白喉烏頭生物堿的分離方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開一種白喉烏頭生物堿的分離方法，所述生物堿為N-去乙酰冉烏堿和贛烏堿，包括如下步驟：白喉烏頭乙醇提取物用鹽酸混懸，脫脂后調(diào)節(jié)pH至8，再用二氯甲烷萃?。惠腿『蟮亩燃淄橄噙^硅膠柱，用體積比為7:3:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脫，收集洗脫液過反相硅膠柱，用體積比為5:5～9:1的甲醇-水混合液梯度洗脫，收集甲醇-水體積比為8:2時(shí)的洗脫液，再濃縮至干，再用甲醇溶解，經(jīng)高效液相色譜分離得到所述的生物堿，色譜條件：波長252nm，流動(dòng)相體積比為82:18:0.5的甲醇-水-三乙胺。與現(xiàn)有方法相比，采用該方法從白喉烏頭中首次分離得到N-去乙酰冉烏堿和贛烏堿。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于植物藥成分提取領(lǐng)域，具體涉及從白喉烏頭中分離純化生物堿的方法。
技術(shù)介紹
白喉烏頭(學(xué)名：Aconitum?leucostomum?Worosch.)是草本植物，莖高約1米，基生葉約1枚，葉片形狀與高烏頭極為相似，葉柄長20-30厘米。總狀花序長20-45厘米，有多數(shù)密集的花；基部苞片三裂，其他苞片線形，萼片淡藍(lán)紫色，下部帶白色，上萼片圓筒形，花絲全緣；心皮3，種子倒卵形，有不明顯3縱棱，生橫狹翅。7-8月開花。生海拔1400-2550米間山地草坡或山谷溝邊。分布于哈薩克斯坦和中國新疆、甘肅?！豆_克藥志》記載白喉烏頭具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛的功能，用于風(fēng)寒濕痹等疾患，為西北少數(shù)民族的常用民間草藥之一。白喉烏頭為劇毒藥材，炮制后方能入藥，其所含的烏頭堿類成分，是抗炎鎮(zhèn)痛的有效成分，因此，對白喉烏頭中烏頭堿類成分的分離純化對于其藥物研究具有積極的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種從白喉烏頭中分離生物堿的方法。本專利技術(shù)為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案如下：白喉烏頭生物堿的分離方法，所述生物堿為N-去乙酰冉烏堿和贛烏堿，包括如下步驟：(1)白喉烏頭乙醇提取物用鹽酸混懸，脫脂后調(diào)節(jié)pH至8，再用二氯甲烷萃??；(2)步驟(1)萃取后的二氯甲烷相過硅膠柱，用體積比為7:3:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脫，收集洗脫液；(3)步驟(2)收集的洗脫液過反相硅膠柱，用體積比為5:5～9:1的甲醇-水混合液梯度洗脫，收集甲醇-水體積比為8:2時(shí)的洗脫液；(4)步驟(3)收集的洗脫液濃縮至干，再用甲醇溶解，經(jīng)高效液相色譜分離得到所述生物堿，色譜條件：波長252nm，流動(dòng)相體積比為82:18:0.5的甲醇-水-三乙胺。進(jìn)一步，步驟(1)中所述白喉烏頭乙醇提取物由白喉烏頭經(jīng)乙醇浸提得到。進(jìn)一步，步驟(1)白喉烏頭乙醇提取物用濃度為2～5wt％的鹽酸進(jìn)行混懸。進(jìn)一步，步驟(1)中混懸液用石油醚萃取脫脂。進(jìn)一步，步驟(3)梯度洗脫優(yōu)選為依次用體積比為5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇-水洗脫。進(jìn)一步，步驟(4)采用制備型高效液相色譜進(jìn)行分離。具體實(shí)施方式以下結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)做進(jìn)一步詳細(xì)說明。實(shí)施例1(1)取白喉烏頭根(20.0kg)，粉碎(過20目篩)，95wt％乙醇冷浸提取3次，每次7天，合并提取液，經(jīng)薄膜蒸發(fā)器濃縮后得到白喉烏頭乙醇提取物。所得的白喉烏頭乙醇提取物再用濃度為2wt％HCl混懸，混懸液用石油醚萃取脫脂，脫脂后剩余的水相用氨水調(diào)pH至8，再二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷萃取液，得PH8部位。(2)所得PH8部位拌樣過硅膠柱色譜，用體積比為7:3:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脫，流速為20ml/min，以每次收集1000ml計(jì)，將第8～25次收集的洗脫液合并。(3)將步驟(2)合并的洗脫液過反相硅膠柱(ODS柱)色譜，用體積比為5:5～9:1的甲醇-水混合液梯度洗脫(依次用體積比為5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇-水洗脫)，以每次收集100ml計(jì)，將甲醇-水體積比為8:2時(shí)的第3～9次收集的洗脫液合并。(4)將步驟(3)收集的洗脫液濃縮至干，再用甲醇溶解，配制成50mg/ml溶液，再用高效液相色譜分離(制備HPLC，色譜柱：YMC-Pack?ODS-A(5μm,內(nèi)徑：250×30mm))得到化合物WF-14(226mg)和化合物WF-15(14mg)，色譜條件為：檢測波長252nm，流動(dòng)相體積比為82:18:0.5的甲醇-水-三乙胺?