藏紅花內生真菌、粗多糖及其制備方法和用途技術

本發明專利技術提供了一種保藏編號為CCTCC?No.M2013473的藏紅花內生真菌（Penicillium?sp.），還提供了通過該藏紅花內生真菌制備得到的粗多糖及其制備方法和應用。本發明專利技術所制得的藏紅花內生真菌粗多糖具有很好的抗氧化性，可作為天然抗氧化劑應用于食品、醫藥和化妝品等領域。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種生物多糖及其制備方法和用途，特別是一種藏紅花內生真菌、藏 紅花內生真菌粗多糖及其制備方法和用途。
技術介紹
藏紅花（Crocus sativus L.)也稱西紅花、番紅花，系鸞尾科（Iridaceae)番紅花 屬（Crocus L )多年生草本植物。是我國一種名貴傳統中藥材。其性味甘平，具有活血化 瘀、解郁安神、增強免疫力、降低膽固醇之功效。近年來，隨著現代醫學、藥學以及分子生物 學技術的飛速發展，發現藏紅花在抗腫瘤、保護神經系統及抗心血管系統疾病等方面有良 好功效，幾乎無毒副作用。然而，藏紅花只是柱頭入藥，產量極低；又因為其資源極其有限， 致使其價格昂貴，一直被譽為"植物黃金"，難以滿足市場的需求。 植物內生真菌（Endophytic fungus)是指生活在健康植物組織和器官內部的菌， 是與宿主植物在長期共同進化過程中衍生的一類微生物。1993年美國科學家Stierle等從 短葉紅豆杉分離得到一株產新型抗癌物質紫杉醇的內生真菌，掀起了從植物中分離內生真 菌并對其藥理活性和機理研究的熱潮。至今研究表明，植物內生真菌可產生與宿主植物相 似或相同活性成分的代謝產物。內生真菌有望成為代替藥用植物的資源，從而解決部分藥 用植物資源短缺的問題。同時，內生真菌易于發酵培養，便于工業化生產。利用內生真菌發 酵實現生物活性物質的工業化生產，可以提高產品產量、降低成本，滿足市場的需求。還可 解決許多藥用植物資源被大量采伐而引起的資源和生態危機，有利于珍稀瀕危藥用植物資 源的保護。 現有技術中，Escribano 等（Escribano J.，Piqueras A.，Medina J.，et al. Production of a cytotoxic proteoglycan using callus culture of saffron corms (Crocus sativus L. ) · J. Biotechnol, 1999, 73 (I) : 53-59.)研究發現，從藏紅花 球莖分離出的一種蛋白多糖能顯著抑制體外Hela細胞的生長，對子宮上皮癌細胞也具有 顯著的細胞毒性作用。趙成剛等(趙成剛，瞿偉菁，黃一泓.西紅花花瓣粗多糖提取純化 工藝及體外抗氧化研究.食品工業，2012, 1:1-4.)對西紅花花瓣粗多糖進行了提取，證 實其對羥自由基、DPPH自由基均有一定的清除作用。 目前，對于藏紅花內生真菌方面的研究報道還非常少，且對于藏紅花內生真菌粗 多糖的開發和應用更有待人們做進一步的探索和研究。
技術實現思路
本專利技術的目的之一在于提供一種藏紅花內生真菌（Penicillium sp.)。 實現上述目的的技術方案如下。 一種藏紅花內生真菌（Penicillium sp.)，其保藏編號為CCTCC No. M2013473。 上述藏紅花內生真菌（Penicillium sp.)在制備藏紅花內生真菌粗多糖中的應 用。 本專利技術的另一目的是提供一種藏紅花內生真菌粗多糖。 具體技術方案如下。 一種藏紅花內生真菌粗多糖，其是通過保藏編號為CCTCC No. M2013473的藏紅花 內生真菌（Penicillium sp.)制備得到的。 本專利技術的另一目的是提供一種藏紅花內生真菌粗多糖的制備方法。 實現該目的的技術方案如下。 一種藏紅花內生真菌粗多糖的制備方法，包括以下步驟： (1)以PYG液體培養基對保藏編號為CCTCC NO.M2013473的藏紅花內生真菌 (Penicillium sp.)