【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】相關申請的交叉引用根據35U.S.C.§119(e)，本申請要求2012年4月24日提交的美國臨時申請號61/637,631和2013年3月13日提交的美國臨時申請號61/779,533的權益，以引用的方式將其內容整體并入本文。
本文所述的技術涉及生產多能細胞。
技術介紹
當前獲得多能干細胞的方法主要依賴于具有受限的可得性的組織(例如，胎組織或臍帶血)或重編程因子的加入(Hanna，J.等，Cell?2008?133，250-264；Hockemeyer，D.等，Cell?stem?cell?2008?3，346-353；Kim,D.等，Cell?stem?cell?2009?4，472-476；Kim，J.B.，Nature?2009?461，649-643；Okabe，M.等，Blood?2009?114，1764-1767)，所述方法涉及引入外源性核酸。易于生產干細胞、特別是自體干細胞的方法(而無由加入外源性重編程因子引起的并發癥)，將加快細胞分化研究和基于干細胞的療法的開發。雖然推測由暴露于刺激物(如燒傷、化學損傷、創傷和輻射)導致的細胞受損可使正常體細胞變為癌細胞，然而，并無直接證據可將健康的成體體細胞轉化為其它狀態，而無需重編程因子的特定操控。研究人員之前已經報道了在成體組織內發現“成體干細胞”(Reynolds,B.A.&Weiss,S.Science?1992?255，1707-1710；M...
【技術保護點】
一種生成多能細胞的方法，所述方法包括使細胞接受應激。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2012.04.24 US 61/637,631;2013.03.13 US 61/779,5331.一種生成多能細胞的方法，所述方法包括使細胞接受應激。
2.如權利要求1所述的方法，其中，無需引入外源基因、轉錄物、
蛋白、核組分或細胞質、或者無需細胞融合而生成所述多能細胞。
3.如權利要求1-2中任一項所述的方法，所述方法進一步包括選擇
表現出多能性的細胞。
4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述細胞并不作為
組織的部分而存在。
5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述細胞是體細胞、
干細胞、祖細胞或胚胎細胞。
6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其中，所述細胞是經分離
的細胞。
7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其中，所述細胞存在于細
胞的異質群中。
8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其中，所述細胞存在于細
胞的同質群中。
9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，其中，所述選擇表現出多
能性的細胞包括對表達干細胞標志物的細胞進行選擇。
10.如權利要求9所述的方法，其中，所述干細胞標志物選自于由
Oct4、Nanog、E-鈣粘蛋白和SSEA4所組成的組。
11.如權利要求1-10中任一項所述的方法，其中，所述選擇表現出
多能性的細胞包括對不粘附的細胞進行選擇。
12.如權利要求1-11中任一項所述的方法，其中，所述應激包括在
組織或細胞培養物中的非生理性應激。
13.如權利要求1-12中任一項所述的方法，其中，所述應激包括將
細胞暴露至選自如下的至少一種環境刺激中：創傷、機械刺激、化學暴
露、超聲刺激、氧剝奪、輻射、暴露至極端溫度、解離、磨制、物理應
激、高滲透壓、低滲透壓、膜損害、毒素、極端離子濃度、活性氧、UV
暴露、強可見光、必需營養物的剝奪或非生理性酸性環境。
14.如權利要求1-13中任一項所述的方法，其中，所述應激包括將
細胞暴露至約3.0至約6.8的pH。
15.如權利要求1-14中任一項所述的方法，其中，所述應激包括將
細胞暴露至約4.5至約6.0的pH。
16.如權利要求15所述的方法，其中，所述應激包括將細胞暴露至
約5.4至約5.8的pH。
17.如權利要求12-16中任一項所述的方法，其中，將細胞暴露2-3
天。
18.如權利要求12-17中任一項所述的方法，其中，將細胞暴露1天
或更短。
19.如權利要求12-18中任一項所述的方法，其中，將細胞暴露1小
時或更短。
20.如權利要求12-19中任一項所述的方法，其中，將細胞暴露約
30分鐘。
21.如權利要求13所述的方法，其中，暴露至極端溫度包括將細胞
暴露至低于35℃或高于42℃的溫度。
22.如權利要求21所述的方法，其中，所述暴露至極端溫度包括將
細胞暴露至處于或低于冰點的溫度、或將細胞暴露至至少約85℃的溫度。
23.如權利要求13所述的方法，其中，所述機械刺激包括將細胞暴
露至剪切應力和/或高壓。
24.如權利要求23所述的方法，其中，所述機械刺激包括使細胞通
過具有小于細胞尺寸的孔的至少一個裝置。
25.如權利要求23所述的方法，其中，所述機械刺激包括使細胞通
過具有逐漸變小的孔的多個裝置。
26.如權利要求1-25中任一項所述的方法，所述方法進一步包括對
多能細胞進行培養，從而使所述多能細胞增殖。
27.如權利要求1-26中任一項所述的方法，其中，所述多能細胞表
達干細胞標志物。
28.如權利要求27所述的方法，其中，所述干細胞標志物選自于由
Oct4、Nanog、E-鈣粘蛋白和SSEA4所組成的組。
29.如權利要求1-28中任一項所述的方法，其中，所述細胞是哺乳
動物細胞。
30.如權利要求1-29中任一項所述的方法，其中，所述細胞是人細
\t胞。
31.如權利要求1-30中任一項所述的方法，其中，所述細胞是成體
細胞、新生兒細胞、胎兒細胞、羊膜細胞或臍帶血細胞。
32.如權利要求1-31中任一項所述的方法，所述方法進一步包括將
多能細胞在體外進行維持。
33.如權利要求1-32中任一項所述的方法，其中，細胞的表觀遺傳
狀態變為更加極為類似于胚胎干細胞的表觀遺傳狀態。
34.如權利要求33所述的方法，其中，所述表觀遺傳狀態包括甲基
化模式。
35.如權利要求1-34中任一項所述的方法，其中，所述應激包括將
至少約40％的細胞質從細胞中移除。
36.如權利要求35所述的方法，其中，將至少約50％的細胞質從細
胞中移除。
37.如權利要求36所述的方法，其中，將至少約60％的細胞質從細
胞中移除。
38.如權利要求37所述的方法，其中，將60％-80％的細胞質從細胞
中移除。
39.如權利要求37所述的方法，其中，將至少約80％的細胞質從細
胞中移除。
40.如權利要求39所述的方法，其中，將至少約90％的細胞質從細
\t胞中移除。
41.如權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：查爾斯·A·維坎提，馬丁·P·維坎提，小島宏司，小保方晴子，若山照彥，笹井芳樹，大和雅之，
申請(專利權)人：布里格姆及婦女醫院股份有限公司，
類型：發明
國別省市：美國;US
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