一種檢測微生物時定量稀釋的方法技術

本發(fā)明專利技術公開了一種檢測微生物時定量稀釋的方法，旨在提供一種能有效減少人員之間的誤差，避免由不確定度控制定量結果的檢測微生物時定量稀釋的方法；其技術要點依次包括下述步驟：1)吸取樣品前先將樣品搖均勻后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液體沿壁放人裝有稀釋液的試管A中，分度吸管棄去，作為1:10供試液；2)將試管A放置渦旋混合器上進行漩渦，當漩渦到達試管底部時立刻移開試管，用分度吸管吸吹3次后量取1ml液體沿壁放去裝有稀釋液的試管B中，分度吸管棄去，作為1:100供試液；3)下一級稀釋時重復步驟1)或/和步驟2)；屬于微生物檢測技術領域。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術公開了一種稀釋方法，具體地說，是，屬 于微生物檢測

技術介紹
微生物群體非常龐雜，種類繁多，包括細胞型和非細胞型兩類。凡具有細胞形態(tài)的 微生物稱為細胞型微生物。細胞型微生物按細胞結構又分為原核微生物和真核微生物。原 核生物的主要特點：細胞內有明顯的核區(qū)，但沒有核膜包圍；核區(qū)內含有一條雙鏈DNA構成 的染色體；能量代謝和很多合成代謝均在質膜上進行，核糖體分布在細胞之中；相對于原 核微生物，真核微生物的細胞結構有了真正的細胞核，有多種細胞器；而病毒則不具有細 胞結構，由核酸和蛋白質組成，可以認為是超顯微的、沒有細胞結構的、專性活細胞內寄生 的實體。它們在活細胞外具有一般化學大分子的特征，在宿主細胞內又具有生命特征。可以 作為了解的是，病毒可以通過細菌濾器，且對抗生素不敏感，對干擾素敏感。二、細菌、霉菌、 酵母菌和致病菌介紹細菌的細胞結構在原核生物中具有代表性，主要由細胞壁、細胞膜、細 胞質、核質體等部分構成，有的細菌還有夾膜、鞭毛、菌毛等特殊結構。在自然界中細菌是 分布最廣、數(shù)量最多的一類生物，并與食品關系最為密切。是食品理論、工業(yè)發(fā)酵和釀造研 宄的主要對象，也是導致食品腐敗的主要類群。細菌的基本形態(tài)有球狀、桿狀和螺旋狀，分 別被稱為球菌、桿菌和螺旋菌。霉菌是一些絲狀真菌的統(tǒng)稱。在自然界分布極廣，它的營養(yǎng) 來源主要是糖類和少量氮、礦物鹽等，極易在含糖的食品、餅干、面包和各種谷物、水果上生 長。經(jīng)常會有食品會因為發(fā)生霉變而不能食用，還有些霉菌會產(chǎn)生毒性很大的毒素，比如黃 曲霉素、黃米毒素、雜色曲霉素和展青霉素等等，都可能導致癌癥，這類霉菌在大米和花生 中最多。由此，對霉菌的檢測尤為重要。霉菌菌體是由分支或不分支的菌絲組成，菌絲細胞 均由細胞壁、細胞膜、細胞質、細胞核、線粒體、核糖體以及內含物組成。因此，對食物中的微 生物檢測尤為重要。
技術實現(xiàn)思路
針對上述問題，本專利技術的目的在于提供一種能有效減少人員之間的誤差，避免由 不確定度控制定量結果的檢測微生物時定量稀釋的方法。 為此，本專利技術提供的技術方案是這樣的： ，依次包括下述步驟 1)吸取樣品前先將樣品搖均勻后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液體沿壁放人裝 有稀釋液的試管A中，分度吸管棄去，作為1:10供試液； 2)將試管A放置渦旋混合器上進行漩渦，當漩渦到達試管底部時立刻移開試管， 用分度吸管吸吹3次后量取lml液體沿壁放去裝有稀釋液的試管B中，分度吸管棄去，作為 1:100供試液； 3)下一級稀釋時重復步驟1)或/和步驟2)。 進一步的，上述的檢測微生物時定量稀釋的方法，步驟1)所述的將樣品搖均勻是 將樣品順、反時針各搖20次。 進一步的，上述的檢測微生物時定量稀釋的方法，步驟1)所述的將樣品搖均勻是 均質袋樣品左右搖勻。 與現(xiàn)有技術相比，本專利技術提供的技術方案能有效減少人員之間的誤差，避免由不 確定度控制定量結果的問題，提高了檢測的精確度和準確率。【具體實施方式】 下面結合【具體實施方式】對本專利技術的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對本 專利技術的任何限制，任何人在本專利技術權利要求保護范圍之內所做的有限次修改仍在本專利技術的 權利要求保護范圍之內。 實施例1 1 目的 本專利技術的目的是為了規(guī)范本實驗室各類樣品的微生物定量稀釋操作，減少人員之 間的誤差，并由不確定度控制定量結果。 2適用范圍 各類樣品的微生物定量時的稀釋步驟，主要用于菌落計數(shù)、酵母和霉菌的計數(shù)等 稀釋操作。 3?儀器 渦旋混合器、分度吸管 4操作步驟 4. 1吸取樣品前先將樣品順、反時針各搖20次，使其均勻后（若樣品使用均質袋等 盛裝的則左右搖勻即可）用分度吸管吸吹3次，量取lml液體沿壁放人裝有稀釋液的試管 A中，分度吸管棄去，作為1:10供試液。 