本發明專利技術公開了一種茶樹組織培養再生體系構建方法，涉及茶（Camellia?sinensis?L.）通過無性快繁技術獲得株性穩定茶樹種苗的技術方法。本發明專利技術以茶樹未成熟胚為外植體，經過種子消毒、胚愈傷組織誘導、分化培養、生根培養、煉苗及移栽等步驟構建了茶樹組織培養再生體系，既解決茶樹優質種苗缺乏的問題，又可為今后開展茶樹遺傳轉化工作奠定基礎。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及。
技術介紹
茶{Camellia sinensis L.)為山茶科山茶屬多年生常綠喬木或灌木,具有悠久的栽培歷史，是我國重要的經濟作物之一。茶樹喜光怕曬，喜溫怕寒，對土壤含水量有一定的要求。我國山茶屬植物資源豐富，是華南地區綠化荒山，保持水土的經濟作物。常規茶樹育種技術具有局限性，如遠緣雜交困難、有益突變頻率低、選育優良品種耗時長、花期不遇等，制約了茶樹優質資源的利用，使得茶樹品種選育工作難以取得突破性的進展。而植物組織培養技術具有加速育種進程、縮短繁殖時間、改良植物品質、節省空間、減少勞動、可終年生產、不受自然條件限制等特點，可有效解決茶樹品種選育耗時長的問題。近年來茶樹組織培養研究方面取得了一定的進展，但依然存在一些問題，如外植體褐化現象嚴重、出梢率低、生根困難、移栽大田成活率低等，使組織培養技術在茶樹中的應用受到很大的限制。因此，非常有必要建立系統的茶樹離體快繁體系，為今后對茶樹進行品質遺傳改良奠定基礎。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供出，本專利技術以茶樹未成熟胚為外植體，經過種子消毒、胚愈傷組織誘導、分化培養、生根培養、煉苗及移栽等步驟構建了茶樹組織培養再生體系，從而實現了本專利技術的目的。本專利技術的，包括以下的步驟: (O種子消毒:選擇8月份底未成熟茶果，去葉后于洗衣粉水浸泡10?30min，刷凈后自來水沖洗I?2h，取出尚未成熟的乳白或略帶棕色的種子，在超凈工作臺中，剝開外種皮，先用75%乙醇消毒5?30s后用無菌水洗3?5次，再用0.1%升汞溶液消毒10?25min，用無菌水沖洗4?6次后備用。(2)胚愈傷組織誘導:將經步驟(I)處理后未成熟種胚切成0.5cmX0.5cmX0.5cm接種到誘導培養基上，先在25?28°C條件下全暗培養30?45天，然后置于每天光照10?12小時，光照強度為1500?30001x，直至誘導形成胚性愈傷組織。(3)分化培養:將步驟(2)培養獲得的呈綠色的子葉愈傷組織轉入分化培養基上進行分化培養，接種后先在25?28°C條件下全暗培養7?14天，然后置于每天光照12?16小時，光照強度為3000?50001x，置于培養溫度為25?28°C的條件下培養直至形成叢生芽。(4)生根培養:將步驟(3)過程獲得的高度約為2.5?3.5cm的叢生芽分切接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在25?28°C條件下全暗培養7?14天，然后置于每天光照14?16小時，光照強度為2000?30001x，培養溫度為25?28°C的條件下培養至生根。(5)煉苗移栽:將步驟(4)獲得的高約6?8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質中并定植于大田中。上述步驟(2)所述的誘導培養基為:ER+6-BAl.0?3mg/L+NAA0.1?0.5mg/L+GAS3 ?5 mg/L+ 鹿糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L, pH 為 5.4 ?5.8。上述步驟(3)所述的分化培養基為:ER+6-BAl.0?5.0mg/L+IBA0.1?0.5mg/L+鹿糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L, pH 為 5.4 ?5.8。上述步驟(4)所述的生根培養基為:1/2MS+IBA0.2?1.0mg/L+GGRl.0?2.0mg/L+KT1.0 ?3.0mg/L+ 蔗糖 15 ?30g/L+ 瓊脂 3.5 ?6.0g/L, pH 為 5.4 ?5.8。與現有技術相比本專利技術的優點是:目前國內關于茶樹組培快繁技術尚未成熟，而本專利技術具有簡單、易行、經濟的特點。通過本專利技術育成的茶樹試管苗移栽成活率達到89%以上，可以有效解決茶樹種苗缺乏的問題。【具體實施方式】以下實施例是對本專利技術的進一步說明，不是對本專利技術的限制。實施例1: (I)種子消毒:選擇8月份底未成熟茶果，去葉后于洗衣粉水浸泡lOmin，刷凈后自來水沖洗lh，取出尚未成熟的乳白或略帶棕色的種子，在超凈工作臺中，剝開外種皮，先用75%乙醇消毒5s后用無菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用無菌水沖洗4次后備用，接種一周后統計污染率可低至3%。(2)胚愈傷組織誘導:將經步驟(I)處理后未成熟種胚切成0.5cmX0.5cmX0.5cm接種到誘導培養基上，先在28°C條件下全暗培養30天，然后置于每天光照10小時，光照強度為1500x，直至誘導形成胚性愈傷組織，愈傷組織誘導率為67%。所述的誘導培養基為ER+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+GA35 mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L, pH 為 5.8。