一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法技術

本發明專利技術涉及一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，(1)制備不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產品；(2)采用近紅外光譜儀直接進行近紅外光譜的采集，對樣品中的水分含量進行測定；(3)對不同水分含量的樣品集進行劃分，得到用于建立模型的校正集和用于驗證模型預測能力的驗證集；(4)對比不同預處理方法及建模波段下模型的評價參數，得到最佳的預處理方法及建模波段，建立用于水分含量測定的PLS定量分析模型；(5)取待測樣品，進行近紅外光譜的采集，將得到的光譜對模型進行擬合，得到人凝血因子VIII制劑產品中水分含量值。本發明專利技術方法簡單易行、快速無損、綠色環保，特別適合凍干型人凝血因子VIII凍干成品中的水分快速測定。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種近紅外光譜分析技術快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法。
技術介紹
人凝血因子VIII(human?coagulation?factor?VIII，FVIII)是內源性凝血途徑的一種重要的凝血因子，參與凝血因子X的激活，在正常的凝血過程中發揮著無可替代的作用。人凝血因子VIII遺傳性的缺乏將導致甲型血友病，因此定期靜注人凝血因子VIII制劑是甲型血友病的主要的治療手段。目前，由于原料來源的嚴重缺乏，加之生產工藝的限制，我國人凝血因子VIII制劑嚴重短缺。目前市場上銷售的人凝血因子VIII制劑均為經過冷凍干燥得到的凍干制劑，水分是確保產品質量的一個重要參數，它的含量和存在形式對人凝血因子VIII的結構和功能影響很大，直接關系人凝血因子VIII制劑產品的穩定性。現有技術中，水分含量的測定方法一般為操作復雜、耗時耗力且具有破壞性的化學方法，不能實現制劑產品的全檢，以保證流入市場藥品的安全性和有效性。
技術實現思路
為解決現有水分含量測定方法中費時費力、具有破壞性等問題，本專利技術提供了一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，本方法簡單快速、綠色環保，且在隔著西林瓶、不破壞樣品的情況下進行樣品水分含量的測定，可實現出廠藥品的全部檢驗。本專利技術是通過以下方式實現的：一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，包括步驟如下：(1)對樣品進行冷凍干燥和解析干燥，在不同的干燥時間或溫度條件下制備得到不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產品；(2)將得到的不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產品，采用近紅外光譜儀直接進行近紅外光譜的采集，采用卡爾費休水分測定法對各樣品中的水分含量進行測定；(3)采用SPXY方法對不同水分含量的樣品集進行劃分，得到用于建立模型的校正集和用于驗證模型預測能力的驗證集；(4)對比不同預處理方法及建模波段下模型的評價參數，得到最佳的預處理方法及建模波段，建立用于水分含量測定的PLS定量分析模型；(5)取凍干后的樣品，進行近紅外光譜的采集，將得到的樣品光譜對模型進行擬合，得到人凝血因子VIII制劑產品中水分含量值。上述方法中：步驟(1)中優選的冷凍干燥時間為12h-48h，冷凍干燥溫度為-20℃，優選的解析干燥的溫度為32℃，真空度為10Pa，干燥時間為5-24h。步驟(2)中近紅外光譜儀為AntarisⅡ傅里葉變換近紅外光譜儀，近紅外光譜的采集條件為：光譜分辨率為8cm-1，掃描次數為32，光譜范圍為10000-4000cm-1，每個樣品采集3張光譜進行平均，將包裝在西林瓶中的樣品直接進行光譜的采集。步驟(3)中采用的樣品集劃分方法為sample?set?partitioning?based?on?joint?xy?distance(SPXY)法，根據2.0-2.2:1的比例進行校正集和驗證集的劃分，最終得到59個校正集樣品和29個驗證集樣品。步驟(4)中考察不同的預處理方法，預處理方法為SG?15點平滑、SNV、MSC、一階導數SG15點平滑、SNV+一階導數SG?15點平滑、或MSC+一階導數SG?15點平滑，最終得到最佳的光譜預處理方法為SNV+一階導數SG?15點平滑；對UVE、iPLS、CARS等變量選擇方法進行比較，模型結果顯示最佳的波段選擇方法為iPLS法，選擇的用于模型建立的近紅外光譜波段為7471-7660cm-1,6121-6310cm-1,4964-5153cm-1和4000-4189cm-1。步驟(5)中取凍干后的樣品，按照步驟(2)中條件進行近紅外光譜的采集，然后將得到的近紅外光譜擬合建立的最佳PLS定量分析模型，得到人凝血因子VIII制劑產品中水分含量值。本方法簡單易行、快速無損、綠色環保，在不破壞包裝和樣品的情況下能準確快速測定成品中水分含量，能夠實現產品的實時放行，對保證產品質量、提高藥品的安全性和有效性提供重要的支撐。附圖說明圖1為本專利技術采集的人凝血因子VIII成品的漫反射近紅外光譜；圖2為本專利技術經預處理后的光譜以及選擇用于數學模型建立的光譜區間；圖3為本專利技術獲得的數學模型結果圖。具體實施方式下面結合實施例對本專利技術作進一步的說明。實施例1(1)不同水分含量FVIII凍干樣品的制備：取FVIII凍干劑，每瓶加10mL注射用水溶解完全，置于-80℃超低溫冰箱預凍2h以上，-20℃條件下凍干12h-48h不等，取凍干24h以上的部分樣品，于溫度為32℃、真空度為10Pa的真空干燥箱中解析干燥5-24h不等，得到88個不同水分含量的凍干樣品。(2)采用AntarisⅡ傅里葉變換近紅外光譜儀積分球漫反射分析模塊進行近紅外光譜的采集，儀器的工作參數為：光譜掃描范圍為10000cm-1-4000cm-1，分辨率為8cm-1，光譜掃描次數為32，每個樣品采集3張光譜。近紅外漫反射光譜吸收強度設定為Log(1/R)。(3)采用SPXY方法對樣品集進行劃分，獲得校正集樣品59個，驗證集樣品29個，具體的劃分信息如表1所示。表1?樣品集劃分信息樣品集樣品數范圍(％)均值(％)標準偏差校正集590.9996-5.30312.83251.0376驗證集291.1101-5.20472.90050.9860(4)利用Matlab?2010a以及基于Matlab軟件的PLS_Toolbox軟件進行PLS模型的建立，為消除背景信息的干擾，對光譜進行預處理。在全光譜范圍內分別考察了SG?15點平滑、SNV、MSC、一階導數SG15點平滑、SNV+一階導數SG?15點平滑、MSC+一階導數SG?15點平滑對PLS模型結果的影響。利用百葉窗交互驗證(venetian?blinds?cross?validation)方法選擇最佳的潛在變量數(LVs)。PLS模型的評價參數包括相關系數(R)，交互驗證均方根誤差(RMSECV)，預測均方根誤差(RMSEP)。表2為不同預處理方法模型結果表，通過評價參數的比較，最佳的預處理方法為SNV+一階導數SG?15點平滑，經過光譜的預處理后有效的消除了光譜的基線漂移，提高的光譜的分辨率，有利于有效信息的提取。表2?不同預處理方法建模結果預處理方法RRMSECV(％)RMSEP(％)LVs無處理0.82760.71540.5339本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特征是，包括步驟如下：(1)對樣品進行冷凍干燥和解析干燥，在不同的干燥時間或溫度條件下制備得到不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產品；(2)將得到的不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產品，采用近紅外光譜儀直接進行近紅外光譜的采集，采用卡爾費休水分測定法對各樣品中的水分含量進行測定；(3)采用SPXY方法對不同水分含量的樣品集進行劃分，得到用于建立模型的校正集和用于驗證模型預測能力的驗證集；(4)對比不同預處理方法及建模波段下模型的評價參數，得到最佳的預處理方法及建模波段，利用數學處理軟件建立用于水分含量測定的PLS定量分析模型；(5)取凍干后的樣品，進行近紅外光譜的采集，將得到的樣品光譜對模型進行擬合，得到人凝血因子VIII制劑產品中水分含量值。