進行發酵，將發酵產物過濾，得發酵液； (2)將步驟（1)所得發酵液，經濃縮、離心、乙醇沉淀、離心、洗滌沉淀物和干燥，即 得。 在其中一個實施例中，所述步驟（2)為：將所述發酵液，濃縮，離心棄沉淀，取上清 液；上清液在攪拌下緩慢加入3倍以上(更優選為3~5倍）體積量的乙醇，靜置，離心，得 沉淀物；所述沉淀物依次用無水乙醇、丙酮洗滌，干燥，即得藏紅花內生真菌粗多糖。 在其中一個實施例中，步驟（1)中所述發酵的操作條件為：接種量：1%以上(更優 選為1~5%，V/V)，發酵溫度：25~28oC，搖床轉速：100~200r/min，發酵周期：5~10天。 在其中一個實施例中，所述PYG液體培養基的配方為：酵母浸膏0.5~1.5g，蛋白 胨1. 5~2. 5g，葡萄糖8~12g，氯化鈉1. 5~2. 5g，pH6. 8~7. 2,加去離子水至總體積 lOOOmL。 本專利技術的另一目的是提供上述藏紅花內生真菌粗多糖的應用。 具體技術方案如下。 上述的藏紅花內生真菌粗多糖在制備抗氧化劑中的應用。 上述的藏紅花內生真菌粗多糖可作為抗氧化劑在制備食品、醫藥或化妝品的應 用。 -種抗氧化劑，其活性物質包括有上述藏紅花內生真菌粗多糖。 本專利技術所述的藏紅花內生真菌（Penicillium sp.)已于2013年10月14日保藏 于國家知識產權局指定的保藏單位中國典型培養物保藏中心（CCTCC，地址：武漢大學），保 藏日期2013年10月14日，保藏編號CCTCC No. M2013473。 本專利技術具有如下有益效果： 本專利技術針對藥用植物藏紅花資源稀缺、可用成分少、培養難以擴大而導致的產量 低、價格昂貴的問題，根據植物內生真菌的共生理論，分離到一種新的藏紅花內生真菌， 再以其代謝產物為新藥源，提供了一種藏紅花內生真菌粗多糖，所得粗多糖具有顯著的 抗氧化活性，并表現出明顯的量效相關性。在l.〇〇mg/mL時，對DPPH自由基的清除率為 85. 74±0· 07% ;在 I. 600mg/mL 時，對羥自由基的清除率為 92. 80±0· 28% ;在 6. 0000mg/mL 時，對超氧陰離子自由基清除率為43. 91 ±1. 15%。并能有效地抑制大鼠紅細胞溶血及對脂 質過氧化有明顯地保護作用，能夠抑制體系中MDA的生成：在2. Omg/mL時，對大鼠紅細胞溶 血抑制率為56. 14±4. 35%，對MDA生成抑制率為59. 86 ±5. 43%。試驗結果表明，藏紅花內 生真菌粗多糖具有清除自由基及抑制脂質過氧化的作用，是一種天然的抗氧化劑，可應用 于食品、醫藥和化妝品等領域。 本專利技術還提供了所述藏紅花內生真菌粗多糖的制備方法，利用內生真菌發酵實現 該生物活性物質的工業化生產，可以提高產量、降低產品成本，滿足市場的需求。【附圖說明】 圖1是本專利技術所述內生真菌的菌落正面。 圖2是本專利技術所述內生真菌的菌落背面。 圖3是本專利技術所述內生真菌的顯微結構（200倍)。 圖4為實施例2中，不同濃度的藏紅花內生真菌粗多糖對DPPH自由基清除作用的 試驗結果。 圖5為實施例2中，不同濃度的藏紅花內生真菌粗多糖對羥自由基清除作用的試 驗結果。 圖6為實施例2中，不同濃度的藏紅花內生真菌粗多糖對超氧陰離子自由基清除 作用的試驗結果。 圖7為實施例2中，不同濃度的藏紅花內生真菌粗多糖對大鼠紅細胞氧化性溶血 抑制作用的試驗結果。 圖8為實施例2中，不同濃度的藏紅花內生真菌粗多糖對大鼠紅細胞MDA生成的 抑制作用的試驗結果。【具體實施方式】 下面結合附圖和具體實施例對本專利技術作進一步的詳細說明。 實施例1 本實施例是藏紅花內生真菌粗多糖的制備方本文檔來自技高網...

【技術保護點】
藏紅花內生真菌（Penicillium?sp.），其特征在于，其保藏編號為CCTCC?No.M2013473。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：溫露，陳鋼，韋啟球，
申請(專利權)人：溫露，
類型：發明
國別省市：廣東;44