血液樣品收集裝置制造方法及圖紙

血液樣品收集裝置，包括采集管，其管口處設有密封膠塞，膠塞的外面設有保護帽，采集管內填充有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑、血細胞核酸穩定劑、血漿核酸穩定劑、pH緩沖液組成。所說血液抗凝劑為草酸鹽、肝素鹽、枸櫞酸鹽中的一種或多種；所說pH緩沖液為甘氨酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液中的一種；所說血細胞核酸穩定劑為尿囊素、5,5-二甲基海因、噁唑烷中的一種或多種；所述血漿核酸穩定劑為N-乙酸甲亞胺、N-(3-乙酸-戊胺)甲亞胺中的一種或多種。該血液樣品收集裝置同時含有血細胞核酸穩定劑和血漿核酸穩定劑，不含游離醛類物質，因此可常溫、長期保存血樣，同時可穩定血液樣品中游離核酸水平及維持游離核酸的完整性。

【技術實現步驟摘要】
血液樣品收集裝置
本專利技術涉及一種血液樣品收集裝置，尤其涉及一種用于穩定血液樣品中游離核酸水平及保持游離核酸完整性的血液樣品收集裝置。
技術介紹
早在1948年，血液中游離的脫氧核糖核酸(簡稱為cfDNA)就被發現了，但其在臨床醫學的應用還未超過二十年。具體地的說，cfDNA被證明存在于系統性紅斑狼瘡患者的血清中。現在對于cfDNA的研究有兩大熱點:一個是利用癌癥患者中的cfDNA明顯升高來診斷癌癥,cfDNA水平在癌癥患者的血清中明顯增高。據調查，類風濕關節炎、大腸癌、乳腺癌、胰腺癌、頭頸部癌癥患者的cfDNA濃度都明顯上升。該cfDNA提取自癌癥患者的血漿或血清，呈現出典型特征的腫瘤DNA，并且可以充當非侵入性生物標記用于癌癥檢測和管理；另一個是胎兒cfDNA在產前診斷中的應用,臨床應用涉及了胎兒cfDNA分析，包括了性別判定，單基因紊亂，妊娠相關疾病和非整倍體檢測。健康人的cfDNA濃度水平極低，平均循環濃度是30ng/ml，cfDNA通常來說是雙鏈的，大約為18～21個堿基大小。其濃度極易受到血細胞裂解、核酸酶降解等因素影響而波動。影響cfDNA的精確檢測的主要因素如下：(1)血細胞自然裂解釋放出其基因組DNA，干擾cfDNA的檢測；(2)樣品在抽取、加工過程中受機械損傷而導致細胞裂解，這導致cfDNA濃度水平增高；(3)血漿中DNA酶的存在，導致cfDNA的降解，因此cfDNA濃度水平降低。為減少細胞DNA的對血漿cfDNA的污染，減少DNA酶的降解作用，現階段主要采用如下技術：(1)選用帶有特殊添加劑的不同類型的血液樣品收集裝置，如帶抗凝血劑(EDTA、肝素、檸檬酸鹽)的采血管，以防止全血細胞凝血，減少來自白細胞的DNA釋放；(2)改善樣品存儲條件，如4℃低溫保存，抑制DNA酶的活性；(3)優化離心分離條件，以減少分離血漿過程中，血細胞裂解釋放DNA。通過以上技術處理，對cfDNA的精確檢測可得一定的改善。但是由于運輸及離心分離過程產生機械振動等因素，血細胞裂解仍然存在；在4℃低低溫情況下，DNA酶仍然具有一定的活性，血液中的核酸水平仍然存在不穩定因素，長期保存的條件下，真正的游離核酸仍然有大量損失，不利于游離核酸的精確檢測。同時現有條件下，血液采集、運輸和存儲都必須在低溫下進行，但是低溫給樣品的采集、運輸和存儲帶來了許多不便與困難，同時經濟成本較高。李勤在其碩士學位論文《體外存放和甲醛處理對孕婦血漿中胎兒DNA水平的影響的實驗研究》中介紹了一種甲醛處理血樣以減少細胞裂解、抑制DNA酶活性，以延長血液樣品體外存儲時間的方法。然而由于甲醛具有導致核酸斷裂、核酸-蛋白質交聯、核酸交聯等作用，甲醛破壞核酸結構的完整性，不利于對cfDNA的精確檢測分析。中國專利技術專利“常溫保存核酸的采集容器”(申請公布號CN103789202A；申請公布日2014.05.14)，其公開了如下的技術方案，“一種常溫保存核酸的采集容器，包括采集管和膠塞，膠塞密封在采集管的管口上，膠塞的外面設有保護帽，采集管內設置有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑及其緩沖液、防腐固定劑、核酸酶抑制劑、代謝抑制劑及細胞膜穩定劑混合而成。所述采集管是用玻璃或塑料制作；玻璃為硅硼玻璃或石英玻璃；塑料為聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚對苯二甲酸丁二醇酯(PBT)或聚萘二甲酸乙二醇酯(PEN)。所述膠塞是用橡膠制作，橡膠為丁基橡膠。所述膠塞可以用鋁塑膜替代”，該添加劑含有甲醛。因此有必要提供一種可以穩定血液樣品中游離核酸水平及保護游離核酸的完整性的血液樣品收集裝置，以消除甲醛對核酸的結構完整性的不利影響，最小化細胞核酸物質的影響，最小化運輸、存儲、加工處理條件對游離核酸水平影響，比如機械震蕩導致的DNA鏈的損傷。
技術實現思路
本專利技術目的是為了克服現有血液樣品收集裝置無法穩定血液樣品中游離核酸水平及保護游離核酸的完整性的缺陷，專利技術一種血液樣品收集裝置，該裝置可在常溫下長期保存(7～14天)血液樣品，穩定血液樣品中游離核酸水平，保護游離核酸的完整性，有利于對cfDNA的精確檢測分析。為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：血液樣品收集裝置，包括一容器，容器內設有添加劑，所述添加劑由血液抗凝劑、血細胞核酸穩定劑、血漿核酸穩定劑、pH緩沖液組成。具體的，上述血液樣品收集裝置的容器有兩種實現方案。方案一，容器包括采集管，其管口處設有密封膠塞，膠塞的外面設有保護帽。方案二，所述容器包括采集管，其管口與密封膠塞可拆的相連，膠塞的外面設有保護帽，保護帽上固定設有可截留細胞并允許血漿通過的微孔濾膜制成的膜囊。較佳的，所述的采集管由玻璃或塑料制成。較佳的，所述的玻璃為硅硼玻璃或石英玻璃；塑料為聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚對苯二甲酸丁二醇酯或聚萘二甲酸乙二醇酯中的一種。較佳的，所述膠塞由橡膠制成。更進一步的，所述的橡膠為丁基橡膠。所述膠塞可由鋁塑膜替代。較佳的，所述血液抗凝劑選自草酸鹽、肝素鹽、枸櫞酸鹽、乙二胺四乙酸鹽中的一種或多種；所述pH緩沖液為甘氨酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液中的一種；所述血細胞核酸穩定劑選自尿囊素、5,5-二甲基海因、噁唑烷中的一種或多種；所述血漿核酸穩定劑選自N-乙酸甲亞胺、N-(3-乙酸-戊胺)的一種或多種；其中，血液抗凝劑按1.0～4.0mg/ml血液的劑量添加；血細胞核酸穩定劑按0.001g～3.5g/ml血液的劑量添加；血細胞核酸穩定劑與血漿核酸穩定劑的摩爾比為1:0.01～1:5；pH緩沖液按液體血液樣品的1～5％體積百分數添加。優選技術方案為：血液抗凝劑，選用乙二胺四乙酸鹽，按2.2mg/ml血液樣品的劑量添加；血細胞核酸穩定劑與血漿核酸穩定劑的摩爾比為1:1；pH緩沖液的添加量為血液樣品體積分數2％。相比于現有技術，本技術的有益效果在于：本專利技術所述血液樣品收集裝置中含有血細胞核酸穩定劑與血漿核酸穩定劑，不含有破壞核酸完整性的游離醛類物質，因此可以常溫、長期保存(7～14天)，同時可以穩定血液樣品中游離核酸水平及維持游離核酸的完整性。該血液樣品收集裝置可用于在需要進行精確游離核酸檢測的血液樣本的采集、儲存和運輸、加工處理；保證血液樣品中游離核酸水平、游離核酸的完整性，以保證游離核酸檢測的準確性；降低了樣本采集后的儲存條件，延長了樣本的保存時間，從而節約了游離核酸檢測經濟成本，利于游離核酸檢測技術的推廣與普及；降低了血細胞因機械損傷而釋出核酸的幾率。附圖說明圖1為本專利技術所述血液樣品收集裝置的實施例1或2的結構示意圖；圖2為本專利技術實施例3的結構分解圖；其中：1、保護帽；2、膠塞；3、采集管；4、添加劑；5、膜囊。具體實施方式下面，結合附圖1、附圖2以及具體實施方式，對本專利技術做進一步描述：實施例1如圖1所示，所述血液樣品收集裝置，包括采集管3和膠塞2，膠塞2密封在采集管1的管口上，膠塞2的外面設有保護帽3，采集管1內設置有添加劑4，所述添加劑4由血液抗凝劑、血細胞核酸穩定劑、血漿核酸穩定劑組成混合而成。本實施例采用了中國專利技術專利“常溫保存核酸的采集容器”(申請公布號CN103789202A；申請公布日2014.05.14)公開的裝置，但采用的添加劑4是不同的。所述采集管3是用玻璃或塑料制作。較佳的，玻本文檔來自技高網...

