一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法技術

本發明專利技術屬于藥用活性成分的提取技術領域，特別涉及一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，該方法先將柿葉酶解，然后進行水提，再以體積比4:1:2:5的正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水作為兩相溶劑體系在高速逆流色譜儀上進行液-液色譜分離純化，制得小分子柿葉黃酮。本發明專利技術方法可制備純度高的小分子柿葉黃酮，且工藝簡單，制備成本較低。

【技術實現步驟摘要】
一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法
本專利技術屬于藥用活性成分的提取
，特別涉及一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法。
技術介紹
柿樹在我國已有三千余年的栽培史。柿樹全身是寶：果實是人們喜愛的水果；根、葉、花、果實、宿存花粵(柿蒂)等均可入藥。據文獻報道，柿葉中含有維生素C、黃酮類成分、胡蘿卜素等。由于柿葉的營養、療效作用，我國在十多年前就開發了柿葉茶，除在國內銷售外，還出口日本。臨床報道柿葉提取物用于止血，治療血小板減少性紫癜，軟化血管，防治動脈硬化、冠心病、心絞痛有明顯的生理活性。據國外雜志報道柿葉中含有大量黃酮類化合物。黃酮類化合物具有抗過敏、降血壓、抗炎、抗茴、抗腫瘤、保肝和降血脂等活性，在食品工業上可用作抗氣化劑、色素等，在醫學上可治療冠心病、腦血栓和消除自由基。眾多科研人員對于從柿葉中提取黃酮類物質的研究不計其數，如申請號為201110003597.1的中國專利技術專利公開了一種從柿葉提取含量為85～98％的柿葉黃酮的方法，它是將柿葉破碎，用2～10倍的PH＝10～14的水微波提取1～5次，每次提取10～60min，提取溫度為30～60℃，合并提取液，調節PH＝5～7，加入絮凝澄清劑，攪勻，靜置，過濾，濾液過超濾膜純化和RO反滲透膜脫水，調節濃縮液PH＝4～5，將所得濃縮液用乙酸乙酯萃取2～6次，萃取液濃縮，干燥制得。雖然柿葉黃酮含量可達到85～98％，但是制備出來的柿葉黃酮為大分子物質，相比于小分子比較人體比較難吸收。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，該方法既能夠制備小分子柿葉黃酮，且制備得到的黃酮純度高，工藝簡單。為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，包括以下制備步驟：(1)將柿葉除雜、洗凈、破碎；(2)加入柿葉重量4～7倍水，調節pH至3.5～5.0，升溫至40～55℃，然后再加入柿葉重量0.1～0.5％的復合酶，所述復合酶為果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解3～5小時，得到酶解液；(3)再將酶解液過濾，加水，回流提取2～3次，每次60～120min，每次的提取溫度都控制在90～100℃，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；(4)將正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勻，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動相；(5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于15～25倍體積的流動相中，得到樣品溶液；(6)將固定相以25～30ml/min流速裝滿色譜分離柱，以600～680rpm轉速開啟逆流色譜儀主機，將流動相以4～6ml/min流速泵入色譜柱內，待流動相平衡后，取樣品溶液通過進樣閥進樣，然后根據紫外色譜圖，在580nm波長下，收集目的組分，分別減壓蒸干，得到小分子柿葉黃酮。本專利技術步驟(2)的果膠酶和纖維素酶的重量比為2:3。柿葉中一些有效成分被以纖維素為主的細胞壁所包圍，并且這些細胞間還有果膠粘結，用果膠酶和纖維素酶復合酶充分破壞了以纖維素為主的細胞壁結構及其細胞間相連的果膠物質，將原料中的果膠完全分解成小分子物質，可制備得小分子目的成分，同時使提取傳質阻力減小，使原料中有效物質充分地釋放出來，既提高了提取率，也減少了提取時間。本專利技術步驟(3)回流提取過程中，第一次加水量為酶解液重量的6～8倍，第二次加水量為酶解液重量的5～7倍，第三次加水量為酶解液重量的4～6倍。連續進行3次水提，可以最大限度提取柿葉中的黃酮，提高黃酮提取率。本專利技術的有益效果在于：1、先將原料粉碎再酶解，縮短酶解反應時間，提高生產效率，酶解可將大分子物質分解成小分子物質，可制備出小分子柿葉黃酮。2、對酶解液進行水提三次，可以最大限度提取柿葉中的黃酮，提高提取率。3、用高速逆流色譜法進行分離純化，制備出的黃酮純度高，性能可靠，分析成本低，易于操作，設備低廉。4、本專利技術的方法工藝簡單。具體實施方式以下結合實施例對本專利技術作進一步說明，但本專利技術并不局限于這些實施例。實施例1(1)將柿葉除雜、洗凈、破碎；(2)加入柿葉重量4倍水，調節pH至3.5，升溫至40℃，然后再加入柿葉重量0.1％的復合酶，所述復合酶為重量比為2:3的果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解5小時，得到酶解液；(3)再將酶解液過濾，加入酶解液重量的6倍水，回流提取，得到第一次提取液，再加入酶解液重量的5倍水，進行第二次回流提取，得到第二次提取液，加入酶解液重量的4倍水，進行第三次回流提取，得到第三次提取液，每次提取時間為60min，每次的提取溫度都控制在90℃，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；(4)將正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勻，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動相；(5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于25倍體積的流動相中，得到樣品溶液；(6)將固定相以25ml/min流速裝滿色譜分離柱，以600rpm轉速開啟逆流色譜儀主機，將流動相以4ml/min流速泵入色譜柱內，待流動相平衡后，取樣品溶液通過進樣閥進樣，然后根據紫外色譜圖，在580nm波長下，收集目的組分，分別減壓蒸干，得到小分子柿葉黃酮。