(3)分化培養:將步驟(2)培養獲得的呈綠色的子葉愈傷組織轉入分化培養基上進行分化培養，接種后先在28°C條件下全暗培養7天，然后置于每天光照12小時，光照強度為30001x，置于培養溫度為28°C的條件下培養直至形成叢生芽。所述的分化培養基為ER+6-BA1.0mg/L+IBA0.lmg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L, pH 為 5.8。(4)生根培養:將步驟(3)過程獲得的高度約為2.5?3.5cm的叢生芽分切接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在28°C條件下全暗培養7天，然后置于每天光照14小時，光照強度為20001x，培養溫度為28°C的條件下培養至生根，生根率為88.3%。所述的生根培養基為 1/2MS+IBA0.2mg/L+GGRl.0mg/L+KTl.0mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L，pH 為5.8ο(5)煉苗移栽:將步驟(4)獲得的高約6?8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質中并定植于大田中，移栽成活率可達91.7%。實施例2: (I)種子消毒:選擇8月份底未成熟茶果，去葉后于洗衣粉水浸泡15min，刷凈后自來水沖洗2h，取出尚未成熟的乳白或略帶棕色的種子，在超凈工作臺中，剝開外種皮，先用75%乙醇消毒8s后用無菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用無菌水沖洗4次后備用，接種一周后統計污染率可低至5%。(2)胚愈傷組織誘導:將經步驟(I)處理后未成熟種胚切成0.5cmX0.5cmX0.5cm接種到誘導培養基上，先在28°C條件下全暗培養30天，然后置于每天光照12小時，光照強度為1500x，直至誘導形成胚性愈傷組織，愈傷組織誘導率為63%。所述的誘導培養基為ER+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA33 mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L, pH 為 5.8。(3)分化培養:將步驟(2)培養獲得的呈綠色的子葉愈傷組織轉入分化培養基上進行分化培養，接種后先在28°C條件下全暗培養7天，然后置于每天光照12小時，光照強度為30001x，置于培養溫度為28°C的條件下培養直至形成叢生芽。所述的分化培養基為ER+6-BA1.2mg/L+IBA0.5mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 瓊脂 3.5g/L, pH 為 5.8。(4)生根培養:將步本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種茶樹組織培養再生體系構建方法，其特征在于包括以下步驟：?（1）種子消毒：選擇8月份底未成熟茶果，去葉后于洗衣粉水浸泡10～30min，刷凈后自來水沖洗1～2h，取出尚未成熟的乳白或略帶棕色的種子，在超凈工作臺中，剝開外種皮，先用75%乙醇消毒5～30s后用無菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用無菌水沖洗4～6次后備用；?（2）胚愈傷組織誘導：將經步驟（1）處理后未成熟種胚切成0.5cm×0.5cm×0.5cm接種到誘導培養基上,先在25～28℃條件下全暗培養30～45天，然后置于每天光照10～12小時，光照強度為1500～3000lx，直至誘導形成胚性愈傷組織；?（3）分化培養：將步驟（2）培養獲得的呈綠色的子葉愈傷組織轉入分化培養基上進行分化培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養7～14天，然后置于每天光照12～16小時，光照強度為3000～5000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養直至形成叢生芽；?（4）生根培養：將步驟（3）過程獲得的高度約為2.5～3.5cm的叢生芽分切接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養7～14天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為2000～3000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養至生根；?（5）煉苗移栽：將步驟（4）獲得的高約6～8cm的生根試管苗去瓶蓋置于自然光照下煉苗5～7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質中并定植于大田中。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉木嬌，
申請(專利權)人：劉木嬌，
類型：發明
國別省市：廣西;45
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