【技術保護點】
血液樣品收集裝置，包括一容器，容器內設有添加劑，其特征在于，所述添加劑由血液抗凝劑、血細胞核酸穩定劑、血漿核酸穩定劑、pH緩沖液組成。

【技術特征摘要】
1.血液樣品收集裝置，包括一容器，容器內設有添加劑，其特征在于，所述添加劑由血液抗凝劑、血細胞核酸穩定劑、血漿核酸穩定劑、pH緩沖液組成，所述血液抗凝劑選自草酸鹽、肝素鹽、枸櫞酸鹽、乙二胺四乙酸鹽中的一種或多種；所述pH緩沖液為甘氨酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液中的一種；所述血細胞核酸穩定劑選自尿囊素、5,5-二甲基海因中的一種或多種；所述血漿核酸穩定劑選自N-乙酸甲亞胺、N-(3-乙酸-戊胺)甲亞胺中的一種或多種；其中，血液抗凝劑按1.0～4.0mg/ml血液的劑量添加；血細胞核酸穩定劑按0.001g～3.5g/ml血液的劑量添加；血細胞核酸穩定劑與血漿核酸穩定劑的摩爾比為1:0.01～1:5；pH緩沖液按液體血液樣品的1～5％體積百分數添加。2.根據權利要求1所述的血液樣品收集裝置，其特征在于，所述容器包括采集管，其管口處設有密封膠塞，膠塞的外面設有保護帽。3.根據權利要求1所述的血液樣品收集裝置...

【專利技術屬性】
技術研發人員：布麗斯，曾晨光，周啟明，楊習鋒，
申請(專利權)人：廣州新誠生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44