廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)通過廣東蟲草子實(shí)體粉末對(duì)大鼠進(jìn)行慢性支氣管炎治療實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，廣東蟲草子實(shí)體對(duì)于煙熏導(dǎo)致的慢性支氣管炎有良好的改善作用，這提示廣東蟲草子實(shí)體在吸煙人群的肺部健康方面將會(huì)發(fā)揮積極有效的作用，可用于制備具有治療慢性支氣管炎功能的產(chǎn)品。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用
：本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
：慢性肺部阻塞性疾病(COPD)通常定義為最大呼氣氣量的減少的過程，而這一過程通常是不可逆的，并且是逐步惡化的。目前，90％的COPD案例都被歸入慢性支氣管炎的范疇(Sethi，1999)。慢性支氣管炎的病理癥狀及病因是十分復(fù)雜的，其中由吸煙引起的慢性支氣管炎受到極大關(guān)注(Gumpetal，1976；Xuetal，1992；Monsoetal，1999；Sethi，1999)。目前，對(duì)于蟲草在慢性支氣管炎治療方面的報(bào)道主要集中在野生冬蟲夏草及冬蟲夏草菌絲體，如其可有效擴(kuò)展支氣管及預(yù)防哮喘(ZhangandZhang，1958；王琴和趙一，1987)；也可通過增加氣管粘膜的分泌功能來緩解小鼠的咳嗽癥狀(Weietal，2002)。通過大鼠模型證實(shí)，冬蟲夏草菌絲體可以維持支氣管上皮結(jié)構(gòu)，并且可以有效地預(yù)防在慢性肺阻塞疾病過程中支氣管的發(fā)炎(劉進(jìn)等，2003；管彩虹和劉進(jìn)，2007)。冬蟲夏草能擴(kuò)張離體動(dòng)物支氣管，對(duì)氨霧致咳小鼠能延長其咳嗽潛伏期及減少咳嗽次數(shù)(徐錦堂，1997)。冬蟲夏草及其菌絲體可明顯增大乙酞膽堿誘發(fā)哮喘潛伏期差值，具平喘作用(王勤和趙一，1987)。魏濤等(2002)通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)灌服冬蟲夏草菌絲體后的大鼠肺巨噬細(xì)胞內(nèi)酶活性有明顯的提高。冬蟲夏草水提液還具有明顯的增強(qiáng)腎上腺素分泌、擴(kuò)張動(dòng)物支氣管、平喘、祛痰等作用，可對(duì)肺心病呼吸衰竭發(fā)揮輔助治療作用(楊志彬和展春，2002)。盡管冬蟲夏草效果顯著，但天然冬蟲夏草主要生長于喜馬拉雅山脈及附近的高海拔地區(qū)，且至今尚未能進(jìn)行人工栽培生產(chǎn)，資源十分稀缺。而以其菌絲體為主研制的產(chǎn)品在市場上也存在良莠不齊的現(xiàn)狀。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
：本專利技術(shù)的目的是提供廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)通過廣東蟲草子實(shí)體粉末對(duì)大鼠進(jìn)行慢性支氣管炎治療實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，廣東蟲草子實(shí)體對(duì)于煙熏導(dǎo)致的慢性支氣管炎有良好的改善作用，這提示廣東蟲草子實(shí)體在吸煙人群的肺部健康方面將會(huì)發(fā)揮積極有效的作用，可用于制備具有治療慢性支氣管炎功能的產(chǎn)品。本專利技術(shù)證明廣東蟲草子實(shí)體對(duì)于煙熏導(dǎo)致的慢性支氣管炎有良好的改善作用，提示廣東蟲草子對(duì)吸煙人群的肺部健康方面將會(huì)發(fā)揮積極有效的作用，可用于制備治療慢性支氣管炎藥物。附圖說明：圖1是廣東蟲草子實(shí)體對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重的影響，CG：廣東蟲草子實(shí)體；圖2是廣東蟲草子實(shí)體對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攝食量的影響，CG：廣東蟲草子實(shí)體；圖3是廣東蟲草子實(shí)體對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲水量的影響，CG：廣東蟲草子實(shí)體；圖4是廣東蟲草對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALF白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的影響，CG：廣東蟲草子實(shí)體；▲▲與正常對(duì)照組相比P<0.01；**與空白對(duì)照組相比P<.0.01；*與空白對(duì)照組相比P<0.05；圖5是大鼠肺組織病理切片圖(H.E×100)，依次為正常組(A)，模型組(B)，陽性對(duì)照組(C)，廣東蟲草低、中、高(D-F)劑量組；圖6是大鼠肺組織病理切片圖(H.E×200)，依次為正常組(A)，模型組(B)，陽性對(duì)照組(C)，廣東蟲草低、中、高(D-F)劑量組。具體實(shí)施方式：以下實(shí)施例是對(duì)本專利技術(shù)的進(jìn)一步說明，而不是對(duì)本專利技術(shù)的限制。實(shí)施例1：對(duì)收集到的野生廣東蟲草子實(shí)體(CordycepsguangdongensisT.H.Li,Q.Y.Lin&B.Song)表面消毒，通過常規(guī)方法進(jìn)行組織分離，獲得原始菌種。分離用培養(yǎng)基為加富PDA，配方為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：馬鈴薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O0.15％、維生素B1少許、瓊脂2％，余量為水。