一種阿魏菇多糖提取與純化的方法技術

本發明專利技術公開了一種阿魏菇多糖提取與純化的方法.將阿魏菇子實體粉碎過40目篩,與80%乙醇料液比1：10—1:15，在80℃回流4h，濾除乙醇，殘渣減壓蒸發至干后與水以料液比1：15混合后經超聲微波萃取，在超聲功率50W，提取溫度70℃，微波頻率2450MHz，功率70W，提取15min。濾液離心過濾后殘渣再次超聲微波提取，合并兩次濾液，離心取上清液去除雜后，多糖粗提液過聚酰胺層析柱吸附純化：聚酰胺用量粗多糖5倍體積，洗脫液為2倍柱體積去離子水，洗脫速度1.5ml/min，濃縮真空干燥得到純化后阿魏菇多糖。本發明專利技術工藝路線簡單，能耗低，顯縮短提取時間，提高提取率，產物純度高，生物活性好，質量穩定。

【技術實現步驟摘要】
一種阿魏菇多糖提取與純化的方法
本專利技術涉及天然產物多糖提取純化的
，具體的說，本專利技術涉及一種生物活性多糖提取純化的
，更進一步的說，本專利技術涉及阿魏菇生物多糖的提取純化的

技術介紹
阿魏菇是新疆地區特色生物資源之一，因其生長在新疆草原干旱植物阿魏上而得名，阿魏菇真菌多糖具有增強人體免疫力和調節人體生理平衡的作用，深受人們的歡迎，是一種天然營養保健食品。阿魏菇味美可口，營養豐富，現有技術記載阿魏菇含有18種氨基酸，人體8種必需氨基酸全都具備，還含有多種微生素及鉀、納、鈣、磷、鎂、鋅、銅、硒等礦物質，蛋白質含量占干菇的20%。特別是阿魏菇真菌多糖的含量是其他食用菌的3-5倍。被譽為“草原上的牛肝菌”。多糖是天然生物高分子之一，廣泛存在于植物，動物和微生物組織中，自20世紀50年代發現其免疫調節及抗腫瘤活性后，多糖即成為當今生命科學研究熱點之一，而食用菌多糖具有抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、抗潰瘍、抗衰老、增強免疫力、降血壓、降血糖等多糖中勝利活性，是新藥和功能食品開發重要原料。天然多糖的分離提純，現有技術常見報道的熱水浸提法是提取多糖阿魏菇多糖常用方法。但是，傳統熱水浸提法存在提取時間長，溫度高，得率低等問題，針對這些不足，近年來，出現了超聲或微波輔助、超高壓、酶法，超聲—微波聯合萃取等新的提取技術與方法。超聲-微波協同萃取具有超聲波和微波功率獨立可調、定時定溫。適用于快速、高效、靶向合成指定化工單體及目標混合物，適用領域涉及中草藥物有效成分的萃取，萃取過程具有化學選擇性高、萃取效率高、有效成分損失率低、產物結晶度高等特點。聚酰胺是由酰胺聚合而成的一類高分子化合物，對酚類等富含酚羥基的化合物具有較強的吸附性，也能吸附蛋白質，因此對于多糖類物質的脫色和脫蛋白的效果。但目前聚酰胺層析柱尚未應于與阿魏菇粗多糖純化當中，相關報道和研究也在國內沒有見到。因此，探索和研究適口性好、溶水性好、不含油及任何添加劑、能耗低、實現鷹嘴豆粉工業化連續生產，工業化操作簡單的制備工藝過程具有重要的意義。
技術實現思路
針對目前未見利用超聲-微波協同萃取應用在阿魏菇多糖的提取純化
，也未見利用聚酰胺層析柱應用于阿魏菇粗多糖純化的研究現狀。本專利技術旨在于提供一種阿魏菇多糖的提取純化方法，利用超聲—微波提取結合真空干燥技術，利用聚酰胺層析柱純化、冷凍干燥得到純化后阿魏菇多糖，得到純度高、生物活性好、質量穩定的阿魏菇多糖產品，具有廣泛的應用價值。本專利技術通過以下技術方案實現的。本專利技術以干燥阿魏菇子實體經乙醇浸提，首次將超聲—微波聯用技術應用與阿魏菇多糖的提取，并利用響應面法優化了超聲—微波提取的主要技術參數提取溫度、提取時間和料液比，經醇沉、冷凍干燥，經過聚酰胺層析柱純化，去離子水洗脫，冷凍干燥得到純化后阿魏菇多糖，與傳統熱水浸提法相比較，多糖的含量和純度都有較大提高，并且應用本專利技術對阿魏菇多糖的純化方法對于后續多糖的活性研究影響很小，活性保留率較高。