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)鑒定化合物WF-14的結(jié)構(gòu)鑒定白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。mp.125～127℃。ESI/MS給出分子離子峰m/z:558[M]+，根據(jù)氮規(guī)則，推斷該化合物中含有偶數(shù)個(gè)氮原子，結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C30H42N2O8。不飽和度為11。NMR顯示其為C18-冉烏寧堿型二萜生物堿。核磁共振譜顯示有1個(gè)氮乙基1.52(3H,t,J＝25.2Hz)；碳譜顯示有7個(gè)含氧取代信號為78.13(C-8),78.53(C-9),82.83(C-16),83.07(C-1),83.88(C-4),85.54(C-7),90.27(C-14)；3個(gè)甲氧基(δH3.32,3.35,3.37,3H,s)，分別與C1、C14、C16存在相關(guān)峰。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中的N-去乙酰冉烏堿(N-deacetylranaconitine)基本一致，13C核磁共振譜化學(xué)位移基本一致。故鑒定為N-去乙酰冉烏堿，結(jié)構(gòu)式如下：1H?NMR(500MHz，CDCl3)δ:1.52(3H，t，J＝25.2Hz，N-CH2CH3)，3.32(6H,s,2×-OCH3),3.35、3.37(各3H,s,-OCH3),3.60(1H,t,J＝9.2Hz,14-βH)。13C?NMR(100MHz,CDCl3)δ:14.98(C-22),26.18(C-12),26.88(C-2),32.01(C-3),32.82(C-6),36.97(C-13),38.26(C-15),49.17(C-5),49.95(C-10),51.46(C-21),51.51(C-11),55.69(C-19),56.40(C-16'),56.46(C-1'),58.21(C-14'),63.46(C-17),78.13(C-8),78.53(C-9),82.83(C-16),83.07(C-1),83.88(C-4),85.54(C-7),90.27(C-14),112.10(C-1\),116.50(C-3\),116.90(C-5\),131.79(C-\6),134.10(C-4\),150.68(C-2\),167.67(ArCO)?；衔?5(WF-15)的結(jié)構(gòu)鑒定白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。mp.219～221℃。ESI/MS給出分子離子峰m/z:616[M]+，根據(jù)氮規(guī)則，推斷該化合物中含有偶數(shù)個(gè)氮原子，結(jié)合核磁數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C32H44N2O10。不飽和度為12。NMR顯示其為C18-冉烏寧堿型二萜生物堿。核磁共振譜顯示有1個(gè)氮乙基1.15(3H,t,J＝7Hz)；碳譜顯示有8個(gè)含氧取代信號為76.62(C-7),77.71(C-1),78.41(C-10),79.10(C-9),82.60(C-16),84.12(C-4),84.42(C-8),87.67(C-14)；1個(gè)甲基(δH2.21,3H,s,與C＝O相連本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
白喉烏頭生物堿的分離方法，所述生物堿為N?去乙酰冉烏堿和贛烏堿，包括如下步驟：（1）白喉烏頭乙醇提取物用鹽酸混懸，脫脂后調(diào)節(jié)pH至8，再用二氯甲烷萃??；（2）步驟（1）萃取后的二氯甲烷相過硅膠柱，用體積比為7:3:0.5的石油醚?乙酸乙酯?二乙胺混合液洗脫，收集洗脫液；（3）步驟（2）收集的洗脫液過反相硅膠柱，用體積比為5:5～9:1的甲醇?水混合液梯度洗脫，收集甲醇?水體積比為8:2時(shí)的洗脫液；（4）步驟（3）收集的洗脫液濃縮至干，再用甲醇溶解，經(jīng)高效液相色譜分離得到所述的生物堿，色譜條件：波長252nm，流動(dòng)相?體積比為82:18:0.5的甲醇?水?三乙胺。

【技術(shù)特征摘要】
1.白喉烏頭生物堿的分離方法，所述生物堿為N-去乙酰冉烏堿和贛烏堿，包括如下步驟：
（1）白喉烏頭乙醇提取物用鹽酸混懸，脫脂后調(diào)節(jié)pH至8，再用二氯甲烷萃?。?br>（2）步驟（1）萃取后的二氯甲烷相過硅膠柱，用體積比為7:3:0.5的石油醚-乙酸乙酯-二乙胺混合液洗脫，收集洗脫液；
（3）步驟（2）收集的洗脫液過反相硅膠柱，用體積比為5:5～9:1的甲醇-水混合液梯度洗脫，收集甲醇-水體積比為8:2時(shí)的洗脫液；
（4）步驟（3）收集的洗脫液濃縮至干，再用甲醇溶解，經(jīng)高效液相色譜分離得到所述的生物堿，色譜條件：波長252nm，流動(dòng)相?體積比為82:18:0.5的甲醇-水-三乙胺。
2.根據(jù)權(quán)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：聶繼紅，汪芳，趙翡翠，
申請(專利權(quán))人：新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：新疆;65