本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)在制備抗淋巴癌藥品中的應(yīng)用，所述壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)制備方法如下：將壁虎蛆蟲在常溫膨化裝置中膨化粉碎；然后加入到膨脹溶劑體系提取裝置中提取出壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品；收集含有壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液并用微孔過濾器過濾去掉雜質(zhì)；用超濾機(jī)超濾處理，收集壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液；超濾液溶解在乙腈中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分；將洗脫成分溶解在溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜分離純化；用真空冷凍干燥機(jī)制備成凍干蛋白粉，可用于制備抗淋巴癌藥品。本發(fā)明專利技術(shù)分離的純化壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)為非均一蛋白質(zhì)，相對(duì)分子量為10.9~12.6KPa，等電點(diǎn)為pH8.8~10.2，不含糖基，純化的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)含量為96.7%。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)的新用途，尤其是壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)在制備抗淋巴 癌藥品中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
惡性淋巴癌是原發(fā)于淋巴結(jié)或淋巴結(jié)外組織或器官的惡性腫瘤，根據(jù)臨床病理特 點(diǎn)可以劃分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。一般認(rèn)為惡性淋巴瘤起源于淋巴細(xì)胞及其 前體細(xì)胞，病毒和細(xì)菌感染、免疫缺陷、環(huán)境致癌物、電離輻射和遺傳等都可能是惡性淋巴 瘤的病因。 現(xiàn)在的治療方法采用化療、靶向治療、造血干細(xì)胞移植、干擾素等。 CN103667466A公開了一種用于B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤及其耐藥性檢測(cè)的標(biāo)志物。 該標(biāo)志物為采用實(shí)時(shí)定量PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物，可以通過標(biāo)志物檢測(cè)其表達(dá)水平與疾病進(jìn)展之 間的相關(guān)性。 CN101757558A公開了一種治療惡性淋巴腫瘤的中草藥制劑及其制備方法。該藥劑 由藿香、紅花、山豆根、三棱、莪術(shù)、貓布草、桃仁、白花、蛇舌草、川烏、草烏、蜈蚣、全蟲等19 種中草藥組成制備成散劑、煎劑、丸劑，用于治療淋巴腫瘤。 CN101007158公開了一種治療惡性腫瘤的中藥組合物，該組合物是由靈脂、沒藥、 乳香、三棱、莪術(shù)、蒲公英、藿香、紫河車、水蛭、蟾蜍、壁虎、雙花、皂刺、連翹、大青葉等組成。 CN102861236A公開了一種純中藥抗腫瘤制劑，該制劑是由黃精、靈芝、三七、桃仁、 葛根、牡蠣、石耳、枸杞子、半枝蓮、白花蛇舌草等13種中草藥組成。 201210315707. 2公開了人工培殖壁虎蛆蟲的工藝，該專利技術(shù)以壁虎等為原料，配制 成適宜的培養(yǎng)基，培殖出藥用壁虎蛆蟲，該蟲體具有較高生物活性，可以抗淋巴癌。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種，根據(jù)淋 巴癌的病灶特性及壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)生物活性特點(diǎn)，兩者相結(jié)合制備的藥劑具有適應(yīng)性強(qiáng)、 療效好的特點(diǎn)。 本專利技術(shù)的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： (1)將1000 g壁虎蛆蟲在常溫膨化裝置（200520108339. X)中常溫條件下膨化粉碎。 本步驟中，所述膨化壓力為0? l~5MPa，時(shí)間為10~60min。 (2)膨化粉碎后的物料加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中，加入 膨脹溶劑并加壓至2~10MPa，形成膨脹溶劑體系，提取出壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品。 本步驟中，所述膨脹溶劑由l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O組成或由l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化銨組 成。 本步驟中，所述提取溫度為10~20°C，時(shí)間為10~30min。 (3)收集含有壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液并且用微孔過濾器過濾去掉雜質(zhì)。 本步驟中，所述微孔過濾器的孔徑為0. 5~50Mm。 (4)用超濾機(jī)超濾處理，收集含有相應(yīng)分子量的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液。 本步驟中，所述超濾機(jī)的孔徑為50~100nm。 (5)超濾液溶解在適宜的溶劑中用固相萃取柱分離，收集洗脫成分。 本步驟中，所述溶劑為乙腈。 (6)將洗脫成分溶解在合適的溶劑體系中，用超聲駐波液相制備色譜 (200920274485. 8)分離純化。 本步驟中，所述溶劑體系由正丁醇-乙酸乙酯-水(體積比1. 25:3. 75:5)組成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）組成。 (7)純化后的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)制備成凍干蛋白粉。 