一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌及其應用，屬于微生物領域。本發明專利技術的耐高溫高濕的布拉迪酵母菌(Saccharomyces?boulardii)，其保藏編號為CGMCC?No.10381，所述布拉迪酵母菌其株增殖速度、最大生物量(即菌體最終密度)都顯著高于同類釀酒酵母菌株，并且具有很強的耐高溫耐濕的能力，使本發明專利技術的布拉迪酵母可以作為飼料添加劑，并在進行高溫高濕處理過程中保存較高的活性。本發明專利技術的布拉迪酵母菌微膠囊可提高肉雞的日增重、免疫器官指數、疾病抵抗力、抗氧化性、免疫球蛋白，并且對畜禽均無毒副作用，且來源廣，價格便宜可作為飼料添加劑替代抗生素使用。

【技術實現步驟摘要】
一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌及其應用
本專利技術涉及一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌及其應用，屬于微生物領域。
技術介紹
布拉迪酵母菌，又稱布拉氏酵母(Saccharomycesboulardii)屬于釀酒酵母的一個亞種，其沒有病原性，能在37℃高溫下良好生長，并具有獨特的生物活性。布拉迪酵母菌能夠有效地治療人和動物的各種腹瀉，且未發現不良反應。布拉迪酵母菌進入人和動物腸道后，不僅可以降解致病菌產生的毒素和中和細菌毒素，還能夠刺激腸道黏膜從而增強免疫功能，同時調節腸道內微生態環境的平衡，阻止病原菌的侵襲，且布拉迪酵母菌制劑屬于天然微生態制劑，不僅無毒副作用，還可以提供一定的營養物質。因此，布拉迪酵母菌在畜牧業上的應用越來越廣泛。布拉迪酵母菌作為益生菌中唯一的真菌，對提高畜禽生長性能有顯著效果，可用于改善單胃動物營養和健康的飼料添加劑。但是布拉迪酵母菌在生長過程中，不形成芽胞，抗逆性較差，在液體條件下難以長期保存。在體內，作為外源菌，受胃腸道環境影響較大，容易丟失活性，從而失去其益生功效。中國專利文獻CN104388325A公開了一株飼用布拉氏酵母，命名為：布拉氏酵母(Saccharomycesboulardii)SH94，保藏號為CCTCCNo：M2014211。上述布拉氏酵母從華中農業大學果園根際土壤中分離，并應用于制備仔豬飼料添加劑。所述布拉氏酵母(Saccharomycesboulardii)SH94具有較強的耐胃液腸液的能力，但是其在40℃處理6h，存活率達到60％，在70℃處理2min及在80℃處理30s后，存活率維持在60％，該菌株具有一定的耐熱能力，但是耐熱性不是很強。在實際應用中，布拉氏酵母產品在添加使用于配合顆粒飼料時，往往要經過高溫高濕的制粒處理，此過程中布拉氏酵母活性會大量的喪失，會導致產品中有效成分損失較大，產品的保質期也較短，限制了其大規模應用。
技術實現思路
為此，本專利技術針對于現有技術中布拉迪酵母菌在添加入飼料時高溫高濕處理過程中活性降低的問題，提供一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌。為實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案：一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌(Saccharomycesboulardii)，其保藏編號為CGMCCNo.10381，該菌株已于2015年1月21日送至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)保藏，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。所述耐高溫高濕的布拉迪酵母菌(Saccharomycesboulardii)通過以下方法分離篩選得到：將荔枝皮粉碎，并將一定量荔枝皮粉碎物在含有50μg/mL氨芐青霉素的(YPD)液體培養基中28℃好氧培養至培養基呈混濁狀態，取適當培養及稀釋后涂平板，根據菌落形態挑取典型酵母菌單菌落(白色，大小1-2mm，濕潤隆起，有酒香味)，通過鏡檢粗篩出酵母菌。通過生理生化、16SrDNA測序分析，最終篩選到一株布拉氏酵母(Saccharomycesboulardii)。該菌株已于2015年1月21日送至中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。其保藏編號為CGMCCNo.10381，建議的分類名為布拉迪酵母菌(Saccharomycesboulardii)。該菌株具體有典型的布拉氏酵母形態特征：該菌株在YPD瓊脂糖固體培養基上繁殖形成的菌落為圓形，大而濕潤，呈乳白色，光滑，邊緣清晰，生長迅速；鏡檢顯示細胞個體較大，呈近球形，多邊芽殖。