一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)的技術(shù)主要分為兩個(gè)部分，第一步：以紅根野蠶豆的種子為材料，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)培養(yǎng)基中對(duì)紅根野蠶豆進(jìn)行發(fā)芽誘導(dǎo)；第二步：將發(fā)芽長(zhǎng)到五到六厘米的紅根野蠶豆種苗以節(jié)為單位進(jìn)行切段處理，并把切好的莖段接種于誘導(dǎo)芽和根的二號(hào)培養(yǎng)基中，從而培育出紅根野蠶豆完整植株。本發(fā)明專利技術(shù)的紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法解決了紅根野蠶豆自然繁殖能力低的問(wèn)題，從而滿足了人類對(duì)紅根野蠶豆的需求。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法
本專利技術(shù)涉及一種培養(yǎng)方法，具體涉及一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法，屬于植物組織培養(yǎng)

技術(shù)介紹
紅根野蠶豆，植物界中被子植物門、雙子植物綱、玄參科、野蠶豆屬、紅根野蠶豆種，又名滑野蠶豆、大花胡麻草、小紅藥等，為玄參科植物紅根野蠶豆全草，性溫、味酸、微辛，用于散瘀止血、消腫止痛；主治咯血、咳血、吐血、婦女閉經(jīng)、內(nèi)傷瘀血、中老年人風(fēng)濕痹痛、筋骨痛、腦血栓、腦溢血、酒精肝等。作為一種名貴中藥材，現(xiàn)今由于自然繁殖能力低市場(chǎng)需求大，人類的過(guò)度采摘等原因?qū)е伦匀毁Y源稀缺，無(wú)法滿足人類對(duì)紅根野蠶豆的藥用需求。19世紀(jì)30年代，德國(guó)植物學(xué)家施萊登和德國(guó)動(dòng)物學(xué)家施旺創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說(shuō)，根據(jù)這一學(xué)說(shuō)，如果給細(xì)胞提供和生物體內(nèi)一樣的條件，每個(gè)細(xì)胞都應(yīng)該能夠獨(dú)立生活；1902年，德國(guó)植物學(xué)家哈伯蘭特細(xì)胞全能性的理論是植物組培的理論基礎(chǔ)。1958年，一個(gè)振奮人心的消息從美國(guó)傳向世界各地，美國(guó)植物學(xué)家斯蒂瓦特等人，用胡蘿卜韌皮部的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，終于得到了完整植株，并且這一植株能夠開花結(jié)果，證實(shí)了哈伯蘭特在五十多年前關(guān)于細(xì)胞全能的預(yù)言。植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細(xì)胞具有全能性這個(gè)理論，近幾十年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)無(wú)性繁殖的新技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)即植物無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，廣義又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織、器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過(guò)無(wú)菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品的技術(shù)；狹義是指用植物各部分組織，如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進(jìn)行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過(guò)程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過(guò)再分化形成再生植物。中國(guó)中藥雜志2003年12月第28卷第12期，薛建平、葛德燕等對(duì)玄參科地黃組織培養(yǎng)的研究進(jìn)行了闡述。1983年，毛文岳等人就對(duì)地黃的組織培養(yǎng)進(jìn)行了研究，其中吳美芳等人以懷地黃北京一號(hào)，新鮮的塊根為外植體進(jìn)行培育，得出完整植株；毛文岳等以地黃莖尖為外植體進(jìn)行培養(yǎng)也獲得了地黃完整植株。迄今為止國(guó)內(nèi)外對(duì)地黃、金魚草、玄參等玄參科植物組織培養(yǎng)方面都取得了顯著的成功。雖然地黃、金魚草等都是玄參科植物，現(xiàn)今國(guó)內(nèi)外對(duì)地黃、金魚草等玄參科植物組織培養(yǎng)研究也相當(dāng)成熟，但是紅根野蠶豆作為一種名貴而稀缺的中藥材，其組織培養(yǎng)在國(guó)內(nèi)外仍然是一片空白，現(xiàn)今紅根野蠶豆的繁殖方法還停留在種子土播的繁殖方式上，這種方法具有成本高、發(fā)芽率低、不易成活(成活率低于百分之一)的缺點(diǎn)。鑒于這些傳統(tǒng)的繁殖方式上的缺點(diǎn)和不足，急待研究出一套適合紅根野蠶豆組織培養(yǎng)技術(shù)，用于解決紅根野蠶豆自然繁殖能力低的問(wèn)題，從而在一定程度上滿足人類對(duì)紅根野蠶豆的需求，為中藥材發(fā)展帶來(lái)更大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。