本發明專利技術涉及脂質裝配體，具有包含陰離子部分和陽離子部分的混合物的外表面的脂質體；其中所述陽離子部分的至少一部分為在生理條件下基本上帶電荷的亞氨基部分，及其在細胞的抗血清轉染中的應用。
【技術實現步驟摘要】
【專利說明】 本申請是申請日為2010年7月2日、專利技術名稱為"包含亞氨基脂質的兩性脂質體" 的第201080031041. 7號中國專利申請的分案申請。
本專利技術涉及能夠克服脂蛋白介導的攝取阻滯的脂質裝配體（assembly)或脂質 體。更具體地，本專利技術涉及脂質體或其衍生物在各極性區域的改善，所述脂質體既包含具有 羧酸或磷酸頭基的帶負電荷的脂質也包含具有亞氨基或胍基的帶正電荷的脂質。
技術介紹
脂質體作為活性成分的載體具有廣泛的應用。中性的或帶負電荷的脂 質體通常用于小分子藥物的遞送，而帶正電荷的（陽離子）或近期引進的兩性類 脂質體主要用于核酸例如質粒或寡核苷酸的遞送。用于遞送核酸"貨物"的陽離 子脂質體的重要實例包括但不限于Semple等，Nat. BiotecL (2010) 28:172-176 ; Akinc 等，Nat. Biotech. (2008)26:561-569 ;Chien 等，Cancer Gene Ther. (2005) 12:321-328 ；de Fougerolles, Nat. Rev.Drug Discov. (2007)6:443-453 ；Kim 等，Mol. Ther. (2006) 14:343-350 ;Morrissey，Nat.Biotech. (2005)23:1002-1007; Peer, Science (2008) 319:627-630 和 Santel, Gene Ther. (2006) 13:1222-1234。兩性脂質 體用于遞送核酸的應用已在Andreakos等，Arthritis Rheum. (2009)60:994-1005中證明。 兩性脂質體屬于較大一類的pH敏感性脂質體，該類還包括PH-敏感性陰離子或陽 離子脂質體，其原型已不于 Lai 等，Biochemistry (1985) 24:1654-1661 和 Budker 等，Nat. Biotech. (1996) 14:760-764中。與pH-敏感性陰離子或陽離子脂質體不同，兩性脂質體為 復雜結構并且包含至少一對具有互補電荷的脂質。W002/066012公開了兩性脂質體的關鍵 特征在于這些脂質體在低pH和中性pH下都具有穩定相。W002/066012和W007/107304描 述了自低PH下開始使此類顆粒負荷核酸的方法。 Hafez 等（Biophys. J. 2000, 79(3)，1438-1446)和 WO 02/066012 提供了 關于如 何選擇具有真正兩性性質的脂質混合物的指導，更具體地，提供了關于如何確定它們的等 電點和融合開始的指導。中性脂質可以為兩性脂質體的額外成分。一種或多種此類中性 脂質的引入顯著增加了混合物的復雜度，特別是由于所有成分的單獨的量都可能變化。 脂質體的極大數量的可能組合顯示出更快速地優化兩性脂質體的實踐障礙。就此而言， W008/043575揭示出優化兩性脂質體的穩定性、融合性（fusogenicity)和細胞轉染的策 略，特別是預測何種脂質體混合物在高PH和低pH下形成令人滿意的穩定層狀相，同時在中 間PH下形成融合性的六邊形相的方法。 根據上述參考文獻的兩性脂質體是有效的細胞轉染子。然而，觀察到通過添加某 種血清而能夠阻滯這些脂質體中的一些的功能，由此可能限制了這些脂質體體內靶向某種 細胞的活性。這進一步在本文中所示的實施例（例如實施例3)中進行了說明。 在不同血清中觀察到的兩性脂質體的攝取的抑制顯然與近期公開的通過與脂蛋 白形成復合物而活化陽離子載體（如Akinc等，Mol. Ther. (2010)，印刷之前于5月11日 電子公開，DOI: 10. 