本專利技術具體提供一種阿魏菇多糖的提取純化方法，具體的制備方法如下：（1）將干燥阿魏菇子實體，用粉碎機粉碎并過篩，稱取過40目的阿魏菇粉末與80%乙醇按照料液比1：10—1:15（g/ml）80℃回流4h，濾除乙醇，殘渣減壓蒸發至干。（2）超聲—微波提取：利用響應面優化方法確定提取溫度、提取時間和料液比處理工藝條件：將步驟（2）得到的殘渣與水按照料液比1：15（g/ml）混合后移入超聲微波萃取儀中，聚酰胺用量粗多糖5倍體積，洗脫液為2倍柱體積去離子水，洗脫速度1.5ml/min，然后濾液離心過濾后將殘渣再次進行超聲微波提取，合并兩次濾液，再次離心后，取上清液，上清液去除雜質。（3）醇沉：向步驟（2）得到的上清液中加入95vt%工業酒精（體積百分濃度，下同）靜置12-24小時后，4000r/min冷凍離心15min得到沉淀物。（4）冷凍干燥：步驟（3）收集的沉淀物用3倍體積的去離子水溶解后放入真空冷凍干燥儀，在真空度-0.06MP至-0.08MP、溫度≤-40℃，在12-24小時處理完畢。（5）聚酰胺層析柱純化：將步驟（4）制備的沉淀物3倍去離子水溶解，形成的多糖粗提液,裝入聚酰胺層析柱中，聚酰胺用量粗多糖5倍體積，洗脫液為2倍柱體積去離子水，洗脫速度1.5ml/min時多糖得率為27.29%，多糖純度72.49%，蛋白脫除率62.35%。（6）濃縮干燥：將步驟（5）得到多糖洗脫液收集合并，并減壓蒸發濃縮，4000r/min冷凍離心15min得到濃縮液后，冷凍干燥得到純化后阿魏菇多糖。本專利技術采用將干燥阿魏菇子實體破碎粉碎、超聲—微波聯用技術提取、醇沉、冷凍干燥、聚酰胺層析柱純化等處理技術手段，盡管離不開現有技術的支持和啟發，但是超聲—微波聯合提取技術以及聚酰胺層析柱首次應用于純化工藝中阿魏菇子實體的工藝條件：提取溫度、提取時間和料液比，以及聚酰胺層析柱純化中的以多糖保留率，多糖純度，蛋白脫除率作為評價指標，確定最佳上樣量，去離子水用量，洗脫速率等工藝條件對于決定阿魏菇子實體多糖的品質都具有重要的作用，也是決定性因素，不能說采用的技術手段和工具是現有技術，進而否定本專利技術提供的整體制備阿魏菇子實體多糖的創新性，現有所有技術專利技術和創新都離不開現有技術的支撐和基礎。本專利技術利用響應面優化提取工藝條件，測定純化前后的多糖含量，多糖純度，蛋白脫含量為評價指標，確定吸附洗脫最佳條件：利用響應面優化提取工藝條件，測定純化前后的多糖含量，多糖純度，蛋白脫含量為評價指標，確定吸附洗脫最佳條件：聚酰胺用量，去離子水用量，洗脫速度，聚酰胺用量粗多糖5倍體積，洗脫液為2倍柱體積去離子水，洗脫速度1.5ml/min時多糖得率為27.29%，多糖純度72.49%，蛋白脫除率62.35%；洗脫吸附前多糖得率32.79%，多糖純度54.33%，蛋白含量5.79%。洗脫吸附后多糖含量40.68%，多糖純度72.49%，蛋白含量2.18%。可見，本專利技術提供的阿魏菇子實體多糖制備工藝中的各技術因素和技術參數都經過綜合考量和設計，本專利技術提供的阿魏菇子實體多糖的制備方法中各技術環節具有上下一體，任何技術步驟不可或缺，緊密不可分割的特點，不能任何取舍肢解其中的技術步驟。