本發明專利技術公開了一種培養動物細胞生產抗CD20抗體的方法，具體公開了其接種量、培養基配方及培養過程各控制參數。其中培養基為無血清培養基，因此在細胞培養過程中不會產生由血清帶來的副作用，更有利于抗體的提取與純化。利用本方法生產抗CD20抗體不同批次間的差異小、抗體的表達量高、生產成本低、安全性好。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了一種培養動物細胞生產抗CD20抗體的方法，具體公開了其接種量、培養基配方及培養過程各控制參數。其中培養基為無血清培養基，因此在細胞培養過程中不會產生由血清帶來的副作用，更有利于抗體的提取與純化。利用本方法生產抗CD20抗體不同批次間的差異小、抗體的表達量高、生產成本低、安全性好。【專利說明】-種生產抗CD20抗體的方法
本專利技術涉及生物制藥領域，具體涉及一種生產抗CD20抗體的方法。
技術介紹
非霍奇金淋己瘤（NHL)是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其中約85%為B細胞來源， 其發病率和死亡率已居惡性腫瘤第5位。饑正對傳統的治療方法如化療、放療、免疫調節， 有效率高，但復發率也高，再次治療緩解率低，且毒副反應大，患者耐受性差。近十余年 來，隨著抗體藥物的發展，W美羅華為代表的抗CD20單抗制劑極大改善了淋己瘤的臨床 療效。 目前，培養動物細胞制備抗體的方法中，多使用有含血清> 10%培養基才能使細 胞正常生長。然而動物血清一方面會給細胞生長提供諸如激素，抗生素，微量元素等物質， 另一方面，在補料的過程中會導致培養液PH變化大，儲存過程中容易被微生物污染，W及 不同批次的差異大，成本高。因此采用血清含量少或者無血清培養基培養動物細胞已成為 一種趨勢。
技術實現思路
本專利技術第一個目的是提供一種培養CH0細胞的培養基，所述CH0細胞其保藏號為 CCTCC NO. C201158,所述培養基包含氨基酸、無機鹽、維生素、激素及其他物質，其含量分別 為：氨基酸749?1180mg/L，無機鹽8411?10254mg/L，維生素8. 4mg/L?52. 5mg/L，激素 1. 0-5. 0E-08mg/L,其他物質 4302. 6mg/L ?9509. 6mg/L。 優選地，所述氨基酸包括L-精氨酸，L-天口冬氨酸，L-半脫氨酸，L-谷氨酸， L-谷氨醜胺，L-組氨酸，L-異亮氨酸，L-亮氨酸，L-賴氨酸，L-蛋氨酸，L-苯丙氨 酸，L -脯氨酸，L -絲氨酸，L -蘇氨酸，L -色氨酸，L -額氨酸，L -酪氨酸，L -丙氨酸 和甘氨酸； 所述無機鹽包括無水氯化巧，氯化裡，五水硫酸銅，硫酸鉛，漠化鐘，氣化軸，氯化 頌，氯化鉛? 6肥0,無水磯酸氨二軸，走水硫酸亞鐵，走水合硫酸鋒，碳酸氨軸，氯化鐘，氯化 軸，，六水合氯化鎮，氯化領，醋酸頓，硝酸銀，氯氧化鉛?細20,楓化鐘和氯化鉆?細20 ; 所述維生素包括氯化膽堿，核黃素，葉酸，維生素K3,煙醜胺，硫辛酸，維生素 B12,，維生素B6和肌醇； 所述激素為氨化可的松； 所述其他物質包括亞油酸，胸巧，腺巧，胞巧，尿巧，鳥巧，腐胺，亞砸酸軸，酵母粉， D-葡萄糖，丙麗酸軸和大豆蛋白腺。 進一步優選地，每升培養基包括下表1所示的組份： 表1本專利技術培養基 【權利要求】1. 一種培養CHO細胞的培養基，所述CHO細胞保藏號為CCTCC NO. C201158,所述培 養基包含氨基酸、無機鹽、維生素、激素及其他物質，其特征在于所述培養基組份含量為： 氨基酸749?1180mg/L，無機鹽8411?10254mg/L，維生素8. 4mg/L?52. 5mg/L，激素 L 0-5. 0E-08mg/L，其他物質 4302. 6mg/L ?9509. 6mg/L。2. 