植物組織培養(yǎng)方法的專利很多，中國(guó)專利技術(shù)“一種玉米的組織培養(yǎng)方法”，申請(qǐng)?zhí)?01210011592.8通過(guò)基因改良與組織培養(yǎng)，以實(shí)現(xiàn)玉米的人工快速繁育；中國(guó)專利技術(shù)“一種草莓繼代培養(yǎng)方法”，申請(qǐng)?zhí)?01310212115.2采用低溫-常溫的培養(yǎng)條件，大幅度提高體細(xì)胞胚的成熟率，但是紅根野蠶豆組織培養(yǎng)的方法還未見(jiàn)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，提供一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法，用于解決紅根野蠶豆自然繁殖能力低的問(wèn)題。為實(shí)現(xiàn)上述專利技術(shù)的目的，本專利技術(shù)采取的技術(shù)方案如下：一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟：(1)外植體的處理和保存：將從野外采摘回來(lái)的紅根野蠶豆種子作為外植體，外植體用84消毒液的100倍稀釋液浸泡8～15分鐘，再用自來(lái)水沖洗0.5～1小時(shí)，置于干凈的玻璃器皿內(nèi)備用，未用完的放于冰箱內(nèi)保存以便日后使用；(2)外植體的滅菌：將處理過(guò)的外植體置于超凈工作臺(tái)上，用75％的酒精消毒25～35秒，再在體積濃度為0.1％的升汞中浸泡8～10分鐘后，用無(wú)菌水沖洗2～4次；(3)外植體接種：將上述滅菌過(guò)的外植體破殼接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)基采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)，并進(jìn)行封口標(biāo)記；(4)組織培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶置于25～35℃的黑暗溫室中培養(yǎng)5～8天，再置于25～35℃的光照溫室中培養(yǎng)25～40天，得到紅根野蠶豆種苗；(5)繼代培養(yǎng)：將培養(yǎng)好的平均株高5～6cm的紅根野蠶豆種苗在超凈工作臺(tái)上用接種工具以節(jié)為單位進(jìn)行切割，將切割好的莖段接種于誘導(dǎo)芽和根的培養(yǎng)基二號(hào)中，并進(jìn)行封口；將接種好的苗置于20～30℃的黑暗溫室中培養(yǎng)5～8天后，再置于25～30℃的光照溫室中培養(yǎng)30～50天，得到紅根野蠶豆的完整植株；(6)煉苗和移栽：將培養(yǎng)好的紅根野蠶豆完整植株置于溫室大棚內(nèi)進(jìn)行5～8天的煉苗后，進(jìn)行移栽。步驟(3)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)由如下成分組成：以一升計(jì)算：常量元素為：NH4NO3750～850mg、KNO3900～1000mg、Cal2·2H2O200～250mg、MgSO4·7H2O150～200mg、KH2PO4320～380mg；微量元素：KI0.80～0.85mg、H3BO36.0～6.5mg、MnSO4·4H2O22.0～22.5mg、ZnSO4·7H2O8.3～8.8mg、Na2MnO4·2H2O0.22～0.28mg、CuSO4·5H2O0.022～0.028mg、CoCl2·6H2O0.022～0.028mg、FeSO4·7H2O27.5～28mg、Na2-EDTA·2H2O37～37.5mg；有機(jī)成分：肌醇80～120mg、煙酸0.3～0.8mg、鹽酸吡哆醇(維生素B6)0.3～0.8mg、鹽酸硫胺素(維生素B1)0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、蔗糖25～35g、馬鈴薯45～55g、瓊脂3～8g、余量為蒸餾水；PH值5.8。步驟(5)所述的誘導(dǎo)芽和根的培養(yǎng)基二號(hào)由如下成分組成：以一升計(jì)算：常量元素為：NH4NO3750～850mg、KNO31800～2000mg、Cal2·2H2O420～460mg、MgSO4·7H2O320～360mg、KH2PO4650～750mg；微量元素：KI0.80～0.85mg、H3BO36.0～6.5mg、MnSO4·4H2O22.0～22.5mg、ZnSO4·7H2O8.3～8.8mg、Na2MnO4·2H2O0.22～0.28mg、CuSO4·5H2O0.022～0.028mg、CoCl2·6H2O0.022～0.028mg、FeSO4·7H2O27.5～28mg、Na2-EDTA·2H2O37～37.5mg；有機(jī)成分：肌醇80～120mg、煙酸0.3～0.8mg、鹽酸吡哆醇(維生素B6)0.3～0.8mg、鹽酸硫胺素(維生素B1)0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、矮壯素0.8～1.2g、香蕉60～80g、馬鈴薯45～55g、蔗糖25～35g、碳粉0.8～1.2g、瓊脂3～8g、余量為蒸餾水；PH值5.8。步驟(3)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)還可以用下列培養(yǎng)基：(1)MS+0～8％馬鈴薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％瓊脂，PH值5.0-6.0；(2)1/2MS+0～8％馬鈴薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％瓊脂，PH值5.0-6.0；(3)N6+0～8％馬鈴薯+0～8％椰子汁+3～5％蔗糖+0.4～0.6％瓊脂，PH值5.0-6.0。