本專利技術通過實施如上提供的技術方案達到如下的有益效果：（1）本專利技術在制備阿魏菇子實體多糖時，將超聲—微波提取聯合聚酰胺層析柱純化工藝有機結合，揚長避短，合理組合，優勢互補，有效地克服現有提取工藝中存在的提取時間長，工序復雜，多糖損失率高所得多糖純度較低等問題：在實驗室以及在工業生產中，水提醇沉工序復雜需要水提，過濾，再水提，過濾合并濾液濃縮純化等工藝步驟提起時間長，勞動成本高，并且多糖提取率低，就目前研究結果表面阿魏菇多糖的得率一般在5%～25%，除此之外，所采用的純化手段一般為Sevag法以及利用Sephadex200等進行純化，存在有機物質殘留，純化所需材料成本高等問題，不適用于工業化大生產。本專利技術將超聲---微波聯用技術與聚酰胺層析柱純化技術兩項技術結合，揚長避短，合理組合，優勢互補，極大的提高了阿魏菇多糖的得率，多糖純度以及蛋白質的脫除率等在本專利技術中響應面得出的最佳工藝條件下;聚酰胺用量粗多糖5倍體積，洗脫液為2倍柱體積去離子水，洗脫速度1.5ml本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種阿魏菇多糖的提取純化方法，其特征在于，具體的制備方法如下：（1）將干燥阿魏菇子實體，用粉碎機粉碎并過篩，稱取過40目的阿魏菇粉末與80%乙醇按照料液比1：10至1:15（g/ml）80℃回流4h，濾除乙醇，殘渣減壓蒸發至干；（2）超聲—微波提取：將步驟（2）得到的殘渣與水按照料液比1：15（g/ml）混合后移入超聲微波萃取儀中，在超聲功率50W，提取溫度70℃，微波頻率2450MHz，功率70W，提取15min，然后濾液離心過濾后將殘渣再次進行超聲微波提取，合并兩次濾液，再次離心后，取上清液，上清液去除雜質；（3）醇沉：向步驟（2）得到的上清液中加入95vt%工業乙醇（體積百分濃度）靜置12?24小時后，4000r/min冷凍離心15min得到沉淀物；（4）冷凍干燥：步驟（3）收集的沉淀物，3倍去離子水溶解后，放入真空冷凍干燥儀，在真空度?0.06?MP至?0.08MP、溫度≤?40℃，在12?24小時處理完畢；（5）聚酰胺層析柱純化：將步驟（4）中沉淀物3倍體積去離子水溶解，溶解形成的多糖粗提液,然后裝入聚酰胺層析柱中利用響應面優化方法測定純化前后的多糖含量，多糖純度，蛋白脫含量為評價指標，確定吸附洗脫最佳條件：聚酰胺用量，去離子水用量，洗脫速度，得到當聚酰胺用量粗多糖5倍體積，洗脫液為2倍柱體積去離子水，洗脫速度1.5ml/min時多糖得率為27.29%?，多糖純度72.49%?，蛋白脫除率62.35%?；（6）濃縮干燥：將步驟（5）得到多糖洗脫液收集合并，并減壓蒸發濃縮，4000r/min冷凍離心15min得到濃縮液后，冷凍干燥得到純化后阿魏菇多糖。...

【技術特征摘要】
1.一種阿魏菇多糖的提取純化方法，其特征在于，具體的制備方法如下：(1)將干燥阿魏菇子實體，用粉碎機粉碎并過篩，稱取過40目的阿魏菇粉末與80％乙醇按照料液比1g：10ml至1g:15ml80℃回流4h，濾除乙醇，殘渣減壓蒸發至干；(2)超聲—微波提取：將步驟(1)得到的殘渣與水按照料液比1g：15ml混合后移入超聲微波萃取儀中，在超聲功率50W，提取溫度70℃，微波頻率2450MHz，功率70W，提取15min，然后離心過濾后將殘渣再次進行超聲微波提取，合并兩次濾液，再次離心后，取上清液，上清液去除雜質；(3)醇沉：向步驟(2)得到的上清液中加入95vol％工業乙醇(體積百分濃度)靜置12-24小時后，4000r/...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王亮，陳義勇，張偉豐，丁慧玲，許丹丹，買吾拉江，
申請(專利權)人：新疆大學，王亮，
類型：發明
國別省市：新疆;65