【技術特征摘要】
1.一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特征是，包括步驟如下：
(1)對樣品進行冷凍干燥和解析干燥，在不同的干燥時間或溫度條件下制備得到不同水
分含量的人凝血因子VIII制劑產品；
(2)將得到的不同水分含量的人凝血因子VIII制劑產品，采用近紅外光譜儀直接進行
近紅外光譜的采集，采用卡爾費休水分測定法對各樣品中的水分含量進行測定；
(3)采用SPXY方法對不同水分含量的樣品集進行劃分，得到用于建立模型的校正集和
用于驗證模型預測能力的驗證集；
(4)對比不同預處理方法及建模波段下模型的評價參數，得到最佳的預處理方法及建模
波段，利用數學處理軟件建立用于水分含量測定的PLS定量分析模型；
(5)取凍干后的樣品，進行近紅外光譜的采集，將得到的樣品光譜對模型進行擬合，得
到人凝血因子VIII制劑產品中水分含量值。
2.根據權利要求1所述的一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特征
是，步驟(1)中冷凍干燥時間為12h-48h，冷凍干燥溫度為-20℃。
3.根據權利要求1所述的一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特征
是，步驟(1)中解析干燥的溫度為32℃，真空度為10Pa，干燥時間為5-24h。
4.根據權利要求1所述的一種快速測定人凝血因子VIII成品中水分含量的方法，其特征
是，步驟(2)中近紅外光譜...

【專利技術屬性】
技術研發人員：臧恒昌，龐廣禮，仲立軍，王斐，姜瑋，李連，張惠，李燦，
申請(專利權)人：山東大學，
類型：發明
國別省市：山東;37