本步驟中，所述真空冷凍干燥溫度為_30~50°C、時(shí)間為18~26h。 (8)賦予不同的藥用輔助材料，可用于制備抗淋巴癌藥品。 本技術(shù)方案中分離的純化壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳、雙向聚丙烯酰 胺凝膠電泳及瓊脂聚糖免疫電泳譜上測(cè)得非均一蛋白質(zhì)；用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法 及葡聚糖凝膠G-75凝膠過濾法測(cè)得相對(duì)分子量為10. 9~12. 6KPa ;用等電聚焦發(fā)測(cè)定其等 電點(diǎn)為PH8. 8~10. 2 ;常規(guī)化學(xué)法分析結(jié)果表明其不含糖基；紫外分光光度法測(cè)定純化的壁 虎蛆蟲蛋白質(zhì)含量為96. 7%。【具體實(shí)施方式】 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)的技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不局限如此，凡是對(duì) 本專利技術(shù)技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本專利技術(shù)技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵 蓋在本專利技術(shù)的保護(hù)范圍中。 實(shí)施例1: (1) 將1000 g壁虎蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置（200520108339. X)中，對(duì)膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至0. l~5MPa，時(shí)間10~60min，然后迅速釋放壓力至常壓，壁虎蛆 蟲被膨化成粉體； (2) 膨化粉碎后的壁虎蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中， 加入l~10Kg液態(tài)二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3 ? H2O,加壓至2~10MPa，形成膨 脹溶劑體系，保持溫度l〇~20°C，時(shí)間10~30min，壁虎蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解，然后降壓 至常壓，生成壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品與甲醇-NH 3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液，用孔徑0. 5~50Mm的微孔過濾器過濾去處固 體雜質(zhì)； (4) 溶液用孔徑50~100nm的超濾機(jī)超濾處理，壓力0. 3~0. 8MPa，溫度為常溫，收集含有 相應(yīng)分子量的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液； (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用50~100%乙腈活化預(yù)處理，加 0. 02~0. 1%三氟乙酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱，常溫下用10~80%的 乙腈梯度脫洗，流速l~l〇mL/min，收集相關(guān)梯度的洗脫成分； (6) 將洗脫成分溶解在4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比)溶劑體系中，用超聲駐 波液相制備色譜（200920274485. 8)分離純化，超聲波功率0. 2~3. OKW，頻率500~1000KHz， 流速50~500mL/min，紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)260~280nm ; (7)純化后的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)用真空冷凍干燥機(jī)在溫度-30~501：、時(shí)間18~2611干燥制 備成凍干蛋白粉。 實(shí)施例2: (1) 將1000 g壁虎蛆蟲干燥品裝入常溫膨化裝置（200520108339. X)中，對(duì)膨化裝置內(nèi) 充入二氧化碳?xì)怏w并加壓至0. l~5MPa，時(shí)間10~60min，然后迅速釋放壓力至常壓，壁虎蛆 蟲被膨化成粉體； (2) 膨化粉碎后的壁虎蛆蟲粉體加入到膨脹溶劑體系提取裝置（201210179076. 6)中， 加入5Kg液態(tài)二氧化碳、300mL甲醇及200gNH3 ? H2O,加壓至5MPa，形成膨脹溶劑體系，保持 溫度15°C，時(shí)間20min，壁虎蛆蟲粉體中的蛋白質(zhì)溶解，然后降壓至常壓，生成壁虎蛆蟲蛋 白質(zhì)粗品與甲醇-NH 3 ? H2O的混合液； (3) 收集含有壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)粗品的溶液，用孔徑30Mm的微孔過濾器過濾去處固體雜 質(zhì)； (4) 溶液用孔徑IOOnm的超濾機(jī)超濾處理，壓力0. 5MPa，溫度為常溫，收集含有相應(yīng)分 子量的壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)超濾溶液； (5) 超濾溶液用20%乙腈溶解，C18固相萃取柱用80%乙腈活化預(yù)處理，加0. 05%三氟乙 酸-水平衡，用10%乙腈溶液溶解的超濾溶液上柱，常溫下用1〇~80%的乙腈梯度脫洗，流速 5mL/min，收集相關(guān)梯度的洗脫本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種壁虎蛆蟲蛋白質(zhì)在制備抗淋巴癌藥品中的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐華民，趙榮華，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：哈爾濱工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：黑龍江;23
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