一種蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)的制備方法及其在制備抗食道癌藥品中的應(yīng)用，所述蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)制備方法如下：將蝎子蛆蟲在常溫膨化裝置中膨化粉碎；然后加入到膨脹溶劑體系提取裝置中提取出蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品；收集含有蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液并用微孔過濾器過濾去掉雜質(zhì)；用超濾機(jī)超濾處理，收集蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液；超濾液溶解在乙腈中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分；將洗脫成分溶解在溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜分離純化；用真空冷凍干燥機(jī)制備成凍干蛋白粉，可用于制備抗食道癌藥品。本技術(shù)方案中分離的純化壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)為非均一蛋白質(zhì)；相對分子量為10.6~11.8KPa；等電點(diǎn)為pH8.9~9.6；不含糖基；純化的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)含量為98.2%。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種藥品的制備方法及其新用途，尤其是一種蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)的制備 方法及其在制備抗食道癌藥品中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
食管癌又稱食道癌，是發(fā)生于食管黏膜交界部的惡性腫瘤。中醫(yī)認(rèn)為該癥的病理 病機(jī)是由于暴怒憂思、傷及肝脾，脾傷則氣結(jié)，氣結(jié)則津液不能輸流，阻而成痰，肝傷則氣 郁，氣郁則血液不能暢行，遂而為瘀，瘀痰阻塞食道，結(jié)聚胃腑，故食物難于下行。 西醫(yī)認(rèn)為目前食管癌的發(fā)病原因尚不明確，一般認(rèn)為食管癌的發(fā)生與一系列致癌 因子有關(guān)，很多致癌因子作用于宿主后，從而導(dǎo)致食管癌的發(fā)生。該過程使一個(gè)多因素、多 階段、多基因參與的復(fù)雜過程。 通常的治療采用手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)藥物治療。中醫(yī)藥治療一般將食管癌歸 納為痰氣交阻型、津虧熱結(jié)型、瘀血內(nèi)結(jié)型、氣虛陽微型等不同種類的病癥，分別治療。 CN102861190A公開了一種治療食管癌的中藥方，該方劑由桃仁、杏仁、桔梗、法半 夏、準(zhǔn)牛膝、代赭石、旋復(fù)花、瓜萎、川樸、牛蒡子、萊菔子、丹參等十七味中藥組成。 CN103393856A公開了一種醫(yī)治食管癌制劑的制備方法，該專利技術(shù)以蟾皮、蜈蚣、土蜂 蜂子、木鱉子、大一支箭、烏藥、仙人掌、齒砂、海藻、白英等中草藥組成，經(jīng)加工制成制劑。 CN101797340A公開了一種用于治療食管癌的組合藥物及其制備方法，該專利技術(shù)以九 種中草藥組成方劑，經(jīng)粉碎、混合、過篩，所收集粉末用蜂蠟混合配制成型，制成顆粒制劑。 CN102441165A公開了一種單克隆抗體用于治療食管癌的用途，該專利技術(shù)涉及一種抗 表皮生長因子受體的單克隆抗體在治療食管癌方面的用途，尤其是人源化單克隆抗體-尼 妥珠單抗。 CN102649963A公開了可用于食管癌防治的基于HPVLl基因的重組腺病毒，該專利技術(shù) 提供了一種優(yōu)化型的編碼HPV18型主要衣殼蛋白Ll的基因序列以及含有其的復(fù)制缺陷型 重組HPV18L1腺病毒疫苗，并提供了制備上述重組腺病毒的方法。 201210315708. 7公開了人工培育蝎子蛆蟲的方法，該專利技術(shù)以蝎子軀體等為原料， 經(jīng)多個(gè)步驟定向培殖蝎子蛆蟲，培殖過程可控，培養(yǎng)基組成合理，培殖的蝎子蛆蟲成分既消 除了蝎子具有的毒性，又具有特殊的生物活性功能。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)的制備方法及其在制備抗食道癌藥品 中的應(yīng)用，采用蝎子蛆蟲為原料，通過一系列的工藝條件分離純化成為蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)，制 備成八項(xiàng)給藥系統(tǒng)，具有藥效高、一致性好的特點(diǎn)。 本專利技術(shù)的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： (1)將1000 g蝎子蛆蟲在常溫膨化裝置（200520108339.X)中常溫條件下膨化粉碎。 本步驟中，所述膨化壓力為0? l~5MPa，時(shí)間為10~60min。 (2)膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中，加入 膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品。 本步驟中，所述膨脹溶劑由l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O組成或由l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組 成。 本步驟中，所述提取溫度為10~20°C，時(shí)間為10~30min。 (3)收集含有蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質(zhì)。 本步驟中，所述微孔過濾器的孔徑為0. 5~50Mm。 (4)用超濾機(jī)超濾處理，收集含有相應(yīng)分子量的蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液。 本步驟中，所述超濾機(jī)的孔徑為50~100nm。 (5)超濾液溶解在適宜的溶劑中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分。 本步驟中，所述溶劑為乙腈。 (6)將洗脫成分溶解在合適的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜 (200920274485. 8)分離純化。 本步驟中，所述溶劑體系由正丁醇-乙酸乙酯-水(體積比1. 25:3. 75:5)組成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）組成。 (7)純化后的蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)制備成凍干蛋白粉。 本步驟中，所述真空冷凍干燥溫度為_30~50°C、時(shí)間為18~26h。 (8)賦予不同的藥用輔助材料，分別制備成注射劑、口服靶向給藥系統(tǒng)等，可用于 制備抗食道癌藥品。 本技術(shù)方案中分離的純化壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳、雙向聚丙烯酰 胺凝膠電泳及瓊脂聚糖免疫電泳譜上測得非均一蛋白質(zhì)；用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法 及葡聚糖凝膠G-75凝膠過濾法測得相對分子量為10. 6~11. SKPa ;用等電聚焦發(fā)測定其等 電點(diǎn)為PH8. 9~9. 6 ;常規(guī)化學(xué)法分析結(jié)果表明其不含糖基；紫外分光光度法測定純化的壁 虎蛆蟲蛋白質(zhì)含量為98. 2%。【具體實(shí)施方式】 下面結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)的技術(shù)方案作進(jìn)一步的說明，但并不局限如此，凡是對 本專利技術(shù)技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本專利技術(shù)技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵 蓋在本專利技術(shù)的保護(hù)范圍中。 實(shí)施例1: (1) 將1000 g蝎子蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置（200520108339. X)中，對膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至0. l~5MPa，時(shí)間10~60min，然后迅速釋放壓力至常壓，蝎子蛆 蟲被膨化成粉體； (2) 膨化粉碎后的蝎子蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中， 加入l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3 ? H2O,加壓至2~10MPa，形成膨 脹溶劑體系，保持溫度l〇~20°C，時(shí)間10~30min，蝎子蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解，然后降壓 至常壓，生成蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品與甲醇-NH 3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液，用孔徑0. 5~50Mm的微孔過濾器過濾去處固 體雜質(zhì)； (4) 溶液用孔徑50~100nm的超濾機(jī)超濾處理，壓力0. 3~0. 8MPa，溫度為常溫，收集含有 相應(yīng)分子量的蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液； (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化預(yù)處理，加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱，常溫下用10~80%的 乙腈梯度脫洗，流速l~l〇mL/min，收集相關(guān)梯度的洗脫成分； (6) 將洗脫成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶劑體系中，用超聲駐 波液相制備色譜（200920274485. 8)分離純化，超聲波功率0. 2~3. 0KW，頻率500~1000KHz， 流速50~500mL/min，紫外檢測器波長260~280nm ; (7) 純化后的蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在溫度-30~501：、時(shí)間18~2611干燥制 備成凍干蛋白粉。 實(shí)施例2: (1) 將1000 g蝎子蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置（200520108339. X)中，對膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至0. l~5MPa，時(shí)間10~60min，然后迅速釋放壓力至常壓，蝎子蛆 蟲被膨化成粉體； (2) 膨化粉碎后的蝎子蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中， 加入5Kg液態(tài)二氧化碳、300mL甲醇及200gNH3 ? 本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)的制備方法，其特征在于所述制備方法步驟如下：（1）將1000g蝎子蛆蟲在常溫膨化裝置中常溫條件下膨化粉碎；（2）膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置中，加入由1~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3·H2O組成或由1~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組成的膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品；（3）收集含有蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質(zhì)；（4）用超濾機(jī)超濾處理，收集蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液；（5）超濾液溶解在乙腈中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分；（6）將洗脫成分溶解在由正丁醇?乙酸乙酯?水按體積比1.25:3.75:5組成或由聚乙二醇?葡聚糖T500按重量比4.5:7組成的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜分離純化；（7）純化后的蝎子蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)制備成凍干蛋白粉。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐華民，趙榮華，
申請(專利權(quán))人：哈爾濱工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：黑龍江;23
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