步驟(5)所述的誘導(dǎo)芽和根的培養(yǎng)基二號(hào)還還可以用如本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)外植體的處理和保存：將從野外采摘回來(lái)的紅根野蠶豆種子作為外植體，外植體用84消毒液的100倍稀釋液浸泡8～15分鐘，再用自來(lái)水沖洗0.5～1小時(shí)，置于干凈的玻璃器皿內(nèi)備用，未用完的放于冰箱內(nèi)保存以便日后使用；(2)外植體的滅菌：將處理過(guò)的外植體置于超凈工作臺(tái)上，用75％的酒精消毒25～35秒，再在體積濃度為0.1％的升汞中浸泡8～10分鐘后，用無(wú)菌水沖洗2～4次；(3)外植體接種：將上述滅菌過(guò)的外植體破殼接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)基采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)，并進(jìn)行封口標(biāo)記；(4)組織培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶置于25～35℃的黑暗溫室中培養(yǎng)5～8天，再置于25～35℃的光照溫室中培養(yǎng)25～40天，得到紅根野蠶豆種苗；(5)繼代培養(yǎng)：將培養(yǎng)好的平均株高5～6cm的紅根野蠶豆種苗在超凈工作臺(tái)上用接種工具以節(jié)為單位進(jìn)行切割，將切割好的莖段接種于誘導(dǎo)芽和根的培養(yǎng)基二號(hào)中，并進(jìn)行封口；將接種好的苗置于20～30℃的黑暗溫室中培養(yǎng)5～8天后，再置于25～30℃的光照溫室中培養(yǎng)30～50天，得到紅根野蠶豆的完整植株；(6)煉苗和移栽：將培養(yǎng)好的紅根野蠶豆完整植株置于溫室大棚內(nèi)進(jìn)行5～8天的煉苗后，進(jìn)行移栽。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種紅根野蠶豆組織培養(yǎng)方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)外植體的處理和保存：將從野外采摘回來(lái)的紅根野蠶豆種子作為外植體，外植體用84消毒液的100倍稀釋液浸泡8～15分鐘，再用自來(lái)水沖洗0.5～1小時(shí)，置于干凈的玻璃器皿內(nèi)備用，未用完的放于冰箱內(nèi)保存以便日后使用；(2)外植體的滅菌：將處理過(guò)的外植體置于超凈工作臺(tái)上，用75％的酒精消毒25～35秒，再在體積濃度為0.1％的升汞中浸泡8～10分鐘后，用無(wú)菌水沖洗2～4次；(3)外植體接種：將上述滅菌過(guò)的外植體破殼接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)基采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)，并進(jìn)行封口標(biāo)記；(4)組織培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶置于25～35℃的黑暗溫室中培養(yǎng)5～8天，再置于25～35℃的光照溫室中培養(yǎng)25～40天，得到紅根野蠶豆種苗；(5)繼代培養(yǎng)：將培養(yǎng)好的平均株高5～6cm的紅根野蠶豆種苗在超凈工作臺(tái)上用接種工具以節(jié)為單位進(jìn)行切割，將切割好的莖段接種于誘導(dǎo)芽和根的培養(yǎng)基二號(hào)中，并進(jìn)行封口；將接種好的苗置于20～30℃的黑暗溫室中培養(yǎng)5～8天后，再置于25～30℃的光照溫室中培養(yǎng)30～50天，得到紅根野蠶豆的完整植株；(6)煉苗和移栽：將培養(yǎng)好的紅根野蠶豆完整植株置于溫室大棚內(nèi)進(jìn)行5～8天的煉苗后，進(jìn)行移栽；步驟(3)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基一號(hào)由如下成分組成：(1)以一升計(jì)算：常量元素為：NH4NO3750～850mg、KNO3900～1000mg、CaCl2·2H2O200～250mg、MgSO4·7H2O150～200mg、KH2PO4320～380mg；微量元素：KI0.80～0.85mg、H3BO36.0～6.5mg、MnSO4·4H2O22.0～22.5mg、ZnSO4·7H2O8.3～8.8mg、Na2MnO4·2H2O0.22～0.28mg、CuSO4·5H2O0.022～0.028mg、CoCl2·6H2O0.022～0.028mg、FeSO4·7H2O27.5～28mg、Na2-EDTA·2H2O37～37.5mg；有機(jī)成分：肌醇80～120mg、煙酸0.3～0.8mg、鹽酸吡哆醇0.3～0.8mg、鹽酸硫胺素0.3～0.8mg、甘氨酸1～3mg、蔗糖25～35g、馬鈴薯45～55g、瓊脂3～8g、余量為蒸餾水；PH值5.8；或者為：(2)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：施恩校，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：馬關(guān)壯達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：云南;53