1038/mt. 2010. 85所證明的，在此情況下脂蛋白為ApoE)相反。 更詳細的研宄揭示了脂蛋白介導此抑制作用。如本文中實施例4所述，根據 SiRNA至受刺激細胞的功能遞送表明缺乏脂蛋白的人血清不能夠再抑制脂質體的攝取。 目前，專利技術人已出人意料地發現某類陽離子脂質與在極性頭基中具有羧基或磷酸根的陰 離子脂質的組合在存在血清的情況下在保持轉染活性方面是特別有利的。當根據本文和 W008/043575中描述的方法配制由所述脂質混合物產生的脂質裝配體或脂質體時，經常觀 察到特別的益處。 專利技術目的因此，專利技術的目的是提供可以在存在各種血清的情況下轉染細胞的脂質裝配體或 脂質體。 專利技術的另一個目的是提供包含此類脂質體的藥物組合物，所述脂質體作為用于將 活性劑或活性成分遞送至細胞或組織的載體，所述活性劑或活性成分包括藥物例如核酸藥 物，如寡核苷酸或質粒。 專利技術概述 本專利技術提供了脂質裝配體、脂質體及其用于細胞轉染的應用，其中所述脂質裝配 體包含陰離子和陽離子兩性分子并且其中陽離子兩性分子的至少一部分是在PH 7. 5下基 本上（substantially)帶電荷的亞氨基脂質，其中陰離子兩性分子是羧基脂質或磷酸脂質 (phosphate lipid)，并且此外其中陽離子和陰離子兩性分子之間的電荷比例是1. 5或更 低。 在本專利技術的各實施方案中，提供了包含陰離子和陽離子兩性分子的脂質裝配體， 其中陽離子兩性分子的至少一部分是在生理條件下基本上帶電荷的亞氨基脂質，此外其中 陰離子兩性分子的至少一部分是羧基脂質，并且其中陽離子和陰離子兩性分子之間的比例 小于或等于1. 5。 在本專利技術的更具體的方面中，提供了包含脂質的組合的脂質裝配體，其中所述組 合的陽離子脂質包含胍基部分且所述組合的陰離子脂質包含羧基基團，進一步的特征在于 胍基部分和羧基基團的比例小于或等于1. 5。 在本專利技術的其他實施方案中，提供了包含陰離子和陽離子兩性分子的脂質裝配 體，其中陽離子兩性分子的至少一部分是在生理條件下基本上帶電荷的亞氨基脂質，此外 其中陰離子兩性分子的至少一部分是磷酸脂質，并且其中陽離子兩性分子和陰離子兩性分 子之間的比例小于或等于1. 5。在這樣的實施方案的進一步優選的方面，亞氨基脂質為胍基 脂質。 本專利技術的陽離子兩性分子的帶電荷的亞氨基基團的PK大于7. 5,并且選自亞胺、 脒、吡啶、2-氨基吡啶、雜環氮基、胍基部分、異脲或硫代異脲。在優選的實施方案中，陽離子 脂質選自 PONA、CHOLGUA、GUADACA、MPDACA 或 SAINT-18。 在優選的實施方案中，所述陰離子脂質選自0^1^、01^^、0065、00?4或？0?八。 在許多實施方案中，本專利技術的脂質裝配體是脂質體。 在進一步的實施方案中，脂質裝配體還包括中性脂質例如膽固醇、磷脂酰膽堿、磷 脂酰乙醇胺或鞘磷脂或其混合物。 在優選的實施方案中，中性脂質是膽固醇并且脂質混合物中的膽固醇的摩爾分數 在10摩爾％和50摩爾％之間。...
【技術保護點】
包含以下結構的化合物：其中m為0，n為0，D為?C(O)?NH?，R1?A?為油基，R2?B?為具有8至24個碳原子和一個或兩個不飽和鍵的烷基，且帶電荷的亞氨基為氨基乙基、胍基乙基、吡啶?4?基、吡啶?4?基?甲基、N?甲基吡啶?4?基、N?甲基吡啶?4?基?甲基、
【技術特征摘要】
...
【專利技術屬性】
技術研發人員：斯特芬·潘茨納，埃夫耶尼奧斯·謝皮，
申請(專利權)人：瑪瑞納生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：美國;US
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