紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了紫莖女貞總苷的新應(yīng)用，特別是紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用，該紫莖女貞總苷由乙醇提取后用層析柱分離得到。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了一種紫莖女貞總苷制劑，所述制劑含有紫莖女貞總苷，以及藥用載體、輔料或稀釋劑。本發(fā)明專利技術(shù)通過一系列實驗證明紫莖女貞總苷能在體內(nèi)能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生內(nèi)源性抗病毒細(xì)胞因子，也能在體外誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒細(xì)胞因子。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及紫莖女貞總苷，具體是紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
紫莖女貞(Ligustrum?purpurascensY.C?Yang)為木樨科女貞屬植物，主要分布在我國西南地區(qū)的云南、貴州、四川等地，是民間傳統(tǒng)的藥用植物，多以植物的嫩葉或葉入藥，性味苦甘，具有疏風(fēng)清熱、明目生津功效；主治風(fēng)熱頭痛、齒痛、目赤、聤耳、口瘡、熱病煩渴、痢疾等癥，在我國民間已有兩千多年的藥用歷史。紫莖女貞主要含苯丙素苷類化合物、黃酮類化合物、萜類化合物等。其中苯丙素類化合物包括：紫莖女貞苷(ligupurpuroside)A、B、M、N，阿克苷(acteoside)，順式紫莖女貞苷(cis-ligupurpuroside)B，異阿克苷(isoacteoside)，松果菊苷(echinacoside)，松果菊苷(echinacoside)A和紫葳苷(campenoside)Ⅱ；黃酮類化合物包括槲皮素(quercentin)，金絲桃苷(hyperoside)，木犀草素-7-葡萄糖苷(leuteolin-7-glucoside)，大波斯菊苷(cosmosiin)，野漆樹苷(rhoifolin)，山柰酚(kaempferol)，異鼠李素(isorhamnetin)，煙花苷(nicotiflorin)和芹菜素(apigenin)等?？共《炯?xì)胞因子是由機體細(xì)胞分泌的，具有聯(lián)動機體固有免疫和特異性免疫應(yīng)答，進(jìn)而抑制或捕殺體內(nèi)病毒的小分子蛋白。抗病毒細(xì)胞因子可分兩大類：一類可直接作用體細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，即(1)干擾素：IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IFN-λ(IL-28、IL-29)，(2)腫瘤壞死因子：TNF-α和TNF-β；干擾素和腫瘤壞死因子可直接激活細(xì)胞內(nèi)JAK(Janus?activated?kinase)-STAT(Signal?transducer?and?activator?of?transcription)信號通路，隨后引起下游信號級聯(lián)反應(yīng)，包括MTOR信號通路、PI3K信號通路、MAPK信號通路均被激活，最終啟動細(xì)胞核中一些關(guān)鍵的蛋白基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，翻譯出抗病毒蛋白進(jìn)而對細(xì)菌、病毒以及癌細(xì)胞等產(chǎn)生防御作用。另一類是能激活巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和毒性T淋巴細(xì)胞等細(xì)胞，進(jìn)而捕殺或吞噬體內(nèi)病毒的細(xì)胞因子，即白介素：IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-27等。根據(jù)目前的資料顯示，尚未檢索到有關(guān)紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用的報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提出紫莖女貞總苷的新應(yīng)用，特別是紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用。進(jìn)一步地，所述紫莖女貞總苷按照以下方法提取而得：取木樨科女貞屬植物紫莖女貞的干葉，加入乙醇，加熱回流提取，將所得乙醇提取物用水溶解，水溶物用Diaion或大孔吸附樹脂柱層析分離，以水-乙醇或水-甲醇混合液洗脫，濃縮洗脫液得到紫莖女貞總苷。進(jìn)一步地，所述加入乙醇的量為紫莖女貞干葉重量的8～10倍。進(jìn)一步地，所述加熱回流提取的次數(shù)是三次。進(jìn)一步地，所述加熱回流提取的溫度是60～100℃。進(jìn)一步地，所述水-乙醇或水-甲醇混合液的體積比為0.5～1.5：1。進(jìn)一步地，所述水-乙醇或水-甲醇混合液的體積比為1：1。進(jìn)一步地，所述紫莖女貞總苷為淡黃色粉末，有香味，易溶于水，其水溶液為淡黃色或棕黃色。進(jìn)一步地，所述紫莖女貞總苷在薄層色譜的硅膠板上有七個斑點，比移值Rf依次為0.035，0.129，0.259，0.483，0.603，0.638，0.922。進(jìn)一步地，所述抗病毒細(xì)胞因子為IFN-α、IFN-β和IFN-γ。進(jìn)一步地，所述抗病毒細(xì)胞因子是淋巴細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞分泌的。一種紫莖女貞總苷制劑，所述制劑含有上述任一項權(quán)利要求的紫莖女貞總苷，以及藥用載體、輔料或稀釋劑，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過本領(lǐng)域?qū)I(yè)書籍獲知這些在藥學(xué)上可接受的藥用載體、輔料或稀釋劑。