所述的稀釋液根據(jù)檢測樣品確定，均按照本領域常規(guī)稀釋液選擇。 4. 2將試管A放置渦旋混合器上進行漩渦，當漩渦到達試管底部時立刻移開試管。 用分度吸管吸吹3次后量取lml液體沿壁放去裝有稀釋液的試管B中，分度吸管棄去，作為 1:100供試液。 4. 3稀釋下一級時同4. 1操作或者4. 2操作，或者按照4. 1，4. 2操作順次進行，具 體操作根據(jù)本領域的檢測樣品濃度的要求。 5注意事項 5. 1吸取樣品前需使其均勻后方可吸液。 5. 2每次將液體轉移到下一級的試管后，所用的分度吸管即可棄去不需要吹洗。 5. 3加液至平皿時亦需要吸吹3次后才能進行。 6偏離范圍 6. 1菌落計數(shù)、酵母菌計數(shù) 6. 1. 1適用于30~300CFU的平板。 6. 1. 2同一份樣品，不同實驗人員間的結果差異：當平均值小于100CFU時，以超出 平均值±15CFU為偏離范圍；當平均值大于等于100CFU時，以超出平均值的±18%為偏離 范圍。 6. 2霉菌計數(shù) 6. 2. 1適用于小于100CFU的平板。 6. 2. 2同一份樣品，不同實驗人員間的結果差異：以超出平均值±15CFU為偏離范 圍。 6. 3超出偏離范圍的值不可信，不納入不確定度的計算。實驗人員需尋找原因，或 進行再培訓，重新實驗。 7不確定度 7. 1不確定度來源 菌落計數(shù)檢驗的不確定度來源主要為培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)基類型、稀釋方 法、樣品重現(xiàn)性以及人員操作等，由于本方法為同一份樣品，由不同實驗人員在同一時間、 同一地點、相同環(huán)境下按相同的稀釋方法進行，而且培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、所用培養(yǎng)基均一 致，其帶來的影響均可忽略不計。故本方法的不確定度只考慮為人員間的操作所帶來的誤 差。 7. 2本方法的擴展不確定度為：U95= 0? 019 (以對數(shù)表示） 則菌落數(shù)可表示為：lgX=lg X ± 0.019 7. 3 實例 如：測得樣品菌落數(shù)分別為48CFU/ml和52CFU/ml，則取對數(shù)之后分別為1. 681 和1. 716,對數(shù)平均值為1. 699,則以對數(shù)表示時的取值范圍為lgX = 1. 699±0. 019,即 1. 680~1. 718,取反對數(shù)后可得到依本方法不確定度計算出來的菌落數(shù)（48~52) CFU/ml。【主權項】1. ，其特征在于，依次包括下述步驟 1) 吸取樣品前先將樣品搖均勻后，用分度吸管吸吹3次，量取Iml液體沿壁放人裝有稀 釋液的試管A中，分度吸管棄去，作為1:10供試液； 2) 將試管A放置渦旋混合器上進行漩渦，當漩渦到達試管底部時立刻移開試管，用分 度吸管吸吹3次后量取Iml液體沿壁放去裝有稀釋液的試管B中； 3) 下一級稀釋時重復步驟1)或/和步驟2)。2. 根據(jù)權利要求1所述的檢測微生物時定量稀釋的方法，其特征在于，步驟1)所述的 將樣品搖均勻是將樣品順、反時針各搖20次。3. 根據(jù)權利要求1所述的檢測微生物時定量稀釋的方法，其特征在于，步驟1)所述的 將樣品搖均勻是均質袋樣品左右搖勻。【專利摘要】本專利技術公開了，旨在提供一種能有效減少人員之間的誤差，避免由不確定度控制定量結果的檢測微生物時定量稀釋的方法；其技術要點依次包括下述步驟：1)吸取樣品前先將樣品搖均勻后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液體沿壁放人裝有稀釋液的試管A中，分度吸管棄去，作為1:10供試液；2)將試管A放置渦旋混合器上進行漩渦，當漩渦到達試管底部時立刻移開本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種檢測微生物時定量稀釋的方法，其特征在于，依次包括下述步驟1)吸取樣品前先將樣品搖均勻后，用分度吸管吸吹3次，量取1ml液體沿壁放人裝有稀釋液的試管A中，分度吸管棄去，作為1:10供試液；2)將試管A放置渦旋混合器上進行漩渦，當漩渦到達試管底部時立刻移開試管，用分度吸管吸吹3次后量取1ml液體沿壁放去裝有稀釋液的試管B中；3)下一級稀釋時重復步驟1)或/和步驟2)。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：陳學松，羅達龍，黃林杰，劉慧妍，
申請(專利權)人：廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所，
類型：發(fā)明
國別省市：廣西;45