶狀的納米椿，所述金@銀鈕核殼枝晶狀的納米椿是W椿狀金納米粒子為核、W枝晶 狀銀鈕合金納米粒子為殼層的核殼結構的納米粒子，所述納米椿的長度為20?50nm ; 所述的邸C/N服為1- (3-二甲氨基丙基）-3-己基碳二亞胺鹽酸鹽邸C和N-哲基了二 酷亞胺N服的混合溶液，所述混合溶液中邸C的濃度為0. Olmol/L，N服的濃度為0. 002mol/ L。 2. -種如本專利技術所述的制備方法所制備的無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感 器，所述的無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器應用于瘦肉精的檢測，其特征在于，檢測 步驟為： (1)標準溶液配制：配制一組包括空白標樣在內的不同濃度的瘦肉精標準溶液，底液為 pH 7. 4的磯酸鹽緩沖溶液； (本文檔來自技高網...
【技術保護點】
無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器的制備方法，其特征在于，制備步驟為：（1）以直徑4?mm的玻碳電極為工作電極，在電極表面滴涂5~10?uL?二氧化鈦納米粒子溶膠TiO2?NPs，室溫下晾干后，滴涂5~10?μL的金銀納米棒?殼聚糖復合材料Au@Ag?NRs?CHS溶液，并在室溫下晾干；（2）將步驟（1）中得到的電極超純水清洗，室溫下晾干成膜，表面滴涂5~10uL?0.01?mol/L?的氯鈀酸溶液H2PdCl4，立刻使用高壓汞燈照射30~90秒，制得TiO2?NPs負載的金銀鈀合金納米棒?殼聚糖復合材料TiO2?Au@Ag?Pd?NDRs?CHS修飾的工作電極，室溫下晾干；（3）將步驟（2）中得到的電極用超純水清洗，室溫下晾干后，將電極浸入到EDC/NHS溶液中，1小時后取出；（4）將步驟（3）中得到的電極用超純水清洗，在電極表面滴涂5~10?μL?10?μg/mL的瘦肉精抗體溶液，4?℃?冰箱中保存晾干；（5）將步驟（4）中得到的電極用超純水清洗，繼續在電極表面滴涂5~10μL?100?μg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液，4?℃?冰箱中保存晾干，超純水清洗，4?℃?冰箱中晾干成膜，制得無標記電致化學發光瘦肉精免疫傳感器；所述的TiO2?NPs為1mg/mL?的二氧化鈦納米粒子水溶液；所述的Au@Ag?NRs?CHS為金@銀核殼納米棒與殼聚糖復合材料的水溶液，所述金@銀核殼納米棒是以棒狀金納米粒子為核、以銀納米粒子為殼層的核殼結構的棒狀納米粒子，所述棒狀納米粒子的長度為20~50nm，所述殼聚糖為將殼聚糖純品加入到體積分數為1%?的醋酸中制備而成的殼聚糖水溶液；所述的H2PdCl4為pH值為1~2的氯鈀酸水溶液；所述的Au@Ag?Pd?NDRs?為金銀鈀合金納米棒，所述的金銀鈀合金納米棒為金@銀鈀核殼枝晶狀的納米棒，所述金@銀鈀核殼枝晶狀的納米棒是以棒狀金納米粒子為核、以枝晶狀銀鈀合金納米粒子為殼層的核殼結構的納米粒子，所述納米棒的長度為20~50nm；所述的EDC/NHS為1?(3?二甲氨基丙基)?3?乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC和N?羥基丁二酰亞胺NHS的混合溶液，所述混合溶液中EDC的濃度為0.01mol/L，NHS的濃度為0.002mol/L。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：張勇，馬洪敏，魏琴，李燕，吳丹，龐雪輝，
申請(專利權)人：濟南大學，
類型：發明
國別省市：山東;37
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。