本專利技術(shù)紫莖女貞總苷制劑可以是膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、注射劑、滴丸、粉針劑和口服液劑中的一種。本專利技術(shù)通過實驗證明紫莖女貞總苷能在體外誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子：分離得到小鼠淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，加入不同濃度的紫莖女貞總苷，通過ELISA實驗檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中抗病毒細(xì)胞因子(IFN-α、IFN-β和IFN-γ)的水平，證明紫莖女貞總苷對淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌IFN-α，IFN-β和IFN-γ有促進(jìn)作用。當(dāng)紫莖女貞總苷濃度是50μg/ml時，紫莖女貞總苷誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分泌IFN-α和IFN-β的量達(dá)到最高，當(dāng)紫莖女貞總苷濃度是25μg/ml時，紫莖女貞總苷誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ達(dá)到最高，當(dāng)紫莖女貞總苷濃度是50～100μg/ml時，紫莖女貞總苷誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IFN-α和IFN-β的量達(dá)到最高，當(dāng)紫莖女貞總苷濃度是50μg/ml時，紫莖女貞總苷誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IFN-γ達(dá)到最高。本專利技術(shù)通過實驗證明紫莖女貞總苷能在體內(nèi)誘導(dǎo)免疫低下小鼠分泌細(xì)胞因子：將小鼠分組，用環(huán)磷酰胺造模，灌胃給予不同劑量的紫莖女貞總苷，通過ELISA實驗測定外周血中IFN-β，IFN-γ含量，證明紫莖女貞總苷對環(huán)磷酰胺引起的血清中IFN-β和IFN-γ低下具有一定的恢復(fù)作用，其中，中劑量組上調(diào)血清中IFN-β和IFN-γ水平的效果最明顯。本專利技術(shù)的有益效果是：1.本專利技術(shù)從紫莖女貞提取出總苷，并利用HPLC、TLC等手段對其進(jìn)行表征。2.本專利技術(shù)提取制備紫莖女貞總苷的方法快速有效，安全可靠，而且原料來源廣泛，適合大規(guī)模生產(chǎn)。3.本專利技術(shù)通過實驗證實紫莖女貞總苷能在體內(nèi)能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生內(nèi)源性抗病毒細(xì)胞因子，也能在體外誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒細(xì)胞因子，可以開發(fā)成治療與抗病毒細(xì)胞因子相關(guān)的疾病的制劑，其制劑是任何經(jīng)胃腸道或非經(jīng)胃腸道給藥劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、顆粒劑、注射劑、滴丸、粉針劑和口服液劑等。附圖說明圖1是實施例1紫莖女貞總苷的HPLC色譜圖；圖2是實施例1紫莖女貞總苷的薄層色譜圖；圖3是實施例2不同濃度的紫莖女貞總苷誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-α的圖；圖4是實施例2不同濃度的紫莖女貞總苷誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-β的圖；圖5是實施例2不同濃度的紫莖女貞總苷和ConA誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的圖；圖6是實施例2不同濃度的紫莖女貞總苷誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IFN-α的圖；圖7是實施例2不同濃度的紫莖女貞總苷誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IFN-β的圖；圖8是實施例2不同濃度的紫莖女貞總苷和ConA誘導(dǎo)本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用，其中所述紫莖女貞總苷按照以下方法提取而得：取木樨科女貞屬植物紫莖女貞的干葉，加入乙醇，加熱回流提取，將所得乙醇提取物用水溶解，水溶物用Diaion或大孔吸附樹脂柱層析分離，以水?乙醇或水?甲醇混合液洗脫，濃縮洗脫液得到紫莖女貞總苷。

【技術(shù)特征摘要】
1.紫莖女貞總苷誘導(dǎo)抗病毒細(xì)胞因子的應(yīng)用，其中所述紫莖女貞總苷按照以下方法提取
而得：取木樨科女貞屬植物紫莖女貞的干葉，加入乙醇，加熱回流提取，將所得乙醇提取物
用水溶解，水溶物用Diaion或大孔吸附樹脂柱層析分離，以水-乙醇或水-甲醇混合液洗脫，
濃縮洗脫液得到紫莖女貞總苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述加入乙醇的量為紫莖女貞干葉重量的
8～10倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述加熱回流提取的次數(shù)是三次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述水-乙醇或水-甲醇混合液的體積比為
0.5～1.5：1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述紫莖女貞總苷為淡黃色粉末，有香味，
易溶于水，其水溶液為淡黃色或...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：賀震旦，廖程暉，宋勛，胡小鵬，李晨陽，
申請(專利權(quán))人：深圳大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44