生理生化特征：發酵葡萄糖。耐熱能力實驗結果顯示布拉迪酵母菌在100％濕度、75℃和85℃下處理1min(圖4)后，菌粉產品在100％濕度75℃和85℃處理1min存活率分別可達58.4％和57.9％。在110℃和130℃高溫下分別處理30s、45s和60s，結果表明，該布拉迪酵母菌存活率保持在64-83％(圖4B)。耐人工胃液和腸液能力實驗結果顯示布拉迪酵母菌在pH2.0的人工合成胃液中處理30min、90min和180min后存活率降至29.1％、23.5％和18.2％(5A)。在模擬腸液中處理30min、90min和180min后，布拉迪酵母菌存活率降至80.61％、65.42％和41.68％。以上生理生活化結果表明，該布拉迪酵母菌具有很好的高溫高濕耐受力和較高的腸環境耐受力。但胃環境耐受力較弱。一種布拉迪酵母菌添加劑，含有上述的布拉迪酵母菌。上述布拉迪酵母菌添加劑中，含有上述布拉迪酵母菌的微膠囊。上述布拉迪酵母菌添加劑中，所述布拉迪酵母菌的微膠囊的制備方法包括步驟如下：(1)將布拉迪酵母菌菌液加入到海藻酸鈉-碳酸鈣溶液中，得到濃度為1×106cfu/mL菌液作為水相；將表面活性劑Span80分散于液體石蠟中作為油相，往油相中加入水相，以400rpm攪拌5min形成穩定的乳化液；向其中加入冰醋酸酸解碳酸鈣解離出Ca2+，與海藻酸鈉產生凝膠化反應，形成海藻酸鈣微膠囊，固定化時間為10min；最后去離子水多次沖洗，通過分液漏斗分離沉降海藻酸鈣微膠囊；(2)將海藻酸鈣微膠囊加入到培養基中，培養微膠囊化的布拉迪酵母菌至菌體充滿微膠囊內部80％以上的空間，過濾分離得到微膠囊。一種布拉迪酵母菌微膠囊培養方法，將上述的布拉迪酵母菌包于微膠囊中，然后在YPD培養基中，28℃下，好氧培養微膠囊化的布拉迪酵母菌。上述述的耐高溫高濕的布拉迪酵母菌或上述布拉迪酵母菌添加劑在制備動物飼料添加劑中的用途。上述用途中，所述動物為肉雞。上述耐高溫高濕的布拉迪酵母菌或上述布拉迪酵母菌添加劑在家禽飼養中作為抗生素使用的用途。上述的耐高溫高濕的布拉迪酵母菌或上述布拉迪酵母菌添加劑在制備抗生素藥物中的用途。與現有技術相比，本專利技術具有以下優點：1、本專利技術的保藏編號為CGMCCNo.10381的布拉迪酵母(Saccharomycesboulardii)具有較高的活性，其株增殖速度、最大生物量(即菌體最終密度)都顯著高于同類釀酒酵母菌株，并且具有很強的耐高溫耐濕的能力：本專利技術的布拉迪酵母菌在100％濕度75℃和85℃處理1min存活率分別可達58.4％和57.9％；在110℃和130℃高溫下分別處理30s、45s和60s，存活率保持在64-83％，上述耐高溫耐濕的能力使本專利技術的布拉迪酵母作為飼料添加劑在進行高溫高濕處理過程中保存較高的活性。2、本專利技術的布拉迪酵母菌添加劑含有布拉迪酵母菌的微膠囊，為了提高本申請的布拉迪酵母的胃腸環境能力耐受性，將布拉迪酵母菌進行微囊化，提供了布拉迪酵母菌微膠囊，所述布拉迪酵母菌微膠囊：(1)將布拉迪酵母菌通過微囊化轉變成一種穩定的細粉顆粒，改變微生態制劑產品的形態，這種微膠囊產品具有良好的流動性和分散性，很容易與其它飼料混合均勻，便于運輸、貯存和添加使用；(2)微膠囊化后的酵母菌耐酸性和熱穩定性得到提高，由于微膠囊的保護，能夠有效地防止菌體失活，提高布拉迪酵母菌產品的穩定性。在體內，還能防止胃液的破壞，從而使盡可能多的菌體到達腸道，真正起到保健和治療的作用；(3)可將配伍禁忌的各種成分在同一產品中隔開。(4)使不溶于水的物質能均勻地分散在水溶性介質中。本專利技術的微膠囊對畜禽均無毒副作用，且來源廣，價格便宜可作為飼料添加劑替代抗生素使用，可提高肉雞的日增重、本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌(Saccharomyces?boulardii)，其保藏編號為CGMCC?No.10381。

【技術特征摘要】
1.一株耐高溫高濕的布拉迪酵母菌（Saccharomycesboulardii），其保藏編號為CGMCCNo.10381。2.一種布拉迪酵母菌添加劑，其特征在于，含有權利要求1所述的布拉迪酵母菌。3.根據權利要求2的布拉迪酵母菌添加劑，其特征在于，含有權利要求1所述的布拉迪酵母菌的微膠囊。4.根據權利要求3所述的布拉迪酵母菌添加劑，其特征在于，所述布拉迪酵母菌的微膠囊的制備方法包括步驟如下：（1）將布拉迪酵母菌菌液加入到海藻酸鈉-碳酸鈣溶液中，得到濃度為1×106cfu/mL菌液作為水相；將表面活性劑Span80分散于液體石蠟中作為油相，往油相中加入水相，以400rpm攪拌5min形成穩定的乳化液；向其中加入冰醋酸酸解碳酸鈣解離出Ca2+，與海藻酸鈉產生凝膠化反應...

【專利技術屬性】
技術研發人員：魏永剛，
申請(專利權)人：魏永剛，
類型：發明
國別省市：北京;11