經檢測，產品純度為99.8％。實施例2(1)將柿葉除雜、洗凈、破碎；(2)加入柿葉重量5倍水，調節pH至3.9，升溫至44℃，然后再加入柿葉重量0.2％的復合酶，所述復合酶為重量比為2:3的果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解4小時，得到酶解液；(3)再將酶解液過濾，加入酶解液重量的7倍水，回流提取，得到第一次提取液，再加入酶解液重量的6倍水，進行第二次回流提取，得到第二次提取液，加入酶解液重量的5倍水，進行第三次回流提取，得到第三次提取液，每次提取時間為75min，每次的提取溫度都控制在95℃，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；(4)將正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勻，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動相；(5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于23倍體積的流動相中，得到樣品溶液；(6)將固定相以26ml/min流速裝滿色譜分離柱，以620rpm轉速開啟逆流色譜儀主機，將流動相以5ml/min流速泵入色譜柱內，待流動相平衡后，取樣品溶液通過進樣閥進樣，然后根據紫外色譜圖，在580nm波長下，收集目的組分，分別減壓蒸干，得到小分子柿葉黃酮。經檢測，產品純度為98.9％。實施例3(1)將柿葉除雜、洗凈、破碎；(2)加入柿葉重量6倍水，調節pH至4.3，升溫至48℃，然后再加入柿葉重量0.3％的復合酶，所述復合酶為重量比為2:3的果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解4小時，得到酶解液；(3)再將酶解液過濾，加入酶解液重量的7倍水，回流提取，得到第一次提取液，再加入酶解液重量的6倍水，進行第二次回流提取，得到第二次提取液，加入酶解液重量的5倍水，進行第三次回流提取，得到第三次提取液，每次提取時間為90min，每次的提取溫度都控制在95℃，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；(4)將正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勻，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動相；(5本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，其特征在于，包括以下制備步驟：(1)將柿葉除雜、洗凈、破碎；(2)加入柿葉重量4～7倍水，調節pH至3.5～5.0，升溫至40～55℃，然后再加入柿葉重量0.1～0.5％的復合酶，所述復合酶為果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解3～5小時，得到酶解液；(3)再將酶解液過濾，加水，回流提取3次，每次60～120min，每次的提取溫度都控制在90～100℃，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；(4)將正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勻，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動相；(5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于15～25倍體積的流動相中，得到樣品溶液；(6)將固定相以25～30ml/min流速裝滿色譜分離柱，以600～680rpm轉速開啟逆流色譜儀主機，將流動相以4～6ml/min流速泵入色譜柱內，待流動相平衡后，取樣品溶液通過進樣閥進樣，然后根據紫外色譜圖，在580nm波長下，收集目的組分，分別減壓蒸干，得到小分子柿葉黃酮。

【技術特征摘要】
1.一種從柿葉中提取小分子柿葉黃酮的方法，其特征在于，包括以下制備步驟：(1)將柿葉除雜、洗凈、破碎；(2)加入柿葉重量4～7倍水，調節pH至3.5～5.0，升溫至40～55℃，然后再加入柿葉重量0.1～0.5％的復合酶，所述復合酶為果膠酶和纖維素酶的混合物，酶解3～5小時，得到酶解液；(3)再將酶解液過濾，加水，回流提取3次，每次60～120min，每次的提取溫度都控制在90～100℃，合并提取液，蒸干，得到柿葉黃酮粗品；(4)將正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、水按體積比4:1:2:5混合，搖勻，靜置分層，平衡分層后，溶液分為上下相，下相作為固定相，上相作為流動相；(5)取步驟(3)得到的柿葉黃酮粗品溶解于15～25倍體積...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉小峰，何明茜，羅知頌，李京生，劉二偉，
申請(專利權)人：桂林得坤生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：廣西;45