根據權利要求1所述培養基，其特征在于，所述氨基酸包括L-精氨酸，L-天門冬 氨酸，L-半胱氨酸，L-谷氨酸，L-谷氨酰胺，L-組氨酸，L-異亮氨酸，L-亮氨酸，L-賴氨酸，L -蛋氨酸，L -苯丙氨酸，L -脯氨酸，L -絲氨酸，L -蘇氨酸，L -色氨酸，L -纈氨酸，L -酪氨酸，L -丙氨酸和甘氨酸； 所述無機鹽包括無水氯化鈣，氯化鋰，五水硫酸銅，硫酸鉻，溴化鉀，氟化鈉，氯化銣，氯 化鋁·6H20,無水磷酸氫二鈉，七水硫酸亞鐵，七水合硫酸鋅，碳酸氫鈉，氯化鉀，氯化鈉，，六 水合氯化鎂，氯化鎘，醋酸鋇，硝酸銀，氯氧化鋯· 8H20,碘化鉀和氯化鈷· 6H20 ; 所述維生素包括氯化膽堿，核黃素，葉酸，維生素 K3,煙酰胺，硫辛酸，維生素 B12,，維 生素 B6和肌醇； 所述激素為氫化可的松； 所述其他物質包括亞油酸，胸苷，腺苷，胞苷，尿苷，鳥苷，腐胺，亞硒酸鈉，酵母粉，D -葡萄糖，丙酮酸鈉和大豆蛋白胨。3. 根據權利要求1所述培養基，其特征在于，每升培養基包括下表1所示的組份： 表14. 一種利用權利要求1?3任一項所述培養基培養CHO細胞生產抗⑶20抗體的方法， 該方法具體包括將CHO細胞復蘇后接種到轉瓶里培養，通過轉瓶逐級放大培養，然后將細 胞接種至5L反應器中培養。5. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，5L反應器培養階段，在培養初期到對數生 長期，控制培養溫度為36?37°C，PH為7. 1?7. 2,攪拌轉速為120?150rpm，當細胞生長 進入對數生長后期，即細胞密度達到3-4X IO6個/毫升時，調控溫度為31?33°C，PH值為 6. 9?7. 0,攪拌轉速為80?lOOrpm。6. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，復蘇后細胞接種到轉瓶里培養，接種量為 0. 3-0. 5 X IO6個細胞/毫升培養基。7. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，轉瓶培養包括IOOmL轉瓶到250mL轉瓶再 到500mL轉瓶的傳代擴增培養。8. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，轉瓶培養階段，搖床轉速為75?85rpm， 培養溫度為36?37°C。9. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，轉瓶培養到細胞總數達到LOX IO8個時， 接種至5L反應器中培養。10. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于，5L反應器培養階段，控制葡萄糖濃度 0· 5 ?3g/L，溶氧 30%-60%。【文檔編號】C12R1/91GK104513805SQ201310470054【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年10月7日 優先權日:2013年10月7日 【專利技術者】趙志全, 趙麗麗, 程凡亮, 劉增田, 張繼環 申請人:魯南制藥集團股份有限公司本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種培養CHO細胞的培養基，所述CHO細胞保藏號為CCTCC?NO.C201158，所述培養基包含氨基酸、無機鹽、維生素、激素及其他物質，其特征在于所述培養基組份含量為：氨基酸749～1180mg/L，無機鹽8411～10254mg/L，維生素8.4mg/L～52.5mg/L，激素1.0?5.0E?08mg/L，其他物質4302.6mg/L～9509.6mg/L。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙志全，趙麗麗，程凡亮，劉增田，張繼環，
申請(專利權)人：魯南制藥集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：山東;37
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