將原始菌種接入無菌的加富PDA斜面培養(yǎng)基中，20－25℃下，暗培養(yǎng)10－15天后，光照4-6天，選取轉(zhuǎn)色快且菌絲生長整齊的菌種，作為母種。經(jīng)多次栽培，挑選出品質(zhì)優(yōu)良的母種，在其培養(yǎng)基中增加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1％－2％的葡萄糖，進(jìn)行復(fù)壯。將經(jīng)篩選的母種接至經(jīng)滅菌的發(fā)酵液體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基配方(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：葡萄糖1％，蛋白胨0.5％，麥芽浸出粉0.3％，酵母浸膏0.3％，余量為水，pH6.0－6.5)中，并放入一個(gè)螺旋鋼絲圈，用于分散菌絲球，在25℃，140r/m，振蕩培養(yǎng)7－10天。選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2－3毫米的作為一級(jí)菌種。將一級(jí)菌種按5％－8％的比例(體積比)接入發(fā)酵液體培養(yǎng)基(配方同上)中，并放入一個(gè)螺旋鋼絲圈，用于分散菌絲球，按一級(jí)菌種的培養(yǎng)方式進(jìn)行培養(yǎng)，至菌球充滿全部液體培養(yǎng)基即可。選取菌絲球大小均勻一致、直徑為2－3毫米的作為二級(jí)菌種，直接用于栽培生產(chǎn)。栽培培養(yǎng)基由大米和營養(yǎng)液按1：1.2的比例(重量比)進(jìn)行配制混合而成，用聚乙烯耐高溫薄膜封口，經(jīng)121℃，高壓滅菌40分鐘，冷卻后即可用于接種。營養(yǎng)液配方為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：葡萄糖1％，蛋白胨0.5％，麥芽浸出粉0.3％，酵母浸膏0.3％，余量為水，pH6.0－6.5。在無菌室或超凈工作臺(tái)內(nèi)，用無菌水按1：2的比例稀釋二級(jí)菌種，再將經(jīng)稀釋的菌種接入無菌的栽培培養(yǎng)基中，每瓶接入17－22毫升。避光培養(yǎng)9－14天，待菌絲長滿培養(yǎng)基后，進(jìn)行光照培養(yǎng)，光強(qiáng)400－1000Lux，空氣相對(duì)濕度80－90％，18－25℃，經(jīng)7－12天即可長出子實(shí)體原基，再培養(yǎng)40－50天，待子實(shí)體頂部變成圓形，并出現(xiàn)顆粒狀小點(diǎn)時(shí)，即可采收。采收后的廣東蟲草子實(shí)體經(jīng)60℃烘干，粉碎后經(jīng)100目過篩后備用。取64只雄性SPF級(jí)SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d，檢疫合格后將SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對(duì)照組10只和模型組54只。正常對(duì)照組：將10只大鼠置于特制的50cm×50cm×40cm的煙室中(無須煙熏)，2次/天，每次50min，持續(xù)57d。模型組54只，平均置于特制的5個(gè)50cm×50cm×40cm的煙室中，2次/天，20g煙葉/次，每次50min，持續(xù)57d。煙熏第21d，取造模大鼠雌雄各2只，作組織病理學(xué)檢查。煙熏第31d將50只模型動(dòng)物隨機(jī)分為模型對(duì)照組、地塞米松組(0.25mg/kg)、廣東蟲草子實(shí)體低劑量組(0.325g/kg)、中劑量組(0.65g/kg)及高劑量組(1.3g/kg)，10只/組(雌雄各半)。各組灌胃給予相應(yīng)濃度的藥物，模型對(duì)照組給予等量的蒸餾水，正常對(duì)照組不給藥，連續(xù)給藥26d。末次給藥1h，頸椎脫臼處死動(dòng)物。打開胸腔結(jié)扎右肺，左肺按2ml/100gbw用0.01mol/lPBS分2次進(jìn)行肺泡灌洗，每次反復(fù)灌洗3遍。所得BALF4℃1000r/min離心10min，用預(yù)冷PBS液1ml重懸，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板做細(xì)胞計(jì)數(shù)。離心去掉上清，余液制成細(xì)胞涂片，瑞氏染色進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1、對(duì)慢性支氣管炎大鼠體重的影響模型對(duì)照組大鼠在各個(gè)測定時(shí)間點(diǎn)的體重與正常對(duì)照組比較均無顯著性差異(P>0.05)；地塞米松組大鼠在給藥第三、四周的體重與模型對(duì)照組比較具有顯著性差異(P<0.05)；其余各給藥組大鼠在各個(gè)測定時(shí)間點(diǎn)的體重與模型對(duì)照組比較均無顯著性變化(P>0.05)。結(jié)果見圖1。2、對(duì)慢性支氣管炎大鼠進(jìn)食量、飲水量的影響模型本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。

【技術(shù)特征摘要】
1.廣東蟲草子實(shí)體在制備治療慢性支氣管炎藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：閆文娟，李泰輝，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣東省微生物研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44